腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在頭頸鱗狀細(xì)胞癌中的作用及治療策略研究進(jìn)展*

陳思霖，李 謙，包小敏，王劉倩，閆晶晶，季 迪 綜述，鄧安春 審校

(陸軍軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，重慶 400037)

目前普遍認(rèn)為，在惡性腫瘤的早期發(fā)生及其發(fā)展演化過(guò)程中，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages,TAM)通過(guò)釋放多種細(xì)胞因子，對(duì)腫瘤血管及淋巴管形成、腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等方面造成影響，且TAM的數(shù)量與腫瘤的惡性程度及不良預(yù)后間也存在密切聯(lián)系[1]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究者高度關(guān)注在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中TAM的動(dòng)態(tài)變化、表型、信號(hào)傳導(dǎo)通路和功能狀態(tài)，為探究頭頸鱗狀細(xì)胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)發(fā)病機(jī)制和尋求靶向TAM治療方案提供了可行的啟示和方法。

1 TAM的起源和類型

目前，有關(guān)巨噬細(xì)胞來(lái)源的普遍共識(shí)是：一方面可能來(lái)源于人類早期胚胎前體祖細(xì)胞，在胚胎生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，播種到周圍組織而產(chǎn)生的獨(dú)立種群；另一方面是從成人造血干細(xì)胞衍生的循環(huán)單核細(xì)胞[2]。近年來(lái)，F(xiàn)RANKLIN等[3]又提出，TAM在腫瘤組織中可分為組織駐留的TAM和腫瘤誘導(dǎo)的TAM。腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的巨噬細(xì)胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)，主要發(fā)揮募集巨噬細(xì)胞并將其誘導(dǎo)成TAM的作用，通過(guò)與其受體M-CSFR結(jié)合，將巨噬細(xì)胞募集到腫瘤間充質(zhì)中并改變自身表型，以適應(yīng)它們所處的微環(huán)境[4]。另外，細(xì)胞外基質(zhì)所產(chǎn)生的透明質(zhì)酸、凝血因子X(jué)、內(nèi)皮缺氧誘發(fā)因子1α等在許多實(shí)體惡性腫瘤中也起到募集TAM的作用。

TAM包括經(jīng)典活化的M1型巨噬細(xì)胞和替代活化的M2型巨噬細(xì)胞。M1型TAM的主要功能是破壞病原體并驅(qū)動(dòng)1型T輔助細(xì)胞反應(yīng)，對(duì)微生物和腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。當(dāng)巨噬細(xì)胞受到白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-4、IL-10、IL-13、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)等刺激時(shí)[5]，會(huì)促使其向M2型TAM極化，進(jìn)而分化為M2a、M2b和M2c三種亞型，發(fā)揮促進(jìn)血管新生、分泌免疫抑制因子及促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用。TAM的兩種極化狀態(tài)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中是可以相互轉(zhuǎn)化的。在惡性腫瘤發(fā)生的早期，腫瘤微環(huán)境中浸潤(rùn)的M1型TAM能提高免疫效應(yīng)，起到抗癌作用；而在惡性腫瘤進(jìn)展的晚期，TAM通常轉(zhuǎn)變?yōu)镸2表型，促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[6]。

2 TAM在HNSCC中的作用

HNSCC的高復(fù)發(fā)率和高轉(zhuǎn)移率是其主要治療難點(diǎn)。眾所周知，機(jī)體的自身免疫系統(tǒng)雖然能夠識(shí)別并清除腫瘤細(xì)胞，但由于腫瘤細(xì)胞自身的低免疫原性及分泌多種免疫抑制因子的特性，使其可以逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別。在利用免疫組化探索TAM與HNSCC的臨床相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)，M2型TAM通常高表達(dá)CD68和CD163兩種標(biāo)記物[7]，且其數(shù)量與HNSCC患者的無(wú)進(jìn)展生存期、無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存期和總生存期呈負(fù)相關(guān)。這意味著TAM可能在協(xié)助HNSCC逃避免疫監(jiān)視、促進(jìn)腫瘤血管及淋巴管生成、刺激腫瘤增殖、促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用[8]。

2.1 TAM的免疫抑制作用

巨噬細(xì)胞是腫瘤內(nèi)的主要吞噬細(xì)胞群，也是專業(yè)的抗原呈遞細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)，通過(guò)利用其吞噬功能可以在先天性免疫和獲得性免疫防御間形成紐帶，將處理后的抗原信息提呈給幼稚T細(xì)胞，促進(jìn)T細(xì)胞活化[9]。而癌細(xì)胞通常廣泛表達(dá)一些“不要吃我”的信號(hào)，包括程序性細(xì)胞凋亡1配體(programmed cell death legend 1，PD-L1)、CD47、CD24、β2-微球蛋白等多種配體，起到破壞巨噬細(xì)胞吞噬能力的作用。研究表明，在抗原提呈的同時(shí)，TAM也像腫瘤細(xì)胞那樣可以表達(dá)PD-L1，并與T細(xì)胞上的PD-1結(jié)合，從而降低T細(xì)胞活化并誘導(dǎo)其凋亡[10]。此外，TAM還能表達(dá)另外一些檢查點(diǎn)配體，包括PD-L2、共抑制分子B7-H4和T細(xì)胞活化V結(jié)構(gòu)域Ig抑制劑(V-domain Ig suppressor of T-cell activation，VISTA)，起到抑制T細(xì)胞增殖的作用[11]。同時(shí)，TAM還能有效降低自然殺傷(natural killer，NK)細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。NK細(xì)胞作為固有免疫細(xì)胞成員之一，既能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞，又能分泌干擾素-γ(interferon,IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)等細(xì)胞因子來(lái)調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞的功能，從而發(fā)揮間接抗腫瘤效應(yīng)[12]。然而在腫瘤發(fā)展過(guò)程中，由于腫瘤細(xì)胞本身可以逃逸NK細(xì)胞的識(shí)別，加之TAM分泌的多種細(xì)胞因子可以改變腫瘤微環(huán)境而干擾NK細(xì)胞活化甚至誘導(dǎo)其凋亡，使得NK細(xì)胞的抗腫瘤活性被抑制。如TAM表達(dá)的PD-L1便可誘導(dǎo)NK細(xì)胞凋亡[13]，降低對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷作用。此外也有研究指出TAM可以通過(guò)抑制NK細(xì)胞中IFN-γ、TNF-α的表達(dá)[14]，間接降低其抗腫瘤活性。

2.2 TAM促進(jìn)血管和淋巴管生成

TAM可以促進(jìn)腫瘤血管生成，一方面TAM通過(guò)分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)和組織蛋白酶可以降解基底膜，產(chǎn)生血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)；另一方面，通過(guò)激活血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)的表達(dá)，促使其與VEGF結(jié)合而促進(jìn)血管生成，為維持腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)提供必要的血管網(wǎng)絡(luò)[15]。同時(shí)，MMP還可降解腫瘤細(xì)胞周圍的組織基質(zhì)，釋放肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子，如VEGF-A，誘導(dǎo)血管新生。TAM通過(guò)旁分泌作用和細(xì)胞自治模式在腫瘤源性淋巴管的生成中起到至關(guān)重要的作用，前者與TAM在腫瘤血管生成中發(fā)揮的作用相似，表現(xiàn)為大量VEGF、MMP等血管生成因子的分泌，后者則通過(guò)將巨噬細(xì)胞源性淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞整合進(jìn)入淋巴管，形成淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(lymphatic endothelial cells，LEC)[16]。已有研究表明下調(diào)腫瘤組織中MMP-2的水平可以降低淋巴管生成和抑制LEC的侵襲能力[17]。此外，TAM還可分泌多種纖溶蛋白酶原激活物，調(diào)節(jié)基質(zhì)重塑和生長(zhǎng)因子激活，從而促進(jìn)腫瘤淋巴管的形成[18]。

2.3 TAM促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移

TAM的浸潤(rùn)與腫瘤細(xì)胞增殖關(guān)系密切。在惡性腫瘤細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的體外共同培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞因子來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖；在去除巨噬細(xì)胞的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中也證實(shí)，不同的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)都依賴于TAM的存在[19]。研究發(fā)現(xiàn)，TAM表達(dá)的上皮生長(zhǎng)因子(epiderma1 growth factor，EGF)、上皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)家族、血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor，PDGF)、TGF-β1等多種細(xì)胞因子可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、維持腫瘤細(xì)胞存活[20]。同時(shí)TAM分泌的這些細(xì)胞因子對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)有破壞作用，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[21]。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transitions，EMT)是腫瘤細(xì)胞獲得侵襲和轉(zhuǎn)移能力的重要步驟。TAM既可以表達(dá)TGF-β、IL-6等多種因子來(lái)誘導(dǎo)EMT，又能夠分泌EGF樣配體，激活腫瘤細(xì)胞中的EGFR通路來(lái)促進(jìn)EMT[22]。在HNSCC中，TAM分泌的EGF2可以上調(diào)趨化因子C-C基序配體2(C-C motif ligand 2，CCL2)的表達(dá)，從而招募更多炎性單核細(xì)胞，并將其誘導(dǎo)成M2型TAM，形成正反饋旁分泌環(huán)路，促進(jìn)EMT[23]。TAM釋放CCL18可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，引起腫瘤細(xì)胞間連接作用減弱甚至喪失，以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。另外， TAM還可產(chǎn)生高水平的炎性因子，如巨噬細(xì)胞遷移抑制因子，可以通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、形態(tài)變化和運(yùn)動(dòng)性來(lái)增加其侵襲性[8]。

3 針對(duì)TAM的治療策略

鑒于TAM在腫瘤微環(huán)境中的重要作用，國(guó)內(nèi)外研究者正積極探索針對(duì)TAM的相關(guān)治療策略，這些治療策略大致可分為：清除TAM，抑制TAM募集，激活TAM吞噬活性，TAM的重編程及嵌合抗原受體巨噬細(xì)胞療法。

3.1 清除TAM

清除TAM可以通過(guò)降低血液中單核細(xì)胞的數(shù)量及減少腫瘤組織中巨噬細(xì)胞的數(shù)量來(lái)實(shí)現(xiàn)。傳統(tǒng)上用來(lái)防止骨轉(zhuǎn)移或過(guò)度骨吸收的雙膦酸鹽，可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡，但它對(duì)于髓系細(xì)胞也具有毒性反應(yīng)[24]。因而在此基礎(chǔ)上研制的第三代含氮雙膦酸鹽唑來(lái)膦酸(zoledronate，ZA)，被證實(shí)對(duì)表達(dá)MMP-9的TAM具有選擇性細(xì)胞毒作用，在多種臨床前腫瘤模型中，均可抑制單核細(xì)胞向TAM的分化，降低TAM的浸潤(rùn)，進(jìn)而減少腫瘤血管生成，抑制腫瘤進(jìn)展[25]。近年來(lái)對(duì)于集落刺激因子-1(CSF-1)的研究發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)可以控制循環(huán)單核細(xì)胞及組織巨噬細(xì)胞的生存、增殖、分化和趨化。利用單克隆抗體或小分子抑制劑可以阻斷集落刺激因子-1受體(CSF-1R)信號(hào)傳導(dǎo)，MITCHEM等[26]發(fā)現(xiàn)，抑制 CSF-1R可以減少腫瘤起始細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)抗腫瘤免疫，提高化療的療效。Daiichi Sankyo研發(fā)的小分子CSF-1R抑制劑，經(jīng)美國(guó)食品和藥物管理局(food and drug administration，F(xiàn)DA)批準(zhǔn)用于化療無(wú)效或復(fù)發(fā)的腱滑膜巨細(xì)胞腫瘤。但這些抗體和抑制劑都不能選擇性作用于M2型TAM。最近一項(xiàng)在小鼠模型中應(yīng)用M2型TAM CD163抗體的研究發(fā)現(xiàn)，該抗體在特異性清除M2型TAM的同時(shí)，還可以促進(jìn)M1型TAM和T細(xì)胞的抗腫瘤活性[27]，這可能為M2型TAM的靶向清除研究提供關(guān)鍵的思路。

3.2 抑制TAM的募集

TAM的募集高度依賴多種趨化因子信號(hào)[28]，因此，使用單克隆抗體或小分子抑制劑干擾趨化因子信號(hào)是抑制TAM在腫瘤微環(huán)境中聚集的有效途徑，其中趨化因子C-C基序配體2(CCL2)的研究受到了廣泛的關(guān)注。CCL2與其受體CCR2結(jié)合信號(hào)在TAM的募集及其浸潤(rùn)到腫瘤微環(huán)境中起著主要調(diào)節(jié)作用，在不同的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭幸种艭CL2/CCR2信號(hào)均顯示出抗腫瘤效果，表現(xiàn)為腫瘤浸潤(rùn)的T細(xì)胞和NK細(xì)胞功能得到增強(qiáng)[29]，這表明抑制CCL2/CCR2信號(hào)可以產(chǎn)生良好的免疫效應(yīng)，這可能成為一種有前景的TAM靶向治療方法。但Centocor Research & Development公司的CCL2抗體未能抑制腫瘤生長(zhǎng)，原因是治療1周后，腫瘤細(xì)胞就代償性增加了CCL2的表達(dá)[30]，這意味著抑制CCL2/CCR2信號(hào)的治療方案仍需要新的探索。此外，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α，sdf-1α)上調(diào)也能促進(jìn)M2型TAM的募集[31]，所以使用sdf-1α受體拮抗劑可以抑制M2型TAM的募集。同時(shí)，sdf-1α受體拮抗劑與抗血管生成藥物有很強(qiáng)的協(xié)同作用，可增強(qiáng)抑制血管生成的作用[32]，發(fā)揮良好的抗腫瘤效果。

3.3 促進(jìn)TAM吞噬活性

3.3.1信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白

前文已經(jīng)提到腫瘤細(xì)胞可過(guò)度表達(dá)一種CD47的“不要吃我”的信號(hào)分子，它與患者的不良預(yù)后相關(guān)。在髓系細(xì)胞上表達(dá)的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α(signal-regulatory protein α，Sirpα)[33]是一種抑制性受體，它可以識(shí)別并結(jié)合CD47，有效下調(diào)巨噬細(xì)胞的吞噬活性。研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用藥物干擾CD47與Sirpα的相互作用，可恢復(fù)巨噬細(xì)胞的吞噬活性[34]，并在與化療藥物協(xié)同作用時(shí)，這種吞噬活性可進(jìn)一步增強(qiáng)。在臨床研究中，阻斷抗吞噬途徑在總體上是耐受良好的，如抗CD47單抗與抗CD20單抗[35]聯(lián)合應(yīng)用在淋巴瘤患者中便取得了不錯(cuò)的結(jié)果。但值得注意的是，CD47同時(shí)也在正常細(xì)胞中表達(dá)，這可能會(huì)隔離治療性的抗CD47抗體從而降低治療效應(yīng)。

3.3.2Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)的激活

TLR作為天然免疫模式識(shí)別受體，主要負(fù)責(zé)病原體相關(guān)分子的識(shí)別。位于細(xì)胞表面的TLR可識(shí)別多種細(xì)菌代謝產(chǎn)物，如脂多糖和鞭毛蛋白，而細(xì)胞內(nèi)部的TLR通常接收致病核酸的刺激，激活的TLR將巨噬細(xì)胞極化為M1表型以發(fā)揮免疫效應(yīng)[36]。因此，TLR激動(dòng)劑已被開(kāi)發(fā)用于癌癥治療，并在臨床前研究中觀察到了對(duì)腫瘤進(jìn)展的抑制作用[37]。目前咪喹莫特(imiquimod，一種TLR7激動(dòng)劑)已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于鱗狀細(xì)胞癌和基底細(xì)胞癌的局部治療[38]。在HNSCC中，TLR9激動(dòng)劑和PD-1抗體的聯(lián)合應(yīng)用可參與抑制腫瘤生長(zhǎng)[39]。但由于全身應(yīng)用TLR激動(dòng)劑存在一定化學(xué)毒性，以往的研究中多在可觸及的皮損處局部或瘤內(nèi)給藥，以達(dá)到良好的療效與毒性平衡。近年來(lái)的研究已經(jīng)開(kāi)始使用裝載了TLR激動(dòng)劑或腫瘤多肽的納米顆粒來(lái)作為新的治療方式，這不僅能夠特異性識(shí)別M2型TAM的標(biāo)志物配體實(shí)現(xiàn)藥物靶向遞送，還能增強(qiáng)腫瘤免疫效應(yīng)[40]，因而開(kāi)發(fā)這種納米藥物對(duì)腫瘤免疫治療領(lǐng)域有望實(shí)現(xiàn)新的突破。

3.4 TAM的重編程

巨噬細(xì)胞具有高度可塑性，通過(guò)對(duì)M2型巨噬細(xì)胞表面特異受體進(jìn)行重編程,可促使TAM向M1型極化[41]。前文已經(jīng)提到，巨噬細(xì)胞表面的天然免疫模式識(shí)別受體TLR激活可以使巨噬細(xì)胞極化為M1表型，且已有多種TLR激動(dòng)劑被開(kāi)發(fā)用于癌癥治療，如抗癌藥物紫杉醇便可以通過(guò)TLR4依賴的方式將TAM重新極化為M1型[42]。此外，激活的腫瘤壞死因子家族成員CD40也可以將巨噬細(xì)胞極化為促炎表型[43]。目前聯(lián)合CD40抗體R07009879和免疫療法治療轉(zhuǎn)移性實(shí)體腫瘤的臨床研究正在進(jìn)行中[34]。同時(shí)，主要在髓系細(xì)胞中表達(dá)的磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase，PI3-K)和信號(hào)傳遞與轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)蛋白家族可通過(guò)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)抑制腫瘤免疫。在小鼠腫瘤模型中發(fā)現(xiàn)，抑制PI3-K和STAT3的表達(dá)可以促進(jìn)TAM中促炎基因的表達(dá)并抑制腫瘤的進(jìn)展[44]。

腫瘤組織代謝的改變對(duì)巨噬細(xì)胞極化也有重要作用。例如，低氧條件下的腫瘤細(xì)胞和脂肪酸氧化分泌的產(chǎn)物乳酸可促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2型極化而對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生支持作用[45]。腺苷、谷氨酰胺和乳酸等腫瘤衍生代謝物的靶向性已經(jīng)在臨床前模型中被研究，如阻斷小鼠乳腺癌模型中谷氨酰胺的代謝或應(yīng)用谷氨酰胺合成酶抑制劑，可以促進(jìn)TAM重編程為M1型，從而達(dá)到抑制腫瘤發(fā)展及轉(zhuǎn)移的作用[46]。總體而言，這些發(fā)現(xiàn)表明TAM的重編程可能對(duì)增強(qiáng)機(jī)體腫瘤免疫有積極影響。

3.5 嵌合抗原受體巨噬細(xì)胞(chimeric antigen receptor macrophages，CAR-M)

嵌合抗原受體是將腫瘤相關(guān)抗原的胞外結(jié)合區(qū)與胞內(nèi)免疫受體酪氨酸活化基序，通過(guò)胞外鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)連接嵌合形成的，它可以發(fā)揮對(duì)靶抗原的定向作用，是多種腫瘤靶向治療的技術(shù)基礎(chǔ)。以往的臨床治療中，嵌合抗原受體T細(xì)胞療法(CAR-T)在血液系統(tǒng)腫瘤治療方面呈現(xiàn)出良好的效果[47]，但在實(shí)體腫瘤治療中仍存在極大限制，主要是由于實(shí)體腫瘤微環(huán)境中多種免疫抑制因子可以阻止免疫細(xì)胞向病灶運(yùn)輸并降低T細(xì)胞對(duì)腫瘤的浸潤(rùn)[48]。KLICHINSKY等[49]在對(duì)小鼠模型中的巨噬細(xì)胞進(jìn)行基因改造后表達(dá)的CAR-M可以殺死腫瘤細(xì)胞，這有望成為治療實(shí)體腫瘤的有效細(xì)胞療法，從而彌補(bǔ)CAR-T療法的局限性。CAR-M既可以靶向吞噬腫瘤細(xì)胞，又能改變腫瘤微環(huán)境而轉(zhuǎn)變TAM的極化方向，同時(shí)還能夠?qū)⒛[瘤抗原呈遞給T細(xì)胞，激活T細(xì)胞的免疫效應(yīng)。CAR-M療法的深入研究可能為包括HNSCC在內(nèi)的實(shí)體腫瘤提供更為有效的靶向治療方案。

4 小結(jié)與展望

TAM在腫瘤免疫治療中起著復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用。相關(guān)的臨床前研究和初步臨床研究表明，多種針對(duì)TAM的治療方法正在揭示包括HNSCC在內(nèi)的惡性腫瘤的機(jī)制及免疫治療途徑，但實(shí)現(xiàn)TAM靶向治療的研究仍存在不小的挑戰(zhàn)，比如：如何改進(jìn)腫瘤微環(huán)境中TAM的藥物傳遞，如何在安全條件下實(shí)現(xiàn)TAM最佳和最持久的重編程，如何識(shí)別更具特異性的靶向TAM受體，這些現(xiàn)實(shí)的問(wèn)題仍需要深入的基礎(chǔ)研究。