董金龍

（長泰金諾農(nóng)業(yè)科技有限公司，福建 漳州 363902）

0 引 言

【研究意義】紅心蓮（Echeveria‘Perle von Nürnberg’）又名紫珍珠，屬景天科（Crassulaceae）擬石蓮花屬（Echeveria），是一種常見的多肉植物[1]。該品種在福建省漳州市引進(jìn)后，逐漸成為漳州當(dāng)?shù)氐闹匾虡I(yè)化品種。據(jù)統(tǒng)計至2018年，以紅心蓮為主的多肉植物已成為漳州地區(qū)盆花銷售前十位的產(chǎn)品[2]。近年來，紅心蓮等多肉植物炭疽病發(fā)生嚴(yán)重，主要為害幼嫩葉片，發(fā)病初期葉片出現(xiàn)淺黑色小斑，后逐漸擴(kuò)大，呈水漬狀，最后擴(kuò)展成圓形或近圓形病斑，濕度大時可見斑面上散生波浪形分布的黑色小點，嚴(yán)重時可導(dǎo)致植株死亡。該病嚴(yán)重制約紅心蓮等多肉植物的產(chǎn)量與品質(zhì)，對當(dāng)?shù)氐亩嗳庵参锂a(chǎn)業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)影響。對該病原菌的生物學(xué)特征及其高效安全殺菌劑篩選研究可為該病的防治奠定基礎(chǔ)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】姚錦愛等[3]曾對漳州發(fā)生的紅心蓮多肉植物炭疽病進(jìn)行了相關(guān)研究，明確該病病原菌為毀滅炭疽菌（Colletotrichum destructivum）。毀滅炭疽菌在國內(nèi)外均有相關(guān)報道，是一種世界性的植物病原菌，寄主廣泛，可侵染金魚草、苜蓿、山葵等植物，在適宜環(huán)境下發(fā)生加速，主要侵染植株的葉、莖稈及根部[4-6]?！颈狙芯壳腥朦c】毀滅炭疽菌是紅心蓮炭疽病首次報道的致病菌，有關(guān)該病原菌的生物學(xué)特征及其高效安全殺菌劑篩選等研究有待深入進(jìn)行?！緮M解決的關(guān)鍵問題】明確紅心蓮毀滅炭疽菌的生物學(xué)特性，篩選出具有良好防治效果的高效安全殺菌劑，為紅心蓮毀滅炭疽病的精準(zhǔn)綜合治理提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株為炭疽病菌毀滅炭疽菌（C.destructivum），由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供。

供試藥劑：98 %甲基硫菌靈（Thiophanate-Methyl，苯并咪唑類，武漢江心宇生物科技有限公司）、96.5 %咪鮮胺原藥（Prochloraz，咪唑類，輝豐農(nóng)化股份有限公司）、95 %苯醚甲環(huán)唑（Difenoconazole，三唑類，溫州綠佳化工有限公司）、96 %吡唑醚菌酯原藥（Pyraclostrobin，甲氧基丙烯酸酣類，江蘇耘農(nóng)化工有限公司）、98.1 %多菌靈原藥（Carbendazim，苯并咪唑類，輝豐農(nóng)化股份有限公司）、99.8 %咯菌腈原藥（Fludioxonil，吡咯類，陜西恒潤化學(xué)工業(yè)有限公司）。

1.2 毀滅炭疽菌生物學(xué)特性

1.2.1 溫度對毀滅炭疽菌菌絲生長的影響 取新鮮毀滅炭疽菌菌餅（?=5.0 mm，下同）接種于PDA平板（d=9.0 cm，下同）中央，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，區(qū)間為10～40 ℃，每5 ℃為一試驗組，共7個梯度，每處理3次重復(fù)，6 d后采用十字交叉法測量菌落直徑[7]。

1.2.2 pH值對毀滅炭疽菌菌絲生長的影響 取新鮮毀滅炭疽菌菌餅接種于pH為4、5、6、7、8、9、10、11的PDA平板中央，在28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理3次重復(fù)， 6 d后測量菌落直徑，測定方法同1.2.1。

1.2.3 光照對毀滅炭疽菌菌絲生長的影響 取新鮮毀滅炭疽菌菌餅接種于PDA平板中央，依次放置在光周期為0L/24D、12L/12D和24L/0D的28 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，6 d后測量菌落直徑，每處理3次重復(fù)，測定方法同1.2.1。

1.2.4 不同碳、氮源對毀滅炭疽菌的影響 以蔗糖、淀粉、麥芽糖、葡萄糖、乳糖為供試碳源，以查氏培養(yǎng)基（NaNO33 g、K2HPO41 g、MgSO40.5 g、KCl 0.5 g、FeSO4·7H2O 0.01 g、蔗糖30 g、瓊脂粉16 g、蒸餾水定容至1 000 mL）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以不加碳源培養(yǎng)基為空白對照，以分別加入30 g的供試碳源為處理組，測定各碳源對病原菌菌絲生長的影響，28 ℃培養(yǎng)6 d后測量菌落直徑，每處理3次重復(fù)。以牛肉浸膏、酵母粉、硫酸銨、蛋白胨、硝酸鈉為供試氮源，以查氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以不加氮源培養(yǎng)基為空白對照，以分別加入30 g的供試氮源為處理組，測定各氮源對病原菌菌絲生長的影響，28 ℃培養(yǎng)6 d后測量菌落直徑，每處理3次重復(fù)。

1.3 6種殺菌劑的室內(nèi)毒力測定

采用菌絲生長速率法測定[8]。用無菌水將6種供試藥劑配置成質(zhì)量濃度為 1 mg·L-1的母液，在PDA培養(yǎng)基內(nèi)加入各藥劑母液，制成質(zhì)量濃度為0.002、0.01、0.05、0.25、1.25、6.25 mg·L-1的含藥PDA平板。取毀滅炭疽菌菌餅接種于各藥劑處理的PDA平板中央，以純PDA平板為對照， 28 ℃恒溫培養(yǎng)6 d后測量菌落直徑，每處理3次重復(fù)，計算抑制率。菌絲生長抑制率/%= [（對照組菌落直徑-藥劑處理組菌落直徑）/（對照組菌落直徑-菌餅直徑）]×100。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

在DPS 7.05數(shù)據(jù)處理軟件上，利用Duncan's新復(fù)極差法對生物學(xué)特性結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析；根據(jù)室內(nèi)毒力測定抑制率計算6種殺菌劑對供試菌株的有效抑制中濃度EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌生物學(xué)特性

2.1.1 溫度對毀滅炭疽菌菌絲生長的影響 當(dāng)培養(yǎng)溫度在10～30 ℃時，毀滅炭疽菌的菌落直徑隨溫度的升高而增加，30 ℃時最大，為78.67 mm，當(dāng)溫度在35 ℃以上時，菌落直徑隨溫度的升高而減少，在40 ℃時未見生長。測定結(jié)果表明紅心蓮毀滅炭疽病菌菌絲生長最適溫度為30 ℃，且不耐高溫（圖1）。

圖1 溫度對毀滅炭疽病菌菌絲生長的影響Fig.1 Mycelial growth of C.destructivum affected by temperature

2.1.2 pH值對毀滅炭疽菌菌絲生長的影響 當(dāng)培養(yǎng)基pH在4～8時，毀滅炭疽菌菌落直徑隨pH的升高而增加，在pH為8時菌落直徑最大，為73.67 mm，在pH為9～11時，菌落直徑隨溫度的升高而減少。測定結(jié)果表明紅心蓮毀滅炭疽病菌菌絲生長最適pH為8，整體喜好偏堿性環(huán)境（圖2）。

圖2 pH對毀滅炭疽病菌菌絲生長的影響Fig.2 Mycelial growth of C.destructivum affected by pH

2.1.3 光周期對毀滅炭疽菌菌絲生長的影響 毀滅炭疽菌在光周期為0L/24D、12L/12D和24L/0D 3種條件下，菌絲均能生長，且三者無顯著性差異。測定結(jié)果表明光周期對菌絲生長影響不大（圖3）。

圖3 光周期對毀滅炭疽病菌菌絲生長的影響Fig.3 Mycelial growth of C.destructivum affected by photoperiods

2.1.4 碳、氮源對毀滅炭疽菌菌絲生長的影響 紅心蓮毀滅炭疽病菌在含不同供試碳、氮源的平板上均能生長，生長速度差異顯著。碳源中淀粉、麥芽糖和葡萄糖的菌絲生長速度顯著高于對照組，其中以淀粉為碳源的菌絲生長速度最快，培養(yǎng)6 d后直徑為74.67 mm（圖4）；氮源中酵母和蛋白胨的菌絲生長速度顯著高于對照組，其中以酵母為氮源的菌絲生長速度最快，培養(yǎng)6 d后直徑為79.33 mm（圖5）。碳、氮源篩選試驗結(jié)果表明，紅心蓮毀滅炭疽病菌菌絲生長的最適碳、氮源分別為淀粉和酵母。

圖4 碳源對毀滅炭疽病病原菌菌絲生長的影響Fig.4 Mycelial growth of C.destructivum affected by carbon source

圖5 氮源對毀滅炭疽病病原菌菌絲生長的影響Fig.5 Mycelial growth of C.destructivum affected by nitrogen source

2.2 6種殺菌劑室內(nèi)毒力測定

室內(nèi)毒力測定結(jié)果如表1所示，供試的6種不同化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制的殺菌劑均表現(xiàn)出抑制作用，其中咯菌腈的毒力最強(qiáng)，EC50為0.023 6 mg·L-1；其次為咪鮮胺和吡唑醚菌酯，EC50分別為0.030 6和0.048 7 mg·L-1；甲基硫菌靈和苯醚甲環(huán)唑的毒力較弱，EC50分別為0.152 6和0.195 5 mg·L-1。多菌靈的毒力最弱，EC50為0.219 9 mg·L-1。試驗結(jié)果說明，咯菌腈對紅心蓮毀滅炭疽菌的毒力最強(qiáng)，而多菌靈對該病原菌的毒力最弱。

表1 6種殺菌劑對毀滅炭疽病菌的室內(nèi)毒力Table 1 Toxicities of 6 fungicides against C. destructivum

3 討論與結(jié)論

炭疽病是一種世界性的病害，由炭疽菌屬（Colletotrichum）真菌引起，其寄主廣泛，多發(fā)生于高溫高濕地區(qū)，影響寄主植物的健康[7]。由毀滅炭疽菌（C.destructivum）引起的炭疽病是景天科多肉植物紅心蓮種植過程中的重要病害之一。該病主要為害幼嫩葉片，嚴(yán)重影響紅心蓮的產(chǎn)量與觀賞價值[3]。該病的發(fā)生流行是寄主、病原菌和環(huán)境互作的結(jié)果。因此，明確紅心蓮炭疽病病原菌毀滅炭疽菌的生物學(xué)特征和生長條件有助于制定可持續(xù)管理策略[9]。對毀滅炭疽菌（C.destructivum）進(jìn)行生物學(xué)特性研究，結(jié)果表明，毀滅炭疽菌絲生長受溫度、pH值、碳氮源的影響顯著。病原菌菌絲生長最適溫度為30 ℃，這與王芳等[10]在多肉植物青星美人暹羅炭疽菌（C.siamense）的最適溫度一致；菌落生長的最適pH為8，這與Sun等[11]在向日葵上發(fā)現(xiàn)的毀滅炭疽菌最適pH一致；病原菌菌落生長不受光周期的影響，這與其他同屬的炭疽菌存在一定差異，例如張琳等[12]在青皮南瓜上發(fā)現(xiàn)的南瓜炭疽病菌（C.brevisporum）的菌落生長就受光周期影響；紅心蓮毀滅炭疽病菌菌絲生長的最適碳、氮源分別為淀粉和酵母，其中最適碳源與婁喜艷等[13]在月季上發(fā)現(xiàn)的膠孢炭疽菌（C.gloeosporioides）一致，但最適氮源與之不同，可能是由于不同寄主不同種的病原菌在生理特性上存在的差異。

目前，化學(xué)防治仍是炭疽菌屬病原真菌主要防治手段。6種不同化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制殺菌劑的室內(nèi)毒力試驗結(jié)果表明，咯菌腈、咪鮮胺和吡唑醚菌酯對多肉毀滅炭疽病菌具有較強(qiáng)毒力，EC50分別為0.023 6、0.030 6 和 0.048 7 mg·L-1。這些殺菌劑對同屬的其他植物寄主的炭疽菌也具有較強(qiáng)毒力。孟珂等[14]對9種薄殼山核桃炭疽病病原菌研究表明，咯菌腈和咪鮮胺對9種炭疽菌均有較強(qiáng)毒力，EC50值范圍為0.14～0.15 mg·L-1。高鵬等[15]對燕麥炭疽病病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，吡唑醚菌酯抑制作用較強(qiáng)，EC50值為0.002 9 mg·L-1。本試驗對紅心蓮毀滅炭疽菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，但其田間防效還受寄主的生理特性、種植環(huán)境等因素影響[16]。因此，可以對紅心蓮毀滅炭疽病在田間的防效進(jìn)行深入研究，為紅心蓮毀滅炭疽病的防治提供依據(jù)。