■段嘉鈺 劉書杰 周 磊 周玉青 楊得玉 孫 璐 崔占鴻*

（1.青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，青海省牦牛工程技術(shù)研究中心，青海省高原放牧家畜動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海西寧 810016；2.海北藏族自治州高原生態(tài)畜牧業(yè)科技示范園管委會(huì)，青海海晏 810299）

哺乳期是牦牛的一個(gè)重要生理過程，而哺乳期攝入的營養(yǎng)是影響犢牛身體健康最重要的因素之一[1]。目前牦牛的飼養(yǎng)仍然以傳統(tǒng)方式為主，犢牛長(zhǎng)期與母?；烊猴曫B(yǎng)，一般5～6 月齡斷奶[2]。但這種飼養(yǎng)方式存在諸多缺點(diǎn)，如影響犢牛和母牛的采食量，限制了犢牛后期的生長(zhǎng)性能，有可能會(huì)形成僵牛[3]；以及母牛發(fā)情時(shí)間滯后、繁殖性能下降[4]，這均不利于指導(dǎo)牦牛生產(chǎn)和提高經(jīng)濟(jì)效益。牦牛犢牛是指從出生到6 月齡之間的牦牛，利用代乳粉飼喂?fàn)倥?，?shí)施早期斷奶技術(shù)，可以促進(jìn)母牛和犢牛健康養(yǎng)殖和降低培育成本，同時(shí)也可使母牛的身體狀況快速恢復(fù)，及時(shí)繁育、縮短胎距，為后續(xù)的牦牛生產(chǎn)打好基礎(chǔ)[4]。有研究者在2020 年開展了牦牛犢牛從出生到3 月齡的人工代乳及補(bǔ)飼的初步研究，表明代乳粉能夠有效替代母乳，保證犢牛健康生長(zhǎng)，同時(shí)有助于母畜盡早恢復(fù)體況[5-6]。但關(guān)于牦牛犢牛在哺乳期人工代乳時(shí)如何進(jìn)行基礎(chǔ)日糧的營養(yǎng)調(diào)控報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)室在前期的研究結(jié)果表明，早期斷奶和補(bǔ)飼開食料有利于牦牛犢牛生長(zhǎng)性能提高和消化道發(fā)育[7-8]。但對(duì)牦牛犢牛如何在哺乳期適度采食基礎(chǔ)日糧的研究不夠深入。因此，本試驗(yàn)以3月齡、平均體重為（53.60±1.06）kg的哺乳期代乳牦牛犢牛為試驗(yàn)動(dòng)物，采用飼養(yǎng)試驗(yàn)和比較屠宰試驗(yàn)相結(jié)合的研究方法，探究哺乳期采食限制對(duì)牦牛犢牛生長(zhǎng)性能、腹瀉頻率及主要臟器發(fā)育的影響，為哺乳期牦牛犢牛的適度補(bǔ)飼調(diào)控技術(shù)提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

試驗(yàn)于2021年8月10日至2021年12月10日在青海省海北州高原生態(tài)畜牧業(yè)科技示范園進(jìn)行。試驗(yàn)地海拔為3 010 m，年平均溫度為1.5 ℃。試驗(yàn)歷時(shí)120 d，其中犢牛斷母乳適應(yīng)代乳粉10 d，預(yù)試期20 d，正試期90 d。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)分組設(shè)計(jì)，選取（60±3）日齡、體況良好、體重相近的21頭公牦牛犢牛（購自青海省大通種牛場(chǎng)）作為試驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分為3組，每組7頭，即自由采食組（AL組）、70%采食組（IR70組）和40%采食組（IR40 組）。3 組試驗(yàn)動(dòng)物均投喂等量代乳粉基礎(chǔ)，然后分梯度投喂基礎(chǔ)日糧。經(jīng)歷代乳粉適應(yīng)期、預(yù)試期，3月齡開始正式試驗(yàn)，每天記錄犢牛的投料量、剩料量、腹瀉次數(shù)，計(jì)算腹瀉頻率，并且測(cè)定基礎(chǔ)日糧中的營養(yǎng)成分。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)選取5頭進(jìn)行屠宰取樣，對(duì)主要器官進(jìn)行發(fā)育指數(shù)的測(cè)定。

1.3 試驗(yàn)日糧

參照肉牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）[9]制定體重為50 kg 哺乳期牦牛犢牛的日糧配方。代乳粉購自北京精準(zhǔn)營養(yǎng)研究中心，代乳粉由全脂奶粉、乳清粉、濃縮蛋白、維生素A、維生素D3、維生素B3、泛酸、賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、有機(jī)微量元素等組成，具體營養(yǎng)成分見表1。精料購自北京精準(zhǔn)營養(yǎng)研究中心，粗料為粉碎后的苜蓿干草，粉碎長(zhǎng)度為3～5 cm。基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平見表2所示。

表1 代乳粉營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)，%）

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（絕干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)開始前，牦牛犢牛打好耳標(biāo)，進(jìn)行免疫驅(qū)蟲處理。在預(yù)試期前對(duì)剛斷母乳的犢牛飼喂10 d 的代乳粉，在犢牛完全適應(yīng)人工飼喂代乳粉后，對(duì)其進(jìn)行基礎(chǔ)日糧采食的限制飼喂。犢牛單欄飼養(yǎng)，代乳粉早晚兩次飼喂，用煮沸后冷卻至42 ℃的溫水以1∶5的比例沖泡。正試期開始時(shí)代乳粉飼喂量為0.40 kg/（頭·d），代乳粉每5 d增加0.01 kg；試驗(yàn)結(jié)束時(shí)代乳粉飼喂量為0.58 kg/（頭·d）。3 組試驗(yàn)動(dòng)物均在飼喂等量代乳粉的基礎(chǔ)上，分梯度投喂基礎(chǔ)日糧（先精后粗），精粗比3組均為3∶7。其中AL組自由采食，IR70組飼喂自由采食量的70%，IR40 組飼喂自由采食量的40%，3 組于每天09：00和17：00各飼喂1次。試驗(yàn)過程中保證AL組的飼槽每天有10%左右的剩料量[10]，限飼組的日飼喂量應(yīng)根據(jù)AL 組前1 天的平均日采食量進(jìn)行調(diào)整。犢?？稍谑覂?nèi)牛圈和室外牛圈進(jìn)行活動(dòng)，有足夠的空間和陽光照射，自由飲水。

1.5 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 采食量和體重

在投料前準(zhǔn)確稱量前一天的剩余基礎(chǔ)日糧量，并詳細(xì)記錄每天的飼喂量和剩余日糧量，用于計(jì)算整個(gè)試驗(yàn)過程中各組試驗(yàn)犢牛的干物質(zhì)采食量[11]。在試驗(yàn)過程中，采集試驗(yàn)前、試驗(yàn)中、試驗(yàn)后3 個(gè)時(shí)間段的日糧，對(duì)其營養(yǎng)成分進(jìn)行測(cè)定。并于試驗(yàn)開始和結(jié)束前的早晨，將試驗(yàn)犢牛空腹稱重。試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算犢牛平均日干物質(zhì)采食量（ADMI）、平均日采食量（ADFI）、凈增重（NG）和平均日增重（ADG）。

平均日采食量（g/d）=（飼喂量-剩料量）/飼養(yǎng)天數(shù)

平均日干物質(zhì)采食量（g/d）=平均日采食量×飼糧干物質(zhì)含量

平均日增重（g/d）=（終末體重-初始體重）/飼養(yǎng)天數(shù)

1.5.2 體尺指標(biāo)

在上午空腹時(shí)，對(duì)3月齡末、4月齡末和5月齡末的試驗(yàn)牦牛犢牛測(cè)量體高、體斜長(zhǎng)、胸圍和管圍，體尺測(cè)量以現(xiàn)代肉牛生產(chǎn)學(xué)為指導(dǎo)[12]。

1.5.3 腹瀉頻率

試驗(yàn)開始后每天觀察犢牛的排糞情況，參照Lee等[13]的方法對(duì)糞便進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：形態(tài)正常，外觀堅(jiān)硬，記1 分；形態(tài)成型，外觀柔軟，記2 分；形狀不規(guī)則，呈水樣，記3分；形狀不規(guī)則，呈水樣，并附有少量黏液，記4 分；形狀不成形，呈水樣，黏液上附有大量血絲，記5 分。每天記錄每頭試驗(yàn)犢牛得分情況，當(dāng)糞便評(píng)分為3 分及3 分以上時(shí)判定為腹瀉。腹瀉發(fā)生時(shí)遵循獸醫(yī)給出的治療方法進(jìn)行治療。

腹瀉頻率(%)=Σ試驗(yàn)期犢牛腹瀉發(fā)病次數(shù)/（總頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×100[14]

1.5.4 主要組織器官指數(shù)

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，屠宰流程依據(jù)Galvani等[15]建立的屠宰程序，每組隨機(jī)抽取5頭試驗(yàn)犢牛，在屠宰前1天的下午16：00 禁食禁水，并稱重。第2 天試驗(yàn)動(dòng)物頸靜脈放血宰殺后，取出內(nèi)臟，將心臟、肺臟、腎臟、肝臟、脾臟、胸腺和胰腺分離并稱重。其中消化道需要?jiǎng)冸x去除內(nèi)容物和內(nèi)臟脂肪，然后用自來水沖洗兩遍、瀝干水分，分別稱取瘤網(wǎng)胃、瓣胃、皺胃、小腸和大腸重量[16]。

1.5.5 基礎(chǔ)日糧常規(guī)營養(yǎng)成分測(cè)定

干物質(zhì)測(cè)定參考《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測(cè)定》（GB 5009.3—2010）；粗脂肪、粗蛋白、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維均參考張麗英[17]的方法進(jìn)行分析測(cè)定；總能是用等溫彈式量熱計(jì)（Parr6100 Instruments）進(jìn)行測(cè)定。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2010 進(jìn)行初步歸納，然后采用SPSS 20 統(tǒng)計(jì)軟件ANOVA 進(jìn)行方差分析，差異顯著則用Duncan's 法進(jìn)行多重比較。以P＜0.05 作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，數(shù)據(jù)結(jié)果則用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛生長(zhǎng)性能的影響（見表3、表4）

表4 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛體尺指標(biāo)的影響（cm）

由表3 可知，3 組牦牛犢牛終末體重的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），以AL組最高，顯著高于IR70組和IR40 組，分別提高10.11%和18.29%（P＜0.05）。AL組、IR70 組和IR40 組的凈增重、平均日增重和平均日干物質(zhì)采食量3 項(xiàng)指標(biāo)均呈現(xiàn)出相似的變化規(guī)律，即AL 組＞IR70 組＞IR40 組，且3 組間存在顯著性差異（P＜0.05）。

表3 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛生長(zhǎng)性能的影響

由表4可知，3月齡末AL組試驗(yàn)犢牛的胸圍顯著高于IR70 組和IR40 組（P＜0.05）；4 月齡末AL 組體斜長(zhǎng)和胸圍顯著高于IR70組和IR40組（P＜0.05）；到5月齡末，AL組體斜長(zhǎng)和體高顯著高于IR70組和IR40組（P＜0.05），胸圍和管圍都是AL 組＞IR70 組＞IR40 組，3 組之間差異顯著（P＜0.05）。

2.2 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛腹瀉的影響（見表5）

由表5可知，4月齡末AL組的牦牛犢牛的腹瀉頻率顯著低于IR70 組和IR40 組（P＜0.05），但I(xiàn)R70 組和IR40 組差異不顯著（P＞0.05）；到5 月齡末，試驗(yàn)牦牛犢牛的腹瀉頻率均表現(xiàn)AL組＜IR70組＜IR40組，且3組之間差異顯著（P＜0.05）。

表5 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛腹瀉的影響

2.3 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛主要內(nèi)臟器官指數(shù)的影響（見表6）

由表6可知，心臟、肝臟、腎臟、肺臟、胸腺重量均隨采食水平降低而顯著降低（P＜0.05），IR40組和IR70組脾臟和胰腺重量無顯著差異（P＞0.05），但顯著低于AL組（P＜0.05）；在占宰前活重比例中，肺臟、腎臟、脾臟、胰腺所占比例3組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而胸腺、肝臟和心臟所占比例以AL 組最高，即IR40 組＜IR70組＜AL組，3組之間差異顯著（P＜0.05）。

表6 哺乳期采食限制對(duì)牦牛犢牛內(nèi)臟器官發(fā)育的影響

2.4 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛復(fù)胃和腸道發(fā)育的影響（見表7）

由表7 可以看出，除皺胃重量外，限制采食對(duì)胃和腸道重量均有顯著影響（P＜0.05）。其中，瘤網(wǎng)胃重、瓣胃重、大腸重、小腸重均隨采食水平降低而顯著減小，且3 組間均差異顯著（P＜0.05）。從各個(gè)胃室占宰前活重和復(fù)胃總重比例可看出，AL 組瘤網(wǎng)胃顯著高于IR40和IR70組（P＜0.05），AL組和IR70組瓣胃顯著高于IR40組（P＜0.05），其余各指標(biāo)在3組間均差異不顯著（P＞0.05）。從腸道占宰前體重和腸道總重比例可知，AL 組大腸比例最高，顯著高于IR40 組和IR70組（P＜0.05）。

表7 哺乳期采食限制對(duì)牦牛犢牛復(fù)胃和腸道發(fā)育的影響

3 討論

3.1 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛生長(zhǎng)性能的影響

以體重、體尺作為犢牛培育的重要指標(biāo)，能準(zhǔn)確反映犢牛的生長(zhǎng)發(fā)育狀況[18]。有研究顯示，9 月中下旬高原上牧草開始枯萎時(shí)，帶犢母牦牛產(chǎn)奶量少，導(dǎo)致其不能滿足犢牛的生長(zhǎng)需要。然而牦牛犢牛在哺乳期人工喂養(yǎng)代乳粉后，代乳粉中含有蛋白質(zhì)、脂肪和礦物元素等營養(yǎng)成分能促進(jìn)犢牛的生長(zhǎng)發(fā)育，提高犢牛平均日增重和縮短母牦牛繁殖周期[19-21]，并解決了因母牦牛泌乳量不足導(dǎo)致犢牛生長(zhǎng)發(fā)育受限等問題。Bhatti等[22]研究表明，飼糧由全乳、干草和開食料組合搭配后飼喂?fàn)倥Ｄ塬@得更高的生長(zhǎng)速率。本研究犢牛在飼喂同等代乳粉的基礎(chǔ)上，設(shè)置3個(gè)不同基礎(chǔ)日糧的飼喂水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，整個(gè)試驗(yàn)期隨著限制日糧采食水平的降低，犢牛的末重、凈增重和平均日增重均顯著降低。這與對(duì)試驗(yàn)羊進(jìn)行限制采食后，試驗(yàn)羊平均日增重、終末體重隨著飼喂水平降低而顯著降低的結(jié)果一致[23-24]。并且本試驗(yàn)牦牛犢牛到5月齡時(shí)，在飼養(yǎng)環(huán)境條件一致的情況下限飼水平組犢牛的體高、體斜長(zhǎng)、胸圍、管圍均顯著低于自由采食組，即IR40 組＜IR70 組＜AL 組。因此，說明給哺乳期牦牛犢牛提供充足營養(yǎng)水平的日糧可提高其生長(zhǎng)發(fā)育質(zhì)量。

3.2 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛腹瀉的影響

腹瀉是一種常見的幼齡動(dòng)物疾病，本試驗(yàn)牦牛犢牛3 月齡時(shí)糞便評(píng)分和腹瀉頻率較高。分析其原因可能是犢牛從與母牦牛自然放牧到單欄飼養(yǎng)，從母乳到人工喂養(yǎng)代乳粉，飼養(yǎng)環(huán)境的改變和胃腸功能的不適應(yīng)，均可引起消化不良，機(jī)體抵抗力下降，使動(dòng)物機(jī)體極易受到各種病原微生物的感染而引起腹瀉[25-26]。但犢牛到5 月齡末時(shí)，給予自由采食的牦牛犢牛的糞便評(píng)分相比3月齡末有所下降，腹瀉頻率也有所下降，說明犢牛隨著不斷適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境和代乳粉，應(yīng)激反應(yīng)減少，胃腸道的消化功能和免疫功能也逐步提高。然而犢牛到4 月齡末和5 月齡末時(shí)，自由采食的犢牛腹瀉頻率顯著低于另外兩個(gè)限飼組?？赡苁亲杂刹墒碃倥Ｒ?yàn)閿z入了營養(yǎng)水平較高的基礎(chǔ)日糧，這些均可促進(jìn)消化器官的發(fā)育，促進(jìn)腸道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。并且高營養(yǎng)水平的精料還會(huì)使腸道菌群發(fā)生改變，從而改善腸道黏膜免疫能力而減少腹瀉的發(fā)生[27-28]。所以對(duì)哺乳期牦牛犢牛限制采食可以使腹瀉頻率增加，會(huì)影響牦牛犢牛胃腸道的消化功能。

3.3 采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛主要內(nèi)臟器官指標(biāo)的影響

內(nèi)臟組織器官質(zhì)量增加、體積增大以及內(nèi)部結(jié)構(gòu)的改變，是動(dòng)物自身生長(zhǎng)發(fā)育的重要內(nèi)容，對(duì)理論研究和生產(chǎn)實(shí)踐具有重要的指導(dǎo)意義[29]。動(dòng)物內(nèi)臟器官的發(fā)育速度會(huì)隨著營養(yǎng)水平的限制而減慢，重量也會(huì)降低[30]。本試驗(yàn)所用的試驗(yàn)犢牛均處于同齡，在飼養(yǎng)環(huán)境一致的情況下，由于限制采食量的不同，造成了犢牛心臟、肝臟、腎臟、肺臟和胰腺的重量顯著減小。說明哺乳期限制牦牛犢牛的采食會(huì)對(duì)內(nèi)臟器官的發(fā)育造成影響。器官指數(shù)反映了動(dòng)物的營養(yǎng)狀況和生理機(jī)能狀況[31]。本研究中肝臟和胸腺的器官指數(shù)3 組間呈現(xiàn)顯著性差異，這可能是由于肝臟承擔(dān)動(dòng)物機(jī)體的新陳代謝，同時(shí)也是最大的消化腺。因此，隨著犢牛采食量和體重的增加，肝臟快速生長(zhǎng)達(dá)到與體重適合的比例才能擔(dān)負(fù)起生物轉(zhuǎn)化代謝的功能[32]。其中，胸腺是機(jī)體重要的免疫器官，攝入營養(yǎng)水平較高的日糧可能會(huì)刺激牦牛犢牛瘤胃以及消化道發(fā)育，進(jìn)而促進(jìn)胸腺免疫細(xì)胞的增殖，最終使機(jī)體免疫功能增強(qiáng)[33]。然而腎臟、肺臟、脾臟和胰腺的重量在各組之間存在差異，但其所占宰前活重比例則差異不顯著，因此推測(cè)動(dòng)物這些器官的發(fā)育情況可能與整個(gè)機(jī)體的生長(zhǎng)速度相關(guān)，受飼喂水平影響較小。

3.4 哺乳期采食限制對(duì)牦牛犢牛胃腸道發(fā)育的影響

反芻動(dòng)物幼齡時(shí)復(fù)胃發(fā)育的程度直接影響到成年后的采食量和消化能力，營養(yǎng)水平是影響瘤胃發(fā)育的重要影響因素[34]。通常瘤胃和網(wǎng)胃是合在一起，稱之為瘤網(wǎng)胃[35]。哺乳期給牦牛犢牛飼喂粗飼料，因苜蓿的纖維含量高，被動(dòng)物食入瘤胃后，在瘤胃的蠕動(dòng)下對(duì)瘤胃壁有較強(qiáng)的物理摩擦作用，從而促進(jìn)瘤胃發(fā)育和蠕動(dòng)[36-37]。這與本次的研究結(jié)果相符。本試驗(yàn)對(duì)哺乳期牦牛犢牛限制了基礎(chǔ)日糧的采食，因其攝入苜蓿和精料含量均有所降低，導(dǎo)致限制采食組犢牛的瘤網(wǎng)胃重量顯著低于自由采食組，呈現(xiàn)出采食水平越低，瘤網(wǎng)胃越小的規(guī)律。這些結(jié)果也可說明瘤網(wǎng)胃的發(fā)育需要足夠數(shù)量的精粗飼料刺激作用。然而，皺胃重量在同等限制采食水平下，3組間無顯著性差異。有研究表明，犢牛出生時(shí)皺胃已有相當(dāng)程度的發(fā)育[16]，可承擔(dān)一定的消化功能，受后來飼草料等因素變化的影響相對(duì)較小[38]。因此說明皺胃同瘤網(wǎng)胃相比，受限制采食水平影響較小。

腸道是牦牛犢牛對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的重要場(chǎng)所，消化性能可能與重量有關(guān)，而作為影響胃腸道發(fā)育的重要因素之一，營養(yǎng)水平的高低極有可能會(huì)影響到小腸和大腸的重量[37]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在限制犢牛采食后，小腸和大腸的重量3 組間均呈現(xiàn)差異顯著。從大腸占腸道總重和宰前活重的比例來看，自由采食犢牛的大腸所占宰前活重和腸道比例較高。有研究表明，大腸作為承擔(dān)部分微生物發(fā)酵功能的器官，只有在接觸并適應(yīng)所采食的營養(yǎng)水平較高的飼糧后，才能受到飼糧及其分解產(chǎn)生的發(fā)酵酸等多方面影響而迅速發(fā)育，成為與其承擔(dān)消化機(jī)能相適應(yīng)的器官[39]，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果相符。綜上所述，采食限制對(duì)哺乳期牦牛犢牛胃腸道重量和發(fā)育規(guī)律影響顯著，給予牦牛犢牛營養(yǎng)水平較高的日糧能夠促進(jìn)其胃腸道的健康發(fā)育。

4 結(jié)論

綜上，哺乳期采食限制會(huì)影響到牦牛犢牛主要內(nèi)臟器官和胃腸道的良好發(fā)育，并引起腹瀉頻率增加，顯著降低了生長(zhǎng)性能，不利于保障牦牛犢牛早期的生長(zhǎng)發(fā)育健康，因此實(shí)施哺乳期營養(yǎng)補(bǔ)飼調(diào)控對(duì)正處于生長(zhǎng)發(fā)育窗口期的牦牛犢牛早期培育非常重要。