楊志歡，蘇加樂

（廣西慧寶源醫(yī)藥科技有限公司，廣西 欽州 535000）

開胃消食口服液收載于國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)［WS-398（Z-054）-2019Z］，原標(biāo)準(zhǔn)中樣品的提取方法為萃取，由于萃取的過程中樣品乳化嚴(yán)重，對含量測定的結(jié)果影響較大。因此，本研究擬優(yōu)化提取方法，并在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加川陳皮素的含量測定，即采用高效液相色譜（HPLC）法同時測定橙皮苷和川陳皮素兩種成分的含量，旨為更有效、全面地評價和控制開胃消食口服液的質(zhì)量。

1 實驗材料

1.1 儀器Waters2695高效液相色譜儀（包括2695四元梯度泵、2489紫外檢測器、自動進樣器、在線脫氣機、柱溫箱、Empower色譜工作站）；德國ELMA S120H超聲儀、Milli-Q超純水儀、XS205DU型十萬分之一天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥與試劑 開胃消食口服液，由廣西慧寶源醫(yī)藥科技有限公司提供；橙皮苷對照品（批號110721-202019，純度95.3%，供含量測定用）由中國藥品生物制品檢定所提供；川陳皮素對照品（批號112055-202102，純度99.7%，供含量測定用）由中國藥品生物制品檢定所提供；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 混合對照品溶液的制備 精密稱取川陳皮素9.75 mg，置于10 ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，搖勻，作為川陳皮素儲備液。精密稱取橙皮苷16.64 mg，再精密吸取川陳皮素儲備液5.0 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 ml含橙皮苷317.16 μg、川陳皮素97.21 μg的混合對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 精密量取開胃消食口服液10 ml，置25 ml量瓶中，加10 ml甲醇溶解，超聲處理（功率：200 W；頻率：37 kHz）10 min，再加甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方及工藝制備缺陳皮的陰性樣品，精密吸取陰性樣品10 ml，置于25 ml量瓶中，按2.2項方法制備陰性樣品溶液。

2.4 色譜條件 色譜柱為ZORBAX Extend-C18（5 μm，4.6mm×250 mm）；流動相為乙腈（A）和0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～12 min，A20%；12～18 min，A20%～45%；18～30 min，A45%～60%；30～35 min，A60%）；流速1.0 ml/min，檢測波長209 nm，柱溫30℃，進樣量10 μl。在該色譜條件下，分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果各色譜峰分離效果良好，在橙皮苷、川陳皮素出峰的時間均無雜質(zhì)峰干擾。色譜圖見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察 精密吸取上述混合對照品溶液0.2 ml、0.5 ml、1 ml、2 ml、5 ml、10 ml，分別置于6個10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液L1～L6。精密吸取上述溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，測定，以對照品的進樣濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），求得橙皮苷回歸方程為Y=37 530.04X-11 715.46（r=0.999 9），表明橙皮苷在6.34～317.20 μg/ml濃度內(nèi)線性關(guān)系良好。川陳皮素回歸方程為Y=59 535.32X-29 938.31（r=0.999 6），表明川陳皮素在1.94～97.21 μg/ml濃度內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.2 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液（批號：201203），連續(xù)注入液相色譜儀6次，測定橙皮苷、川陳皮素的峰面積。結(jié)果橙皮苷的RSD為1.7%（n=6）、川陳皮素的RSD為0.1%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗 精密吸取同一供試品溶液（批號：201203）10 μl，共6份，注入液相色譜儀，計算橙皮苷和川陳皮素的含量，結(jié)果橙皮苷的平均含量為203.34 μg/ml，RSD為1.8%（n=6）；川陳皮素的平均含量為49.91 μg/ml，RSD為1.1%（n=6），結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗 取重復(fù)性試驗中供試品溶液，分別在室溫下放置1 h、3 h、12 h、24 h、35 h、51 h后進樣測定峰面積，并計算橙皮苷、川陳皮素的含量測定，結(jié)果橙皮苷含量的RSD為1.5%（n=6），川陳皮素含量的RSD為0.8%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置51 h穩(wěn)定。

2.5.5 加樣回收率試驗 取已知含量的開胃消食口服液（批號：201203）6份，精密吸取供試品5 ml，置25 ml量瓶中，精密加入橙皮苷、川陳皮素混合對照品溶液（橙皮苷的含量為317.2 μg/ml、川陳皮素的含量為97.2 μg/ml）3 ml，按2.2項方法制備供試品溶液。精密吸取上述溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，計算回收率，結(jié)果橙皮苷回收率為94.51%～99.20%，RSD為1.8%（n=6）；川陳皮素回收率為98.36%～101.78%，RSD為1.3%（n=6）。結(jié)果表明回收率好，準(zhǔn)確度高，見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果 （n=6）

2.6 樣品含量測定 取本品10批，按擬定的含量測定方法測定，結(jié)果見表2。10批樣品總黃酮含量以橙皮苷及川陳皮素計，平均含量為0.27 mg/ml，以平均含量下調(diào)30%作為其含量限值，即：0.27×（1-0.3）=0.19，因此擬定開胃消食口服液含橙皮苷及川陳皮素的總量不得少于0.19 mg/ml。

表2 10批開胃消食口服液含量測定結(jié)果

3 討論

本研究參考相關(guān)文獻及《中華人民共和國藥典》，根據(jù)實際情況，針對性地對原有含量測定方法進行優(yōu)化，考察了流動相、取樣量、提取方法、稀釋倍數(shù)、超聲時間、溶劑、溶劑濃度。最終確定以乙腈-0.1%磷酸溶液為流動相，取供試品10 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇超聲10 min提取最完全，且雜質(zhì)峰無干擾，穩(wěn)定性好，回收率良好，可作為開胃消食口服液的質(zhì)量控制方法。