羅婉麗， 王名漁， 楊宗玉， 張茂生， 王 剛， 孫成新， 董敏健， 肖世基

(遵義醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州 遵義 563000)

石斛屬植物在我國(guó)有76種，分布于貴州、云南、廣西、廣東、海南等地，為附生草本[1]，其中五十多種被用作治療癌癥、慢性萎縮性胃炎、皮膚老化、發(fā)熱和心血管疾病的中藥[2]。梳唇石斛DendrobiumstrongylanthumRchb.f.又名梳帽石斛[3]、珍蟲(chóng)石斛，為蘭科石斛屬草葉組植物，生于海拔1 000～2 100 m的山地林中樹(shù)干上，分布于云南景洪、勐海山坡常綠闊葉林中，附生樹(shù)上，是藥用石斛原植物之一[3]，但近年來(lái)由于生態(tài)環(huán)境破壞及人為毀滅性采挖，其野生資源遭到嚴(yán)重破壞[3]。石斛功效滋陰清熱、益味生津、止咳潤(rùn)肺等作用[4]，具有抗氧化、抗腫瘤、抗血管生成等活性[5-8]，其化學(xué)成分較復(fù)雜，包括生物堿類，糖類，聯(lián)芐類等[5-12]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)梳唇石斛化學(xué)成分進(jìn)行研究，以期為該植物后續(xù)開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料

Agilent DD2400-MR型核磁共振儀(美國(guó)Agilent公司)；LC-3000型半制備HPLC色譜儀(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司)；分析型高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司)；SHB-ⅢA型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；半制備C18色譜柱(10 mm×250 mm，5 μm，日本YMC 公司)；Finnigan LCQDECA型質(zhì)譜儀(美國(guó)Thermo公司)；BiOTOF Q型質(zhì)譜儀(德國(guó)Bruker公司)；RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器生化儀器廠)；Sepacore型中壓制備系統(tǒng)(瑞士Buchi公司)，MCI樹(shù)脂(日本Mitsubishi公司)；硅膠(中國(guó)青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20凝膠(德國(guó)Merck公司)。梳唇石斛于2019年5月采自云南省保山市，經(jīng)遵義醫(yī)科大學(xué)生藥學(xué)教研室吳發(fā)明副教授鑒定為梳唇石斛DendrobidiumstrongylanthumRchb.f.的干燥莖，標(biāo)本(編號(hào)20190521)保存于遵義醫(yī)科大學(xué)天然產(chǎn)物化學(xué)研究室。甲醇、乙腈為色譜純(成都市科龍化工試劑廠)。

2 提取與分離

將新鮮的梳唇石斛全草洗凈，除去雜質(zhì)，切片曬干后粉碎，得540 g干粉，90%甲醇浸泡后回流提取3次，每次3 h，提取液減壓濃縮得浸膏124.1 g，經(jīng)中壓柱色譜(石油醚-乙酸乙酯)梯度洗脫得到Fr.1～Fr.12。Fr.8～Fr.10經(jīng)TLC檢測(cè)后合并，與MCI凝膠拌樣，經(jīng)半制備高效液相色譜分離(甲醇-水=30∶70，體積流量3.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm)得到Fr.8.1～Fr.8.17，F(xiàn)r.8.9經(jīng)半制備HPLC分離，得化合物1(8.5 mg)、3(12.8 mg)、4(15.5 mg)、7(11.6 mg)；Fr.8.6經(jīng)半制備HPLC分離(甲醇-水，95∶5)，得化合物5(10.5 mg)、6(10.1 mg);Fr.8.7經(jīng)半制備HPLC分離(甲醇-水，90∶10),得化合物2(9.5 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色粉末，ESI-MSm/z: 239.1[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.47(1H，s，H-9)，7.41～7.18(3H，m，H-7，8，10)，7.14(1H，s，H-6)，6.85(1H，s，H-1)，6.69(1H，s，H-3)，5.21(1H，s，2-OH)，3.85(3H，s，4-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：58.5(4-OCH3)，101.9(C-3)，107.7(C-1)，114.2(C-4a)，116.8(C-6)，119.0(C-10a)，121.1(C-8)，126.2(C-10)，127.2(C-7)，129.5(C-9)，134.3(C-8a)，136.3(C-4b)，153.7(C-2)，154.8(C-5)，155.5(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定為plicatol B。

化合物2：淡黃色油狀物，ESI-MSm/z: 329.2[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.02(2H，d，J= 6.5 Hz，H-2′，6′)，6.80(1H，d，J= 6.6 Hz，H-5)，6.72(2H，d，J= 6.9 Hz，H-3′，5′)，6.62(1H，brs，H-2)，6.59(1H，brs，H-6)，4.05(2H，s，H-9)，3.84(3H，s，3-OCH3)，2.85(2H，d，J= 8.0 Hz，H-7′)，2.58(2H，dd，J= 23.7，15.3 Hz，H-8′)，2.49(2H，s，H-7)，1.87(2H，s，H-8)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：30.1(C-7′)，30.3(C-8)，31.6(C-7)，36.3(C-8′)，55.7(3-OCH3)，63.9(C-9)，111.5(C-2)，114.8(C-5)，115.3(C-3′，5′)，120.8(C-6)，129.2(C-2′，6′)，131.3(C-1′)，132.8(C-1)，144.1(C-4)，147.1(C-3)，155.2(C-4′)，173.7(C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定為二氫松柏醇二氫對(duì)羥基桂皮酸酯。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm/z: 243.1[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.11(1H，t，J= 7.6 Hz，H-5′)，6.72(1H，d，J= 7.4 Hz，H-6′)，6.64(1H，d，J= 8.2 Hz，H-4′)，6.62(1H，s，H-2′)，6.29(1H，s，H-6)，6.24(2H，s，H-2，4)，3.86(2H，brs，3，3′-OH),3.70(3H，s，5-OCH3)，2.76(4H，m，-CH2CH2-)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：37.2(-CH2-)，37.5(-CH2-)，55.3(5-OCH3)，99.1(C-4)，106.7(C-6)，108.2(C-2)，112.9(C-4′)，115.5(C-2′)，120.9(C-6′)，129.5(C-5′)，143.6(C-1′)，144.4(C-1)，155.4(C-3′)，156.5(C-3)，160.9(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定為山藥素Ⅲ。

化合物4：白色無(wú)定形粉末。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.11(1H，t，J= 7.6 Hz，H-7)，6.93(1H，d，J= 7.8 Hz，H-6)，6.83(1H，d，J= 7.6 Hz，H-8)，6.47(2H，s，H-1，3)，3.83(3H，s，4-OCH3)，2.58(4H，m，H-9，10)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：30.9(C-9)，31.2(C-10)，56.9(4-OCH3)，99.4(C-3)，109.6(C-1)，113.6(C-5)，117.5(C-8)，120.0(C-6)，121.0(C-4b)，127.5(C-7)，140.7(C-8a)，143.5(C-10a)，152.8(C-4a)，155.1(C-4)，157.8(C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒定為2,5-二羥基-4-甲氧基-9,10-二氫菲。

化合物5：紅色無(wú)定形固體，ESI-MSm/z: 271.1[M+H]+。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：9.29(1H，d，J= 9.1 Hz，H-5)，7.54(1H，d，J= 8.8 Hz，H-10)，7.45(1H，d，J= 8.8 Hz，H-9)，7.18(1H，m，H-8)，7.16(1H，dd，J=9.2，2.7 Hz，H-6)，7.04(1H，s，H-1)，4.01(3H，s，3-OCH3)，3.92(3H，s，4-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：60.3(4-OCH3)，61.4(2-OCH3)，110.3(C-1)，112.6(C-8)，117.6(C-6)，119.3(C-4a)，124.6(C-4b)，127.2(C-9)，127.7(C-10)，129.0(C-5)，130.8(C-10a)，134.9(C-8a)，143.4(C-3)，150.5(C-2)，152.6(C-4)，156.1(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定為2,7-二羥基-3,4-二甲氧基菲。

化合物6：黃棕色粉末，ESI-MSm/z: 271.1[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：8.13(1H，d，J= 8.4 Hz，5-OH)，6.71(1H，dd，J= 8.4，2.6 Hz，H-6)，6.69(1H，s，H-8)，6.54(1H，s，H-1)，3.88(3H，s，3-OCH3)，3.66(3H，s，4-OCH3)，2.73～2.61(4H，m，H-9，10)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ：31.1(C-9)，31.2(C-10)，60.5(4-OCH3)，61.3(3-OCH3)，112.2(C-1)，114.2(C-6)，115.3(C-8)，121.0(C-4a)，125.7(C-4b)，129.3(C-5)，135.7(C-10a)，140.6(C-8a)，141.3(C-3)，150.0(C-2)，152.5(C-4)，156.7(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒定為2,7-二羥基-3,4-二甲氧基-9,10-二氫菲。

化合物7：黃棕色粉末，ESI-MSm/z: 269.3[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.81(1H，d，J= 8.0 Hz，H-8)，7.38～7.31(1H，m，H-7)，7.10(1H，d，J= 7.6 Hz，H-6)，6.92(1H，d，J= 6.8 Hz，H-1)，6.81(1H，d，J= 15.6 Hz，H-3)，6.76(1H，d，J= 15.6 Hz，H-10)，3.90(3H，s，2-OCH3)，3.90(3H，s，5-OCH3)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：55.4(-OCH3)，58.2(-OCH3)，100.6(C-3)，102.0(C-10)，106.9(C-1)，109.0(C-4a)，114.2(C-8)，116.8(C-6)，120.8(C-4b)，126.3(C-7)，128.2(C-8a)，136.9(C-10a)，153.1(C-5)，154.0(C-9)，155.2(C-4)，157.2(C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定為phoimbrtol A。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從梳唇石斛中分離鑒定出7個(gè)化合物，包括1個(gè)聯(lián)芐、1個(gè)苯丙素、5個(gè)菲類，均為首次從梳唇石斛中分離，其中化合物7為首次從石斛屬植物中發(fā)現(xiàn)。上述結(jié)果豐富了梳唇石斛化學(xué)信息，從一定程度上揭示了該植物與其他品種石斛在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)方面存在的區(qū)別，可為其更好的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。