天然植物飼料原料活性物質(zhì)譜效關(guān)系的研究思路與應(yīng)用概況

■余詩強 熊安然 熊本海 蔣林樹*

（1.北京農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，奶牛營養(yǎng)學(xué)北京市重點實驗室，北京 102206；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193）

2020 年1 月1 日起，除中藥類外的促生長類藥物飼料添加劑被禁止添加到動物飼料中，天然植物飼料原料開始被人們廣泛關(guān)注。天然植物飼料原料中富含多酚、多糖、黃酮和單寧等多種營養(yǎng)活性物質(zhì)，其具有抗菌、抗炎和抗氧化應(yīng)激等多種生物學(xué)功能，能激活自身免疫系統(tǒng)，提高飼料報酬、減少畜禽污染，并可以促進維持動物氧化應(yīng)激—炎癥反應(yīng)—免疫三方聯(lián)動效應(yīng)的穩(wěn)定?？茖W(xué)合理地利用天然植物飼料原料活性物質(zhì)的生物學(xué)特性是畜禽減抗、健康、綠色養(yǎng)殖的核心環(huán)節(jié)。

天然植物飼料原料活性物質(zhì)成分復(fù)雜，其含有的化合物種類多，分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜，多種活性成分之間具有協(xié)同或頡頏作用，發(fā)揮主效作用的并不是單一的化學(xué)成分。因此對天然植物飼料原料活性物質(zhì)中主效因子的挖掘與探究是推動天然植物飼料原料活性物質(zhì)應(yīng)用于生產(chǎn)實踐的重要部分，結(jié)合天然植物飼料原料活性物質(zhì)中變化的化學(xué)成分和生物學(xué)試驗結(jié)果，建立兩者的“譜效關(guān)系學(xué)”，反映天然植物飼料原料活性物質(zhì)內(nèi)在的質(zhì)量標(biāo)準，使其更加科學(xué)化和標(biāo)準化。目前指紋圖譜是反映營養(yǎng)活性物質(zhì)“多組分，多靶點”特點的重要手段，而譜效關(guān)系是基于指紋圖譜的更深一層次的科學(xué)研究，能夠反映物質(zhì)的內(nèi)在質(zhì)量，并從整體上對內(nèi)在化合物協(xié)同或頡頏作用進行評價。合理的利用譜效關(guān)系能夠鑒別天然植物飼料原料活性物質(zhì)真實性、一致性和穩(wěn)定性，從而有利于天然植物飼料原料活性物質(zhì)在實踐中的應(yīng)用，促進其發(fā)展，實現(xiàn)天然植物飼料原料活性物質(zhì)在畜牧上廣泛應(yīng)用。文章介紹了天然植物飼料原料活性物質(zhì)譜效關(guān)系的研究方法和應(yīng)用概況，以期為研究天然植物飼料原料活性物質(zhì)中主效因子提供理論依據(jù)和研究思路。

1 天然植物飼料原料活性物質(zhì)譜效關(guān)系的方法設(shè)計

譜效關(guān)系的研究是結(jié)合化學(xué)成分與活性作用的研究，將“譜”與“效”相結(jié)合，從物質(zhì)整體研究其有效化學(xué)成分與作用的關(guān)系，通過一定的分析方法將不同品種、來源、批次的樣品進行指紋圖譜建立和體內(nèi)或體外活性效果試驗，再將每一個指紋峰和每一個樣本產(chǎn)生的活性效果分別看成一個變量，采用一定的數(shù)據(jù)分析方法將指紋峰和活性效果進行關(guān)聯(lián)性分析，建立譜效模型，闡明指紋峰與活性效果之間的關(guān)系，從而進一步確立發(fā)揮活性作用的主效因子。主要研究思路及內(nèi)容見圖1。

1.1 樣品的前處理

目前譜效關(guān)系多采用不同產(chǎn)地、批次和收獲時間的樣品，來源不同的樣品其成分和效果存在著一定的差異，通常采用同種方法對樣品進行處理，篩選有效部位且最大程度地保留有效成分是樣品前處理的最終目的。目前對樣品處理普遍使用的方法包括超聲提取法、微波法、酶提法和乙醇萃取法等。采用不同的方法對丹參進行提取，發(fā)現(xiàn)相對于傳統(tǒng)提取方法微波提取的產(chǎn)物成分及含量更多。同樣，不同的方法對甘草進行提取分析，發(fā)現(xiàn)提取工藝對甘草有效成分的提取有著顯著的影響，其中乙醇萃取后的甘草活性成分及含量最多。因此，選擇合理的前處理方法是保證譜效關(guān)系準確性的基礎(chǔ)。

1.2 譜效關(guān)系“譜”的建立

譜效關(guān)系研究的基礎(chǔ)是指紋圖譜的建立，最大限度地獲取活性物質(zhì)中有效的化學(xué)信息指紋圖譜，減少活性成分的遺漏是建立譜效信息的關(guān)鍵；營養(yǎng)活性物質(zhì)中有效成分復(fù)雜、理化性質(zhì)差異大，一種檢測方法或者單一的分析方法不能準確地對其內(nèi)在的成分進行分析。因此，選擇合適的分析方法至關(guān)重要。

1.2.1 高效液相色譜法

HPLC 應(yīng)用于眾多領(lǐng)域，并在近些年得到了很大的改進，它具有分離效率高、分析速度快、樣品消耗少、定量精密度高、穩(wěn)定性好、色譜柱可重復(fù)使用等優(yōu)點，廣泛用于活性物質(zhì)的定性定量分析；此外，HPLC可以與不同的檢測器偶聯(lián)，可以滿足不同樣品的測定，一定程度上擴大了應(yīng)用范圍，但是HPLC 在使用過程中產(chǎn)生的廢棄物容易污染環(huán)境，并且很難分析大分子化合物。HPLC 在分析黃酮、多酚和多糖等營養(yǎng)活性物質(zhì)方面應(yīng)用廣泛且效果顯著，使用HPLC 對不同產(chǎn)地的桑葉進行質(zhì)量評價，發(fā)現(xiàn)為新綠原酸、隱綠原酸、綠原酸和蘆丁是桑葉中的主要活性成分，且表現(xiàn)出較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。王兵等（2021）建立復(fù)方黃芪飼料添加劑的指紋圖譜后分析發(fā)現(xiàn)，復(fù)方黃芪飼料添加劑中主要含黃酮類和類黃酮類化合物，主要含有芒柄花黃素、毛蕊異黃酮葡萄糖苷及左旋紫草素。對于復(fù)雜且多組分的天然植物飼料原料活性物質(zhì)，利用HPLC易于改變分析條件等優(yōu)勢可以實現(xiàn)對復(fù)雜組分的快速有效分離，能廣泛地應(yīng)用于譜效關(guān)系的研究。

1.2.2 超高效液相色譜法

與傳統(tǒng)HPLC 相比，UPLC 通過填充小顆粒的色譜柱（小于2 μm）后能夠承受高背壓，提高色譜分辨率和靈敏度，顯著縮短試驗時間，同時也減少了溶劑消耗，使其對環(huán)境的負面影響較小，目前UPLC廣泛用于檢查飼料中非法物質(zhì)的添加以及某些常規(guī)營養(yǎng)物質(zhì)的檢測。采用UPLC-Orbitrap-MS/MS 對不同來源的綠茶進行成分分析，發(fā)現(xiàn)沒食子兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶精-（4β→8）-表兒茶精-3-O-酸酯和牡荊素為綠茶中的主要標(biāo)志性化合物，該方法可有效的對活性物質(zhì)進行表征。相關(guān)研究也證明UPLC可作為一種有效地分析方法對飼料中維生素、蛋白質(zhì)等常規(guī)營養(yǎng)活性物質(zhì)和天然飼料原料中黃酮、多酚和多糖等營養(yǎng)活性物質(zhì)進行表征代謝分析。

1.2.3 氣相色譜法

GC是一種主要用于揮發(fā)性化合物表征和鑒定的分析技術(shù)，與其他傳統(tǒng)的提取分離方法相比，GC具有靈敏度高、分離度好、分析速度快、樣品消耗小等優(yōu)點，但是由于熱不穩(wěn)定化合物在分析的過程中極易揮發(fā)分解，使GC 不適用于大多數(shù)營養(yǎng)活性物質(zhì)的分析。目前GC廣泛用于揮發(fā)性的營養(yǎng)活性物質(zhì)如植物精油類，佛手屬于天然植物飼料原料的一種，其富含精油類營養(yǎng)活性物質(zhì)，利用GC-MS分析，發(fā)現(xiàn)佛手瓜中含有117 種精油成分，主要為萜類、倍半萜類和醇類，其中檸檬烯和γ-松油烯含量最多。利用GC-MS鑒別出姜黃精油提取物中含有11 種化合物，占揮發(fā)油的90.29%，其中松油烯（52.88%）和α-水芹烯（21.13%）為主要成分，這些精油在體外試驗中發(fā)揮出顯著的抗炎活性。GC在譜效關(guān)系研究中的應(yīng)用相對狹隘，但對于熱穩(wěn)定化合物的分析效果良好。

1.2.4 色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法

色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是將色譜技術(shù)和質(zhì)譜聯(lián)合使用，配合適當(dāng)?shù)慕涌诮M合成一個完整的分析系統(tǒng)，理論上能發(fā)生電離的化學(xué)成分均可被檢測出來，其克服了其他方法無法確定有效成分的一些缺點，是目前國內(nèi)外最成熟的檢測分析方法之一。其中UPLC-MC、HPLC-MC、GC-MS是譜效分析中比較常用的方法，同時其與代謝組學(xué)聯(lián)合使用能更好地闡明活性物質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主效因子。Peng 等（2020）使用UPLC-ESI-QTOF/MS 和HS-SPME-GC-MS 法鑒別出杭白菊中木犀草素、芹菜素和沒食子兒茶素沒食子酸酯3種黃酮類化合物和α-萜品醇、麝香草酚和胡椒堿等4 種單帖類化合物為杭白菊發(fā)揮強黃嘌呤氧化酶抑制的主效因子，闡明了杭白菊發(fā)揮活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。采用UPLC-MS/MS 法分析枸杞抗氧化活性發(fā)現(xiàn)在其發(fā)揮抗氧化活性的同時，有6種化合物發(fā)揮著主要作用，其中綠原酸、槲皮素、山奈酚和異鼠李素的貢獻最大。總之，活性物質(zhì)中各類成分復(fù)雜，單一的檢測器或分析方法建立的難以準確地對其中的主效因子進行表征，使用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法能實現(xiàn)信息的互補及獲得更加完善的樣品信息，可以對樣品進行更準確的分析。

1.2.5 高效液相色譜柱后生物活性在線檢測法

高效液相色譜柱后生物活性在線檢測法克服了傳統(tǒng)分離方法工作量大、分離盲目、成本高的缺點，其基于酶、受體和抗氧化劑等方面對營養(yǎng)活性物質(zhì)的作用效果進行在線分析，減少了體外試驗，對特定標(biāo)志物具有活性的新靶化合物才需要進一步分離和測試，極大地提高了工作效率。該方法可用于營養(yǎng)活性物質(zhì)中抗炎抗氧化劑、乙酰膽堿酯酶（AchE）抑制劑、磷酸二酯酶抑制劑等關(guān)鍵靶標(biāo)成分的篩選。Wang 等（2020）成功建立了一種用于初步篩選多組分體系黃酮類營養(yǎng)活性成分，實現(xiàn)了體外腸吸收模型、固相萃取和高效液相色譜的在線耦合，利用該方法對黃芩、虎杖中的黃酮類營養(yǎng)活性物質(zhì)進行篩選得到14種黃酮類營養(yǎng)活性成分，該方法與傳統(tǒng)方法相比更加準確，更能全面地從復(fù)雜成分中篩選出靶標(biāo)成分，適用于黃酮類營養(yǎng)活性物質(zhì)中主效因子的篩選與測定。采用在線HPLC-DPPH/ABTS 和HPLC-PDA-FL 方法對丹參中發(fā)揮DPPH/ABTS+清除和AchE 抑制作用的主效因子進行篩選，證明丹參中含量較多的主要峰發(fā)揮主要的DPPH/ABTS+氧化自由基的清除作用，而原兒茶醛、丹酚酸H、丹酚酸I和紫草酸等較弱的峰表現(xiàn)出較強的AchE抑制作用。高效液相色譜柱后生物活性在線檢測法將單一的研究模式轉(zhuǎn)向“化合物+生物活性”模式，方便了對天然營養(yǎng)活性成分的研究。

1.3 譜效關(guān)系“效”的建立

1.3.1 體外試驗

體外試驗利用離體細胞、器官或者已經(jīng)公認有效的試劑盒模型研究活性物質(zhì)在一特定整體中一部分的活性作用，效果顯著且直觀，精準的體外分析對于在細胞和亞細胞水平上的機制研究具有重要意義。目前廣泛采用體外試驗對營養(yǎng)活性物質(zhì)的抗菌、抗炎、抗氧化等活性進行分析，利用DPPH 法、ABST 法和酪氨酸酶激活法對蘋果花中抗氧化和酪氨酸酶抑制劑主效因子的研究，證明金絲桃苷、根皮苷和槲皮素是蘋果花發(fā)揮抗氧化活性的主效因子，根皮苷和金絲桃苷發(fā)揮著酪氨酸酶抑制活性，同時發(fā)現(xiàn)選用不同的抗氧化分析方法最終得到的結(jié)果會略有差異，但大體一致，證明了利用體外試驗驗證譜效關(guān)系的可行性。同樣，對枸杞的抗氧化活性的主效因子進行研究，發(fā)現(xiàn)DPPH 法和ABTS 法的結(jié)果基本一致，其發(fā)揮抗氧化活性的主效因子主要為綠原酸、山奈酚、槲皮素和異鼠李素，通過與標(biāo)準品和其他參考文獻比較也驗證了它們的強抗氧化活性。總之，體外試驗?zāi)苡行У乜刂圃囼灄l件，重復(fù)性良好，耗材少且試驗結(jié)果易于分析，但相對于體內(nèi)試驗缺少一定的真實性。

1.3.2 體內(nèi)試驗

體內(nèi)試驗一般采用正常或者人為設(shè)定的特定生理條件的動物模型，按照試驗需要對動物進行處理和分組后進行飼養(yǎng)，之后觀察目標(biāo)活性效果，記錄數(shù)據(jù)，其可以在動物麻醉或者清醒時進行試驗，這種方法極大地保持了機體的完整性，使機體與外界保持聯(lián)系，接近實際的作用效果，結(jié)果更為可靠。該方法一般使用小動物當(dāng)作試驗載體，如利用鵪鶉研究菊苣降尿酸的效果，發(fā)現(xiàn)菊苣中的秦皮甲素、綠原酸、菊苣酸、異綠原酸和14（15）-二烯-3α-醇在降尿酸上發(fā)揮著重要作用，同時也為研究活性物質(zhì)降尿酸的主效因子的研究提供了一個通用模型。繆艷燕等（2020）以炎癥小鼠為試驗?zāi)Ｐ吞骄拷疸y花抗炎作用的譜效關(guān)系，發(fā)現(xiàn)蘆丁、金絲桃苷、異綠原酸B、木犀草素、綠原酸、馬錢苷、新綠原酸、異綠原酸C 和異綠原酸A 是金銀花發(fā)揮抗炎作用的主效因子。體內(nèi)試驗在一定程度上提高了譜效關(guān)系的可信性，其適用于神經(jīng)反射、免疫調(diào)節(jié)及內(nèi)部器官功能等研究，符合實際條件，為研究營養(yǎng)活性物質(zhì)中的主效因子提供了方法。

2 譜效關(guān)系的分析方法

指紋圖譜中的峰與活性效果數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性需要相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析方法進行處理和分析。目前科學(xué)研究中還沒有一個統(tǒng)一的模型可以完全科學(xué)地將“譜”與“效”相結(jié)合。但在目前的研究中，已有許多合理的數(shù)據(jù)分析方法被大家所認可，并證明其在譜效關(guān)系的研究中可靠性和真實性較高。

2.1 典型相關(guān)性分析（CCA）

CCA 常用于分析和量化兩個多維變量之間的線性關(guān)系。該方法以營養(yǎng)活性物質(zhì)的色譜指紋圖譜和活性效果為變量，分析兩者之間的相關(guān)性。在用來評價相關(guān)程度的相關(guān)系數(shù)中，Pearson 的相關(guān)系數(shù)在目前最常用，它不僅顯示兩個變量之間的相關(guān)強度，還提供了兩者之間的正負相關(guān)性，但CCA 在分析過程中只考慮了指紋圖譜與活性效果之間的關(guān)系，忽略了其他相關(guān)變量的影響。Zheng 等（2014）利用CCA 對附子及其三種加工產(chǎn)物與肝臟線粒體新陳代謝的譜效關(guān)系進行了研究，確定了指紋圖譜中有26 個峰與肝臟線粒體代謝成典型相關(guān)，鑒定了新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿和苯甲酰次烏頭堿為影響線粒體代謝的主效因子，其為附子產(chǎn)品的開發(fā)利用提供了理論參考。

2.2 主成分分析（PCA）

PCA 是一種用于分析和簡化數(shù)據(jù)集的方法。它能夠降低數(shù)據(jù)集的維數(shù)，保持對數(shù)據(jù)集方差的最大貢獻，突出數(shù)據(jù)的異同點，在譜效關(guān)系的研究中，每個色譜峰的面積被量化為數(shù)據(jù)并標(biāo)準化，之后再對經(jīng)過標(biāo)準化處理的數(shù)據(jù)矩陣進行PCA 分析。利用DPPH 法結(jié)合PCA 對不同產(chǎn)地蜂膠樣品不同成分抗氧化活性進行分析，結(jié)果表明蜂膠中異芥酸、咖啡酸、海角、3,4-二甲氧基肉桂酸、白楊素和芹菜素的含量與蜂膠的抗氧化性能密切相關(guān)，利用該方法可為蜂膠的質(zhì)量的評價提供一定的理論依據(jù)。

2.3 聚類分析（CA）

CA 又稱群體分析，是基于相似的基礎(chǔ)上收集數(shù)據(jù)來分類的基本原理，通過多元統(tǒng)計分析將樣本的數(shù)據(jù)劃分為多個分段，簡化了數(shù)據(jù)的復(fù)雜性。CA 主要有層次聚類分析（HCA）、動態(tài)聚類方法和模糊聚類方法。在這些聚類分析方法中，HCA 是最常用的CA 方法，可用于初步評價活性物質(zhì)的譜效關(guān)系，但它不能對“譜”和“效”之間的關(guān)系提供準確的定量分析。Fan 等（2020）對當(dāng)歸抗氧化譜效關(guān)系進行研究時，利用HCA 將不同來源的當(dāng)歸分為了三大類，同時結(jié)合PCA 進行分析，發(fā)現(xiàn)阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、藁本內(nèi)酯、3-正丁基苯酚內(nèi)酯、綠原酸、阿魏酸松柏酯和洋川芎內(nèi)酯A 是當(dāng)歸發(fā)揮抗氧化活性的主效因子。

2.4 偏最小二乘回歸分析（PLS）

PLS 已成為數(shù)據(jù)集探索性分析中譜效關(guān)系研究的主要方法。PLS 簡化了數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)和兩組變量之間的相關(guān)性分析，其能充分利用數(shù)據(jù)信息，其根據(jù)variable importance in projection（VIP值）反映每個自變量對因變量的相關(guān)程度，當(dāng)VIP值大于1.0時，變量之間存在顯著的聯(lián)系，進而將不同峰值對功效的貢獻可以用VIP的價值來清晰地反映出來。利用PLS研究枳殼揮發(fā)油的抑菌活性，發(fā)現(xiàn)α-萜品醇、D-檸檬烯、γ-萜品烯、4-蒈烯、大根香葉烯D、棕櫚酸甲酯為枳殼揮發(fā)油發(fā)揮抑菌作用的潛在主效因子。利用此法對知母的不同提取物進行抗氧化活性譜效關(guān)系研究，發(fā)現(xiàn)知母中的芒果苷、知母皂苷BⅡ是發(fā)揮活性的主效因子。

2.5 灰色關(guān)聯(lián)分析（GRDA）

GRDA 是灰色系統(tǒng)理論的一部分，是由鄧聚龍教授首創(chuàng)的一種系統(tǒng)科學(xué)理論（Grey Theory），GRDA是根據(jù)各因素曲線的幾何相似度來確定各因素之間的相關(guān)性，需要對原始數(shù)據(jù)進行處理后再計算相關(guān)系數(shù)。是一種簡單而有效的譜效關(guān)系綜合評價方法。利用灰色關(guān)聯(lián)對肉豆蔻中的抗炎主效因子進行分析發(fā)現(xiàn)，在發(fā)揮抗炎活性的過程中有5 個峰與抗炎活性關(guān)聯(lián)性極強，但未鑒定為何種物質(zhì)。邢冬梅等（2020）將GRDA 與PLS 相結(jié)合，初步確定了當(dāng)歸揮發(fā)油中的Z-藁本內(nèi)酯、6-丁基-1,4-環(huán)庚二烯、丁烯基苯酞和α-蒎烯等物質(zhì)為發(fā)揮抗氧化活性的主效因子。目前GRDA 在譜效關(guān)系的研究中已被廣泛使用。

2.6 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析（ANN）

ANN是通過模仿動物神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)行為特征，對復(fù)雜數(shù)據(jù)進行分布式并行信息處理的算法數(shù)學(xué)模型，能夠從未知大量的復(fù)雜數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)一定的規(guī)律，其避免了傳統(tǒng)分析方法的復(fù)雜性，通過分析選擇適當(dāng)?shù)哪Ｐ秃瘮?shù)對數(shù)據(jù)進行分析，利用非線性擬合功能探究事物間模糊性規(guī)律，簡化了建模過程，提高了數(shù)據(jù)處理效率。楊中林等（2005）采用PCA結(jié)合ANN的方法對厚樸指紋圖譜與厚樸清除活性氧能力的關(guān)系進行分析，其構(gòu)建了一種效果穩(wěn)定、運算速度快和準確性高的的網(wǎng)絡(luò)模型，為厚樸抗氧化活性的譜效關(guān)系研究提供了一種新的方法。此外，采用體外DPPH 法和Fe2+絡(luò)合法探究枸杞蜜的抗氧化活性譜效關(guān)系，利用GRDA、GRDA 結(jié)合ANN 對譜效關(guān)系進行分析，發(fā)現(xiàn)其抗氧化能力與枸杞蜜中的總多酚和總黃酮含量呈顯著劑量-效應(yīng)關(guān)系，并分析出2，3-二羥基苯甲酸、山奈酚、柚皮素和p-香豆酸是枸杞蜜的抗氧化活性的主效因子。

3 主效因子的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定

在譜效關(guān)系研究中，通常以標(biāo)準品對照、文獻資料查詢比較和色譜分析等方法對譜效分析得到的主效峰進行化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定。目前色譜技術(shù)被廣泛應(yīng)用于主效峰化學(xué)成分的分離和鑒定，其中制備型高效液相色譜（PHPLC）和HSCCC 以分離能力強、檢測方便、回收率高的優(yōu)勢成為譜效關(guān)系研究的重要方法。PHPLC 是一種利用高壓、大流量的液體輸送系統(tǒng)在高分辨率、大內(nèi)徑、大容量的分離柱上對樣品進行高純度分離的方法，該方法在純度、回收率和分離效率等方面均優(yōu)于傳統(tǒng)方法，利用PHPLC 將地瓜提取物中的綠原酸可提取純化到9.86%，為在植物中提取綠原酸提供了新的技術(shù)支持，也反映了其在譜效關(guān)系研究中的高效性和實用性。HSCCC 是逆流色譜的一種形式，它是基于化合物在兩個不相混的液相之間的分配而沒有載體基質(zhì)，可以消除固體載體中的不可逆吸附，利用UPLC-MS/MS-HSCCC 對蘋果花抗氧化和酪氨酸酶活性成分進行分析，鑒定出金絲桃苷、阿夫澤林、山奈酚和槲皮素為抗氧化活性的主效因子，根皮苷、金絲桃苷和阿夫澤林為發(fā)揮酪氨酸酶抑制作用的主效因子。它們作為一種無載體的液-液分配色譜技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的制備分離。

4 天然植物飼料原料活性物質(zhì)譜效關(guān)系的研究概況

2019 年國家發(fā)布了《天然植物飼料原料通用要求》，將杜仲、姜黃等117種天然植物被列入我國飼料原料目錄。近年來，廣大學(xué)者在天然植物譜效關(guān)系研究過程中，以不同產(chǎn)地、品種和提取方式得到的樣本作為研究對象，研究其指紋圖譜與其活性關(guān)系的譜效關(guān)系，為天然植物飼料原料活性物質(zhì)譜效關(guān)系的研究奠定了基礎(chǔ)（見表1）。

表1 天然植物飼料原料中活性物質(zhì)的譜效關(guān)系研究

5 展望

通過選用合適的方法對天然植物飼料原料活性物質(zhì)進行譜效關(guān)系的研究，揭示了天然飼料原料中營養(yǎng)活性物質(zhì)發(fā)揮活性作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，實現(xiàn)了化學(xué)成分與活性效果的直觀反映，是研究天然植物飼料原料活性物質(zhì)內(nèi)在品質(zhì)和發(fā)揮作用機制的一種新的研究方法。隨著對天然植物飼料原料中營養(yǎng)活性物質(zhì)研究的不斷深入，準確、全面地對其發(fā)揮作用的主效因子和作用機制進行研究將促進畜牧業(yè)的精準、健康養(yǎng)殖，實現(xiàn)畜牧業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。