苑錚博 綜述，李承龍，李澤福 審校

(濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，山東 濱州 256603)

膠質(zhì)瘤是一種常見于成人的侵襲性星形膠質(zhì)細(xì)胞惡性腫瘤。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的分類，膠質(zhì)瘤分為4級(jí)，其中1級(jí)和2級(jí)膠質(zhì)瘤被定義為低級(jí)別膠質(zhì)瘤，而3級(jí)和4級(jí)膠質(zhì)瘤被定義為高級(jí)別膠質(zhì)瘤[1]。惡行程度最高的膠質(zhì)瘤亦稱作Ⅳ級(jí)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)[2]。目前，最大限度地切除腫瘤和術(shù)后分次放射是治療膠質(zhì)瘤的標(biāo)準(zhǔn)方案[3]，患者中位生存期為12～15個(gè)月[4]，26.5%的患者可存活2年。膠質(zhì)瘤浸潤(rùn)性的特性決定手術(shù)不能完全切除所有腫瘤組織[5]，由腫瘤殘留物引起的復(fù)發(fā)會(huì)在術(shù)后不久發(fā)生[6]。盡管手術(shù)切除、輔助放射治療和替莫唑胺(TMZ)化療仍是主要的治療策略，但基于腫瘤的固有免疫和干細(xì)胞特性的個(gè)體化治療可能會(huì)使患者獲得生存益處。

一般認(rèn)為，膠質(zhì)瘤的主要發(fā)病機(jī)制包括重要原癌基因的激活、抑癌基因的失活和分子網(wǎng)絡(luò)的失衡[7]。盡管對(duì)膠質(zhì)瘤的研究在神經(jīng)腫瘤學(xué)領(lǐng)域取得了重大進(jìn)步，但膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍不容樂觀,不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤之間的預(yù)后差異也不盡相同。RNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，類似于DNA甲基化和組蛋白修飾。N6-甲基腺苷(m6A)甲基化是RNA甲基化中最常見、研究最深入的一種，其存在于整個(gè)RNA生命周期中，通過影響RNA代謝發(fā)揮生物學(xué)功能[8]。到目前為止，幾乎170種類型的RNA修飾已經(jīng)被鑒定出來(lái)，并在全球范圍內(nèi)被稱為“表位轉(zhuǎn)錄組”[9]，其中m6A是真核生物中最常見的類型[10]。越來(lái)越多的研究表明，RNA代謝的各個(gè)方面都有m6A的參與，包括mRNA的剪接，3′末端加工，核酸的清除與輸出，翻譯調(diào)控，mRNA衰變和非編碼RNA加工[11]。20世紀(jì)70年代的開創(chuàng)性研究證實(shí)了mRNA中存在m6A，但直到近幾年才意識(shí)到mRNA中的m6A的生理作用[12]。而m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)劑通過調(diào)控靶基因，進(jìn)而調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、進(jìn)展和侵襲，這為m6A調(diào)節(jié)靶軸作為膠質(zhì)瘤新的治療靶點(diǎn)和臨床預(yù)后指標(biāo)提供了可靠依據(jù)[13]。目前，有研究利用腫瘤基因組圖譜(TCGA)和中國(guó)膠質(zhì)瘤基因組圖譜(CGGA)數(shù)據(jù)，系統(tǒng)評(píng)價(jià)多個(gè)m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)因子在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)譜和預(yù)后意義，對(duì)m6A甲基化在膠質(zhì)瘤中的作用進(jìn)行了更深入的研究。但膠質(zhì)瘤中的m6A甲基化的功能仍有待確定，更好地理解膠質(zhì)瘤進(jìn)展背后的m6A RNA甲基化機(jī)制，對(duì)于開發(fā)新的治療方法至關(guān)重要。本文就m6A甲基化在膠質(zhì)瘤發(fā)展、診斷及治療方面的作用進(jìn)行了綜述。

1 m6A監(jiān)管機(jī)構(gòu)

目的基因上的m6A RNA甲基化由含有甲基轉(zhuǎn)移酶樣蛋白(METTL)3、METTL14、Wilms瘤1相關(guān)蛋白(WTAP)、METTL16、ZCCHC4和KIAA1429等的甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體(識(shí)別蛋白)安裝，并由脂肪與肥胖相關(guān)基因(FTO)和烷基化修復(fù)蛋白B同源物5(ALKBH5)組成的去甲基化酶(擦除蛋白)去除。m6A修飾目標(biāo)的功能是由m6A結(jié)合蛋白(讀寫蛋白)通過直接或間接與m6A結(jié)合來(lái)完成的，包括YTH m6A RNA結(jié)合蛋白、YTH結(jié)構(gòu)域蛋白、胰島素樣生長(zhǎng)因子2mRNA結(jié)合蛋白(IGF2BP)和異質(zhì)性細(xì)胞核核糖蛋白(HNRNP)家族[14]。這些讀寫蛋白、擦除蛋白和識(shí)別蛋白作為m6a RNA甲基化的調(diào)節(jié)因子，可在不同水平上影響靶基因的mRNA，包括轉(zhuǎn)錄、翻譯、剪接、穩(wěn)定和凋亡[15-17]。

1.1甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體 其核心成分是由METTL3-METTL14異源二聚體形成，靶向與RNA49-5結(jié)合[18]。文獻(xiàn)證據(jù)表明，METTL3是限速酶，而METTL14是m6A甲基化過程的支架[19]。其中，METTL3是復(fù)合體中的催化組分，需要結(jié)合的供體底物S-腺苷蛋氨酸在催化位點(diǎn)。而METTL14是m6A中的一種失活的甲基轉(zhuǎn)移酶，其是METTL3酶活性的變構(gòu)激活劑，有助于復(fù)合物的RNA結(jié)合[20]。在各種類型的細(xì)胞中單獨(dú)敲除METTL3則可顯著減少了m6A修飾，隨后會(huì)對(duì)細(xì)胞存活、干細(xì)胞維持和譜系確定產(chǎn)生巨大影響[21-23]，這支持了METTL3可發(fā)揮獨(dú)立于METTL14可用性的關(guān)鍵作用的事實(shí)。此外，WTAP是與METTL3和METTL14構(gòu)成復(fù)合體的第三組分。WTAP的一個(gè)主要功能是將METTL3及其結(jié)合伙伴METTL14定位于核斑點(diǎn)[24]。WTAP的耗盡會(huì)導(dǎo)致METTL3和METTL14在這些斑點(diǎn)上的定位丟失，并導(dǎo)致mRNA中m6A形成的丟失。因此，WTAP在斑點(diǎn)中維持METTL3的存在，從而有效地進(jìn)行甲基化mRNA[25]。

1.2去甲基化酶 擦除蛋白包括FTO和ALKBH5[26]。m6A甲基化的逆轉(zhuǎn)是由被稱為FTO的去甲基化酶和ALKBH5催化的[27]。m6A去甲基化酶“FTO”和后來(lái)的ALKBH5的發(fā)現(xiàn)，鼓勵(lì)了m6A是通過主動(dòng)去甲基化在細(xì)胞內(nèi)或跨條件動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)的假設(shè)。這2種去甲基化酶被稱為m6A“擦除蛋白”，是確保轉(zhuǎn)錄組中m6A修飾的平衡蛋白。2001年，有研究小組首次證實(shí)，在DNA或RNA的修飾過程中，F(xiàn)TO蛋白是一種非常重要的去甲基化酶[25]，其在RNA的m6A甲基化中的作用是不可忽視的。ZHANG等[28]研究發(fā)現(xiàn)，ALKBH5在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(GSC)中高表達(dá)。抑制ALKBH5可顯著降低復(fù)發(fā)的GBM來(lái)源的GSC11、GSC17和GSC23的成瘤率，降低巢蛋白和賦予腫瘤細(xì)胞自我更新能力的核心轉(zhuǎn)錄因子SOX2、Nanog、Oct4的表達(dá)，提示ALKBH5對(duì)GSC自我更新的產(chǎn)生影響。然而，有研究顯示，m6A可能不是FTO的生理相關(guān)靶點(diǎn)[29-30]。在生化分析中直接測(cè)試時(shí)，N6,2′-O-二甲基腺苷(m6Am)的脫甲基化速率比m6A高100倍，這是關(guān)于FTO功能的研究進(jìn)展[30]。FTO優(yōu)先介導(dǎo)m6Am的去甲基化，而不是m6A的去甲基化[31]。提示FTO和ALKBH5在膠質(zhì)瘤中可能優(yōu)先介導(dǎo)不同甲基化靶點(diǎn)的去甲基化。此外，ZHANG的[32]研究指出，抑制FTO可通過靶向MYC-miR-155/23a簇-MXI1反饋通路，進(jìn)而增強(qiáng)TMZ的抗腫瘤作用，其具體機(jī)制是FTO通過MYC調(diào)節(jié)整個(gè)信號(hào)通路。該研究還證實(shí)FTO參與了MYC基因介導(dǎo)的miR-155和miR-23a簇的促進(jìn)，從而增強(qiáng)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性特性。

1.3結(jié)合蛋白 m6A影響mRNAs命運(yùn)的一個(gè)主要機(jī)制是招募m6A結(jié)合蛋白以反式方式介導(dǎo)RNA功能，稱為m6A結(jié)合蛋白[33]。最早發(fā)現(xiàn)和表征的閱讀器蛋白家族之一是YTH結(jié)構(gòu)域蛋白家族，其中RECHAVI等最初在m6A RNA下拉實(shí)驗(yàn)中確定YTHDF2和YTHDF3是m6A結(jié)合蛋白[10]。含有YTH結(jié)構(gòu)域的蛋白通過調(diào)節(jié)RNA的剪接、翻譯、定位和壽命廣泛地參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。哺乳動(dòng)物基因組中有5種含YTH結(jié)構(gòu)域的蛋白，主要分為：YTHDC1、YTHDC2和YTHDF蛋白家族。YTHDC1是細(xì)胞核中唯一已知的m6A閱讀器，也是唯一被證明在膠質(zhì)瘤中具有生物學(xué)意義的調(diào)節(jié)因子，這一功能的執(zhí)行取決于YTHDC1與RNA結(jié)合的能力[34]。據(jù)報(bào)道，YTHDC1參與了剪接過程中的外顯子選擇、表觀遺傳沉默及mRNA的核輸出[35]。與其他無(wú)處不在表達(dá)的YTH蛋白不同，YTHDC2在睪丸中富集，是一種假定的RNA解旋酶，其與減數(shù)分裂特異的螺旋卷曲結(jié)構(gòu)域蛋白形成復(fù)合物，調(diào)節(jié)減數(shù)分裂過程中的RNA水平，促進(jìn)翻譯[36]。

2 m6A甲基化與膠質(zhì)瘤

2.1m6A甲基化與膠質(zhì)瘤的增殖、遷移及侵襲 有研究表明，m6a調(diào)節(jié)劑與膠質(zhì)瘤的進(jìn)展和預(yù)后有關(guān)[37]。北京天壇醫(yī)院的一項(xiàng)研究通過對(duì)CGGA和TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行單變量和多變量Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)，由m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)因子得出的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分可獨(dú)立預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤患者預(yù)后[37]。LI等[38]通過下調(diào)METTL3或上調(diào)FTO來(lái)降低m6A水平，觀察到U251細(xì)胞的遷移和增殖顯著增強(qiáng)。這一結(jié)果被細(xì)胞遷移和CKK-8實(shí)驗(yàn)所證實(shí)。用同樣的方法，該研究團(tuán)隊(duì)檢測(cè)了m6A水平升高的U251細(xì)胞的遷移和增殖，結(jié)果與預(yù)測(cè)相同。隨著m6A細(xì)胞的增多，凋亡細(xì)胞明顯增多，反之亦然。該研究團(tuán)隊(duì)還證實(shí)了低m6A水平的U251細(xì)胞增殖增強(qiáng)的主要原因可能是細(xì)胞凋亡減少。為了證實(shí)m6A與HSP90的關(guān)系，該研究團(tuán)隊(duì)檢測(cè)了過表達(dá)METTL3的U251細(xì)胞中HSP90的水平，并與對(duì)照細(xì)胞進(jìn)行了比較。在體外，較低的m6A甲基化水平可減少U251細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)U251細(xì)胞的增殖，提高m6A水平可以挽救U251細(xì)胞的增殖。

有研究者通過分析METTL3對(duì)U87細(xì)胞的影響來(lái)探索其在膠質(zhì)瘤增殖、侵襲以及遷移中的作用。JI等[39]研究發(fā)現(xiàn)，METTL3的上調(diào)抑制了U87和LN229細(xì)胞的增殖，而促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡。該研究團(tuán)體進(jìn)行了創(chuàng)口愈合和跨孔侵襲實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，METTL3的下調(diào)增強(qiáng)了U87和LN229細(xì)胞的遷移和侵襲，與此相反，在U87和LN229細(xì)胞中過表達(dá)METTL3。同樣，通過傷口愈合和跨孔侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)METTL3的遷移和侵襲能力，其中創(chuàng)口愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，METTL3過表達(dá)抑制了U87和LN229細(xì)胞的遷移。此外，該研究團(tuán)隊(duì)還發(fā)現(xiàn)，METTL3過表達(dá)也降低了U87和LN229細(xì)胞的侵襲能力。METTL3基因下調(diào)促進(jìn)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，抑制了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡。此外，LI等[40]研究指出，Notch信號(hào)通路(包括關(guān)鍵基因METTL3、DLL3、HES1和NOTCH3)與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。隨后，同濟(jì)大學(xué)的CONG等[13]利用相關(guān)分析探討了Notch信號(hào)通路在GBM和低級(jí)別膠質(zhì)瘤中的潛在調(diào)控相互作用，并且發(fā)現(xiàn)METTL3與膠質(zhì)瘤中DLL3、HES1和NOTCH3的表達(dá)呈正相關(guān)，特別是在GBM的mRNA和蛋白水平上發(fā)現(xiàn)的這種相關(guān)性。這支持了之前學(xué)者的觀察結(jié)果，即沉默METTL3可降低GBM干細(xì)胞系中DLL3、HES1和NOTCH3的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平，并增加細(xì)胞凋亡。最終，CONG等[13]的研究證明了METTL3可通過調(diào)控其直接靶點(diǎn)NOTCH3、DLL3和HES1來(lái)激活Notch通路，促進(jìn)膠質(zhì)瘤的發(fā)生，Notch通路基因可能成為膠質(zhì)瘤的潛在治療靶點(diǎn)。但有趣的是，CHAI等[37]通過利用CGGA(n=309)和TCGA(n=595)的RNA測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，METTL3和METTL14的表達(dá)與膠質(zhì)瘤的WHO分級(jí)無(wú)關(guān)。

除了METTL3與膠質(zhì)瘤之間的聯(lián)系逐步被研究發(fā)現(xiàn)以外。在2012年時(shí)，JIN等[23]研究首次指出，WTAP在GBM中過表達(dá)。此外，該研究還發(fā)現(xiàn)WTAP調(diào)控GBM細(xì)胞的遷移和侵襲。SiRNA的特異性敲除或cDNA的過度表達(dá)調(diào)控癌細(xì)胞的遷移和侵襲。在異種移植研究中，WTAP過表達(dá)使癌細(xì)胞更具致瘤性。在對(duì)其內(nèi)在機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)，WTAP過表達(dá)通過表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)刺激促進(jìn)GBM細(xì)胞的遷移和侵襲能力。XI等[41]研究發(fā)現(xiàn)，WTAP受QKI-6調(diào)控。WTAP mRNA在其3′UTR區(qū)含有一個(gè)稱為QKI反應(yīng)元件的特定序列，QKI-6由此誘導(dǎo)WTAP表達(dá)。雖然還需要進(jìn)一步的研究來(lái)充分闡明WTAP在GBM的發(fā)病機(jī)制中的作用機(jī)制，但有理由認(rèn)為WTAP向特定的未知靶點(diǎn)增強(qiáng)甲基轉(zhuǎn)移酶的活性促進(jìn)了GBM的進(jìn)展，利用基于miRNA的某種治療方法可能對(duì)膠質(zhì)瘤的治療是有益的。此后，另一個(gè)m6A識(shí)別蛋白家族也逐漸走進(jìn)人們的視野——IGF2BP家族，包括IGF2BP1/2/3，其可以抑制m6A修飾的轉(zhuǎn)錄本的降解并促進(jìn)其翻譯[42]。WANG等[43]首次發(fā)現(xiàn)，miR-873直接靶向m6A的讀取的蛋白IGF2BP1，并通過其3β-UTR的第一結(jié)合位點(diǎn)下調(diào)IGF2BP1在GBM細(xì)胞中的表達(dá)。同時(shí)，該研究發(fā)現(xiàn)miR-873的異位表達(dá)明顯抑制GBM細(xì)胞的增殖和侵襲，這種表型是通過miR-873/IGF2BP1信號(hào)通路介導(dǎo)的。此外，YANG等[44]研究發(fā)現(xiàn)，MIR-138通過負(fù)性調(diào)控IGF2BP2，抑制低級(jí)別膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。同樣地，MU等[45]研究發(fā)現(xiàn)，抑制IGF2BP2使GBM對(duì)TMZ治療敏感。

XIAO等[46]研究闡明了一個(gè)MYC-miRNA-MXI1反饋環(huán)，其可調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤的增殖和腫瘤發(fā)生。MYC通過microRNA-155(miR-155)和microRNA-23a-27a-24-2簇(miR-23a簇)抑制MXI1的表達(dá)，而MXI1則通過與其啟動(dòng)子結(jié)合而抑制MYC的表達(dá)。MiR-155和miR-23a簇的過表達(dá)促進(jìn)了U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的成瘤。此外，F(xiàn)TO是一種m6A RNA去甲基化酶，通過靶向MYC來(lái)調(diào)節(jié)環(huán)路。甲氯芬酸乙酯形式抑制FTO，增強(qiáng)化療藥物TMZ抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的作用，并對(duì)環(huán)路進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)。BHARGAVA等[47]的研究表明，IGF2mRNA結(jié)合蛋白3(IMP3)是一種GBM上調(diào)的RNA結(jié)合蛋白，可促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移。綜合生物信息學(xué)分析表明，p65是核轉(zhuǎn)錄因子-κB異源二聚體的一個(gè)亞基，是IMP3促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移的重要調(diào)節(jié)因子。IMP3增加了p65蛋白水平，但未改變p65轉(zhuǎn)錄本水平，且促進(jìn)了其多聚體的結(jié)合。體外轉(zhuǎn)錄RNA的紫外光交聯(lián)研究證實(shí)了IMP3與p65 3′UTR位點(diǎn)的特異性和直接結(jié)合。此外，IMP3可誘導(dǎo)攜帶野生型位點(diǎn)的p65 3′UTR報(bào)告基因的熒光素酶活性，但不能誘導(dǎo)突變位點(diǎn)的熒光素酶活性。在IMP3沉默條件下，3′UTR缺失的p65外源過表達(dá)挽救了膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移減少的現(xiàn)象。此外，IMP3沉默抑制了膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的維持和遷移。

2.2m6A甲基化與膠質(zhì)瘤的診斷、預(yù)后及治療 早在2016年，有研究顯示，WTAP的表達(dá)預(yù)示著惡性膠質(zhì)瘤患者的不良預(yù)后，WTAP在膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)，且與膠質(zhì)瘤分級(jí)密切相關(guān)，尤其是在GBM中的過渡表達(dá)，且在生存期短的患者中，WTAP的高表達(dá)與預(yù)后不良之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)趨勢(shì)[48]。提示W(wǎng)TAP可能作為膠質(zhì)瘤的一種新的預(yù)后標(biāo)記物，并可以為治療提供更多的選擇。最近的研究表明，m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)因子的轉(zhuǎn)錄水平與膠質(zhì)瘤的預(yù)后密切相關(guān)，并指出YTHDF1與膠質(zhì)瘤的進(jìn)展有關(guān)，YTHDF1的高表達(dá)也預(yù)示著膠質(zhì)瘤患者的不良預(yù)后[49]。XU等[49]開發(fā)了一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)圖來(lái)預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤患者總存活率，并發(fā)現(xiàn)hsa-mir-346是YTHDF1表達(dá)的上游調(diào)控因子，可能參與了減少膠質(zhì)瘤發(fā)展的新療法的開發(fā)。

為了研究m6A甲基化調(diào)節(jié)因子的預(yù)后價(jià)值，有學(xué)者采用套索Cox回歸算法，根據(jù)HNRNPC、ZC3H13和YTHDF2的表達(dá)篩選出一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)特征，其中低危組與高危組的預(yù)后特征有顯著差異，可預(yù)測(cè)預(yù)后意義[50]。該研究結(jié)果確定了m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)劑在GBM和HNRNPC中的潛在功能、預(yù)后價(jià)值和表達(dá)特征，其可能與臨床存活率、m6A甲基化水平和膠質(zhì)瘤的惡性進(jìn)展高度相關(guān)。提示HNRNPC有可能成為預(yù)測(cè)診斷和預(yù)后的一種新的治療手段。一項(xiàng)觀察性研究在了解m6A甲基化相關(guān)因子的表達(dá)是否可以用于膠質(zhì)瘤的單純預(yù)后判斷時(shí)，將13個(gè)m6A甲基化調(diào)節(jié)劑的mRNA表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的臨床病理特征聯(lián)系起來(lái)，結(jié)果顯示，WTAP和甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的2個(gè)組成部分(擦除蛋白ALBKH5、讀寫蛋白YTHDF2)的表達(dá)與WHO分級(jí)之間呈正相關(guān)，而與擦除蛋白FTO的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)[37]。上述研究未發(fā)現(xiàn)METTL3、METTL14或METTL16與mRNA的表達(dá)或WHO分級(jí)之間的相關(guān)性。

3 生物信息學(xué)分析

3.1m6A甲基化與低級(jí)別膠質(zhì)瘤 已發(fā)表的文獻(xiàn)在TCGA、CGGA和GTEx數(shù)據(jù)集中確定了36個(gè)具有可獲得表達(dá)數(shù)據(jù)的m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)子。ZHENG等[51]對(duì)這36個(gè)低級(jí)別膠質(zhì)瘤中m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)因子的表達(dá)譜進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，大部分調(diào)節(jié)因子在低級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與正常腦組織和GBM組織存在差異。即使在WHO Ⅱ、Ⅲ級(jí)間，m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)因子的表達(dá)水平也存在較大差異。m6A相關(guān)的預(yù)后信號(hào)包含9個(gè)m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)子，其中7個(gè)是ZCCHC4、SETD2、IGF2BP2、IGF2BP3、YTHDF2、EIF3H和YTHDC1，另外2個(gè)分別是RBM15和ALKBH3。

3.2m6A甲基化與高級(jí)別膠質(zhì)瘤 首先，腦組織中的m6A甲基化是高度特異的[10]。但在GBM中，m6A的狀態(tài)可能有所不同。CGGA微陣列和RNA測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)中的生物信息學(xué)分析提示，與低級(jí)別膠質(zhì)瘤相比，m6A識(shí)別蛋白WTAP和RBM15、m6A摘除蛋白ALKBH5和m6A讀寫蛋白YTHDF2顯著升高，而m6A識(shí)別蛋白METTL3、Virma和ZC3H13、m6A摘除蛋白FTO、m6A識(shí)別蛋白YTHDC2和HNRNPC顯著降低[52]。另一種生物信息學(xué)分析顯示，WTAP、RBM15、YTHDF與ALBKH5的表達(dá)呈正相關(guān)，而FTO的表達(dá)與WHO分級(jí)呈負(fù)相關(guān)[37]。此外，ALKBH5、YTHDF2、RBM15、METTL3、METTL14、FTO和YTHDC1在有無(wú)突變異檸檬酸脫氫酶(IDH)的低級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平有顯著差異。此外，F(xiàn)TO、YTHDC1和METTL3在IDH突變的GBM和無(wú)IDH突變的GBM中也有差異表達(dá)。重要的是，膠質(zhì)瘤惡性臨床病理特征相關(guān)的m6A RNA甲基化調(diào)節(jié)因子的表達(dá)和膠質(zhì)瘤的致癌基因密切相關(guān)。這些證據(jù)表明，m6A基因的修飾與GBM的進(jìn)展密切相關(guān)。根據(jù)目前對(duì)GBM的研究，m6A修飾似乎起著關(guān)鍵作用，因?yàn)閙6A讀寫蛋白和摘除蛋白都在GBM的發(fā)生中起著作用。

4 小結(jié)與展望

雖然近年來(lái)人們對(duì)mRNA m6A甲基化在癌癥中的作用有了越來(lái)越多的了解，但一些重大的挑戰(zhàn)仍然沒有解決。大量研究表明，m6A調(diào)節(jié)子及其相關(guān)通路可作為治療靶點(diǎn)，然而許多潛在作用尚不清楚。m6A水平及其調(diào)節(jié)因子能否作為潛在的腫瘤診斷和預(yù)后標(biāo)志物，取決于其特異性和敏感性，這還需要進(jìn)一步的研究。m6A甲基化在膠質(zhì)瘤的增殖、遷移及侵襲方面具有重要作用，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，特別是單細(xì)胞測(cè)序和第3代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，RNA甲基化修飾如何影響膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為的機(jī)制將逐漸明朗，這會(huì)為膠質(zhì)瘤的早期診斷、組織學(xué)分級(jí)和靶向治療提供了新見解。