王 娟,楊晶晶,周仁鵬,胡 偉,魯 超

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥物臨床試驗(yàn)研究中心,合肥 230601;2.安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,合肥 230032;3.安徽理工大學(xué),安徽 淮南 232001)

肝纖維化的概念是上世紀(jì)50年代由德國(guó)科學(xué)家提出的,其被認(rèn)為是癌前狀態(tài),與增加原發(fā)性肝癌相對(duì)死亡率密切相關(guān),占肝癌患者死亡率的一半[1]。因營(yíng)養(yǎng)代謝和病毒感染等致慢性肝病的各種原因都可引發(fā)肝纖維化,先是肝損傷導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)積聚在肝中,隨后導(dǎo)致肝纖維化和肝硬化[2-3]。肝纖維化的發(fā)生發(fā)展機(jī)制是由多種細(xì)胞、蛋白和各種促纖維化細(xì)胞因子等因素共同組成一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),其中肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)是其中的主體細(xì)胞類(lèi)型[4]。清除病毒等祛除病因法是目前常規(guī)治療方法,抗炎、針對(duì)肝損傷的治療以及抑制ECM產(chǎn)生并促其降解等也是常見(jiàn)治療方式[1-5]。早期肝纖維化很難被發(fā)現(xiàn),晚期時(shí)逆轉(zhuǎn)并不能完全避免進(jìn)展為肝癌的風(fēng)險(xiǎn)和嚴(yán)重的并發(fā)癥。因此,在整個(gè)肝病發(fā)展過(guò)程中,對(duì)各種致病因素的動(dòng)物模型進(jìn)行深入研究,找出緩解甚至逆轉(zhuǎn)早期肝纖維化發(fā)展的機(jī)制和藥物,對(duì)治療肝病具有極高的價(jià)值。常用于制備模型的動(dòng)物主要有大鼠[6]、小鼠[7]、豚鼠[8]、家兔[9]等,也有使用小型豬[10]、斑馬魚(yú)[11]、恒河猴[12]、鴨[13]來(lái)進(jìn)行研究。與其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較,小鼠因與人類(lèi)基因組同源度高,繁殖快、成本低、操作易上手而成為制備此種模型的首選,如乙型肝炎纖維化模型就以小鼠為主流[14]。大、小鼠造模方式分類(lèi)大致相同,但在方法操作難易程度、受試藥物用量、纖維化程度、成模率、死亡率等方面有一定區(qū)別。如大鼠沒(méi)有膽囊,膽管阻塞性肝纖維化法會(huì)比小鼠更適用。以歐強(qiáng)等[15]采用SD大鼠和C57BL/6J小鼠成功建立的模型為例:8周后小鼠模型組的炎癥反應(yīng)和纖維化程度均比大鼠模型組的明顯,從這個(gè)角度小鼠更適于該病的實(shí)驗(yàn)研究。目前大鼠模型的研究已較成熟,而小鼠模型的相關(guān)報(bào)道較少,故本文綜合國(guó)內(nèi)外關(guān)于小鼠肝纖維化模型的研究,基于肝纖維化的不同致病因素,歸納了目前常用模型的成模機(jī)制、造模途徑、模型效果、優(yōu)缺點(diǎn)和用途。

1 化學(xué)造模法

1.1 四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)誘導(dǎo)的肝纖維化模型

反復(fù)給予CCl4是一種經(jīng)典的、最早、最廣泛地用于誘導(dǎo)毒素介導(dǎo)肝纖維化的模型之一[16]。其機(jī)制是CCl4通過(guò)CYP450氧化酶激活生成活性自由基再活化貯脂細(xì)胞形成脂肪變性,促進(jìn)纖維化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能因試劑的劑量、給藥時(shí)間和途徑或其他因素而有所不同,腹腔注射、皮下注射和灌胃法是目前CCl4造模法常用的給藥方式。其中,皮下注射40%～60% CCl4溶于橄欖油最常見(jiàn),每隔2d注射1次,2個(gè)月時(shí)即可成功造模[17]。缺點(diǎn)是CCl4毒性較大,大劑量注射易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大量死亡而小劑量造模不易成功。

當(dāng)前，自然資源確權(quán)登記就是將相對(duì)完整的生態(tài)功能區(qū)域作為一個(gè)自然資源登記單元，自然資源統(tǒng)一確權(quán)登記將各類(lèi)自然資源的質(zhì)量、數(shù)量和保護(hù)要求全面摸清，并通過(guò)登記的法律手段予以公示明確，落實(shí)到每一個(gè)產(chǎn)權(quán)人或者使用權(quán)人，有助于充分掌握自然資源家底，并根據(jù)自然資源容量和承載力進(jìn)行分類(lèi)開(kāi)發(fā)和保護(hù)，做到自然資源分類(lèi)施策。

1.2 二甲基亞硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)誘導(dǎo)的肝纖維化模型

DMN是一種有肝親和性毒性的藥物,通過(guò)甲基化蛋白質(zhì)、DNA和生物膜脂質(zhì)致使肝中毒性改變,導(dǎo)致肝細(xì)胞嚴(yán)重壞死和纖維化形成。與CCl4法不同在于損傷是進(jìn)行性的,在DMN暴露中斷后1～2個(gè)月仍可維持穩(wěn)定疾病狀態(tài),因而與人類(lèi)肝纖維化病理改變更類(lèi)似。此造模方法已有40余年的歷史,大都參照J(rèn)enkins等[18]介紹的方法來(lái)制備。王麗娜等[19]將注射頻率由連續(xù)3d改為每2d1次,改良方法的模型更穩(wěn)定,病理可見(jiàn)小葉內(nèi)纖維化和大面積出血性壞死。DMN價(jià)格昂貴,具有致癌性,應(yīng)格外留意個(gè)人安全。

國(guó)立臺(tái)北護(hù)理健康大學(xué)王采芷教授將OSCE應(yīng)用于二技護(hù)理學(xué)生（在長(zhǎng)庚和臺(tái)南護(hù)專(zhuān)等中專(zhuān)學(xué)習(xí)3年后考入大學(xué)的學(xué)生）身體評(píng)估檢查與評(píng)估課程中，因?yàn)槎紝W(xué)生參加過(guò)臨床實(shí)習(xí)，有一定的臨床經(jīng)驗(yàn)。以O(shè)SCE代替?zhèn)鹘y(tǒng)技能考試，要求學(xué)生進(jìn)行癥狀評(píng)估，考查病史訪(fǎng)談、身體檢查與評(píng)估診斷能力，結(jié)果表明OSCE能加強(qiáng)學(xué)生身體檢查與評(píng)估能力的臨床運(yùn)用，避免學(xué)生因單純技術(shù)訓(xùn)練而覺(jué)得重復(fù)學(xué)習(xí)的情形。

患者不同程度的焦慮，產(chǎn)生應(yīng)激，導(dǎo)致心血管系統(tǒng)發(fā)生變化，血漿中腎上腺素激素水平和NK淋巴細(xì)胞增多，影響治療［5］。音樂(lè)療法（MT）可以從非藥物干預(yù)方面抑制患者的應(yīng)激反應(yīng)，減輕焦慮和神經(jīng)系統(tǒng)的應(yīng)激，有益治療。

1.3 硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)誘導(dǎo)的肝纖維化模型

日本血吸蟲(chóng)病是我國(guó)有害性最大的寄生蟲(chóng)病之一,肝遭受損傷后形成蟲(chóng)卵肉芽腫,再形成纖維化。用血吸蟲(chóng)尾蚴來(lái)制作是這類(lèi)模型的基礎(chǔ)造模方式,因而不能應(yīng)用于其他類(lèi)型,只應(yīng)用于血吸蟲(chóng)病性肝病的藥物研究治療。姜蘇芩[30]采用皮膚敷貼日本血吸蟲(chóng)尾蚴感染小鼠12周來(lái)建模,在感染后分期做組織標(biāo)本檢測(cè),發(fā)現(xiàn)纖維化程度進(jìn)行性加重、膠原沉積面積與蟲(chóng)卵肉芽腫位置息息相關(guān)。小鼠肝在感染后發(fā)生的病理變化與人類(lèi)有極大的相似性,對(duì)研究人類(lèi)該疾病機(jī)制及治療方面具有重要價(jià)值。

1.4 其他化學(xué)因素誘導(dǎo)的肝纖維化模型

通過(guò)對(duì)比柑橘與根系土各元素含量，可得出各元素富集系數(shù)，柑橘硒與鋅元素富集系數(shù)分別為0.036與0.01，四種重金屬富集系數(shù)分別為汞0.052、鎘0.006、砷0.001以及鉛0.002。

2 免疫造模法

2.1 異種血清法

包括單一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過(guò)剩誘導(dǎo)模型(單純高脂模型)和多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過(guò)剩誘導(dǎo)模型(高脂高糖模型與高膽固醇高膽鹽模型)。長(zhǎng)期進(jìn)食高脂飲食后過(guò)多脂肪酸作用于肝細(xì)胞產(chǎn)生脂毒性,引起肝損傷和炎癥,但單獨(dú)給予高糖不能誘發(fā)纖維化,Asgharpour等[39]給小鼠聯(lián)合高果糖-葡萄糖溶液(23.1g/L果糖+18.9g/L葡萄糖)啟動(dòng)致肥飲食后,發(fā)現(xiàn)小鼠16周后可出現(xiàn)胰島素抵抗(Insulin resistance,IR),大大縮短造模時(shí)間和增加纖維化程度。Savard等[40]發(fā)現(xiàn)膽固醇增多可能會(huì)抑制脂肪酸β氧化和減少膽汁酸合成,引起肝脂肪變性,添加膽鹽可增強(qiáng)小鼠對(duì)膽固醇的吸收并抑制其清除而提高其濃度。該方法比高膽固醇飲食造模周期短且纖維化程度高,但缺點(diǎn)是其未引起IR。

2.2 刀豆素蛋白A法(concanavalin A,Con A)

Beaussier等[31]通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)因膽管破壞、膽汁淤積導(dǎo)致肝細(xì)胞及膽管細(xì)胞受損,在肝內(nèi)產(chǎn)生大量膠原和ECM沉積發(fā)展成肝纖維化。BCM法中最常見(jiàn)的是通過(guò)人為結(jié)扎肝外膽管使其阻塞,其結(jié)扎方法包括膽總管結(jié)扎法、膽管結(jié)扎后切斷法和N-丁基-2-氰基丙烯酸鹽逆行性注入法3種方式[32]。該模型成模周期短,對(duì)動(dòng)物的要求不高,肝纖維化穩(wěn)定可靠,且無(wú)須與毒性物質(zhì)接觸。但不足之處在于:不僅因不同個(gè)體對(duì)膽管擴(kuò)張程度的耐受能力不同而使肝實(shí)質(zhì)有不同反應(yīng)致使纖維化程度不均一,且因膽汁泄漏引起的腹膜炎以及膽總管的分離結(jié)扎技術(shù)而致模型死亡率高,一般在30%以上[33]。該模型不適用于通過(guò)利膽而發(fā)揮藥效的藥物。

3 血吸蟲(chóng)肝纖維化動(dòng)物模型

TAA是一種毒性物質(zhì),進(jìn)入肝后通過(guò)延長(zhǎng)肝細(xì)胞有絲分裂和阻礙RNA轉(zhuǎn)移來(lái)影響相關(guān)酶的代謝過(guò)程,最終導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死,常用于嚙齒動(dòng)物的纖維化誘導(dǎo)。該模型與人類(lèi)肝疾病的生化和形態(tài)學(xué)指標(biāo)特征十分類(lèi)似,成模率高,通常作為肝纖維化基礎(chǔ)研究的合適動(dòng)物模型[20]。Seo等[21]采取每周3次連續(xù)7周腹腔注射TAA溶液(200mg/kg)的方法成功造模,結(jié)果發(fā)現(xiàn)TAA可增強(qiáng)小鼠的肝毒性,增加肝功能和纖維化程度,并產(chǎn)生大量膠原纖維,但使小鼠體重減輕。

4 膽管阻塞性肝纖維化(BCM法)模型

Con A是一種來(lái)自刀豆的植物凝集素,可刺激T細(xì)胞有絲分裂,促進(jìn)TGF-β、TNF-α等細(xì)胞因子的釋放,引起炎癥反應(yīng)并進(jìn)一步發(fā)展成肝纖維化,與人類(lèi)病毒性肝炎的免疫病理機(jī)制非常接近[27-28]。這種明顯的急性肝損傷可在Balb/c小鼠上出現(xiàn),而在SCID小鼠上不會(huì),使用其他免疫抑制劑也不會(huì)引起肝損傷,可見(jiàn)其特異性[27]。Yang等[29]對(duì)小鼠反復(fù)注射Con A建模,采用劑量15mg/kg每周1次尾靜脈注射的方法,連續(xù)注射6次后就出現(xiàn)肝纖維化。

5 肝缺血再灌注損傷(hepatic ischemiareperfusion injury,HIRI)誘導(dǎo)的肝纖維化模型

教育大數(shù)據(jù)的深度挖掘?qū)⒆兏锔咝！扒宦伞钡慕虒W(xué)模式帶來(lái)個(gè)性化、差異化的教學(xué)情境，為教育者們提供教學(xué)與管理方面的幫助。 在大數(shù)據(jù)時(shí)代，互聯(lián)網(wǎng)、物聯(lián)網(wǎng)及云計(jì)算將為高等教育的發(fā)展提供巨大支持，許多高校也將利用教育大平臺(tái)不斷增加線(xiàn)上網(wǎng)絡(luò)課程的數(shù)量，豐富高等教育教學(xué)模式，變革人才培養(yǎng)流程，同時(shí)利用大數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行系統(tǒng)性、數(shù)據(jù)性、科學(xué)性的教育質(zhì)量評(píng)估，促進(jìn)高等教育的智慧教學(xué)與管理。

6 酒精性肝纖維化(alcoholic liver fibrosis,ALF)模型

我國(guó)酒文化底蘊(yùn)深厚,由飲酒引發(fā)的健康問(wèn)題日益嚴(yán)峻,由ALF引起死亡的肝硬化患者大約為50%[35]。肝是酒精代謝的主要場(chǎng)所,代謝物乙醛及其轉(zhuǎn)化物乙酸通過(guò)多種途徑損傷肝結(jié)構(gòu)與功能導(dǎo)致炎癥反應(yīng),同時(shí)削弱肝內(nèi)脂肪氧化形成脂肪肝,最終形成ALF。目前常用的模型制備方法為含酒精飲食誘導(dǎo)法和灌胃法。含酒精飲食誘導(dǎo)法的成本更低,操作更簡(jiǎn)單,死亡率也更低,常采用Lieber-DeCarli模型和Tsukamoto-French模型[36-37]。灌胃法可控制每只小鼠的酒精攝入量,造模穩(wěn)定性高。蘇俊[38]應(yīng)用白酒灌胃法16周成功復(fù)制模型,觀(guān)察到如變性壞死、炎癥和纖維增生等相關(guān)病理表現(xiàn)。此方法非常貼合中國(guó)人的飲酒方式。

(1)血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)法。此模型是目前提出的一種新型小鼠肝纖維化模型,其過(guò)程不出現(xiàn)肝細(xì)胞炎癥和死亡,已應(yīng)用于腎、心等其他器官。研究發(fā)現(xiàn)AngⅡ在肝纖維化組織中的含量顯著增多,長(zhǎng)期輸注AngⅡ可誘導(dǎo)HSC活化和促炎作用,可見(jiàn)AngⅡ具有致炎和纖維化的作用,并以此來(lái)誘導(dǎo)該疾病模型[22]。(2)D-氨基半乳糖(DGalactosamine,D-Gal N)法。因尿嘧啶核苷酸被大量消耗,致使RNA和蛋白質(zhì)合成減少而引起的肝損傷。多用于誘導(dǎo)急性肝損傷,纖維化程度高,多為三到四期,與人類(lèi)肝纖維化相似度高,重復(fù)性好,但不足之處是造模所消耗的時(shí)間和成本高。Osawa等[23]給小鼠反復(fù)服用D-Gal N持續(xù)8周,誘導(dǎo)了肝細(xì)胞凋亡和肝纖維化。(3)二氧化硅(SiO2)誘導(dǎo)的肝纖維化。SiO2可誘導(dǎo)體內(nèi)過(guò)量氧自由基損傷肝組織以及誘導(dǎo)TGF-β等細(xì)胞因子激活HSC,致使ECM大量沉積,形成肝纖維化。有研究者混合SiO2和超液化碘油于肝右葉實(shí)質(zhì)內(nèi)局部注射,12周后可見(jiàn)部分細(xì)胞壞死、巨噬細(xì)胞結(jié)節(jié)和纖維增生[24]。該法可固定肝纖維化病變部位,成功率高,因而可為介入治療肝癌提供一種實(shí)驗(yàn)可行性方向。但操作較為復(fù)雜,歷時(shí)長(zhǎng)。

7 營(yíng)養(yǎng)誘發(fā)模型

營(yíng)養(yǎng)誘發(fā)模型多用來(lái)制作脂肪性肝纖維化模型,包括營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過(guò)剩和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏兩種類(lèi)型。C57小鼠對(duì)代謝綜合征敏感性強(qiáng),易進(jìn)展為纖維化,常選用來(lái)制備該類(lèi)模型。

HIRI是指肝缺血再灌注后,不僅不會(huì)恢復(fù)肝功能,反而讓肝結(jié)構(gòu)和功能損害更嚴(yán)重的現(xiàn)象。在臨床上嚴(yán)重肝外傷、肝移植、休克復(fù)蘇時(shí)均不可避免出現(xiàn)HIRI,利用HIRI這一操作形成的一種新型肝纖維化模型,既符合臨床實(shí)際,也為這方面的研究提供一種新的方向。肝細(xì)胞損傷后釋放炎癥因子、細(xì)胞因子和自由基促使HSC被大量激活而啟動(dòng)早期肝纖維化,這些因素在疾病的進(jìn)程中持續(xù)作用并進(jìn)一步發(fā)展。左嘉瑋等[34]采用缺血后再灌注8周誘導(dǎo)小鼠肝纖維化,采用半肝阻斷法,造成小鼠肝左外側(cè)葉、左中葉及中葉缺血90min,成功造模。

7.1 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過(guò)剩誘導(dǎo)模型

有研究證實(shí),血清作為異源抗原刺激實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生免疫反應(yīng),刺激機(jī)體主動(dòng)釋放細(xì)胞因子來(lái)激活HSC,使ECM過(guò)度沉積導(dǎo)致肝纖維化[25]。此機(jī)制與臨床上慢性肝炎所致肝纖維化非常相似,具有強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答能力,對(duì)肝細(xì)胞乃至整個(gè)動(dòng)物的傷害很小,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響小。豬、牛、馬和血吸蟲(chóng)等的血清是實(shí)驗(yàn)中常采用的。Zhang等[26]采用每周給Balb/c小鼠注射0.1mL/10g豬血清,6周后小鼠表現(xiàn)為明顯的纖維化變化。適用于肝纖維化機(jī)制的研究和免疫調(diào)節(jié)劑的篩選。但造模時(shí)間長(zhǎng),因過(guò)敏反應(yīng)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物易死亡。

7.2 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏模型

主要有蛋氨酸和膽堿缺乏(methionine and choline-deficient diet,MCD)模型和L-氨基酸膽堿缺乏(choline-deficient L-amino acid-defined diet,CDAA)模型。(1)MCD模型在脂肪性肝纖維化研究中很常見(jiàn)。膽堿、蛋氨酸均缺乏時(shí),谷胱甘肽和卵磷脂合成受阻,導(dǎo)致VLDL合成及分泌障礙,造成TG在肝細(xì)胞沉積,并增加抗氧化屏障機(jī)制損傷導(dǎo)致氧化應(yīng)激加劇,肝細(xì)胞發(fā)生炎癥和壞死[41]。(2)CDAA模型是把膽堿缺乏飲食中相當(dāng)量的蛋白質(zhì)用L-氨基酸和相應(yīng)的混合物來(lái)替代。Winkler等[42]用CDAA飲食喂養(yǎng)C57BL/6N小鼠10周后出現(xiàn)周?chē)卫w維化,伴有肝脂肪變性和中度肝病。與MCD飲食比較,CDAA飲食在膽堿含量控制上更準(zhǔn)確,但缺點(diǎn)是小鼠體質(zhì)量會(huì)稍有下降,也不會(huì)出現(xiàn)IR。

8 病毒性肝纖維化動(dòng)物模型

乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)與宿主之間的相互作用復(fù)雜,除非病毒被宿主清除,否則宿主將長(zhǎng)期攜帶病毒,肝損害無(wú)法愈合最終會(huì)導(dǎo)致纖維化、硬化甚至癌癥的發(fā)生[43]。據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年因HBV感染引起的終末期肝病死亡的超出100萬(wàn)人[44]。現(xiàn)已證實(shí)嚙齒類(lèi)動(dòng)物不會(huì)感染人類(lèi)的肝炎病毒,缺乏HBV和HCV感染的通用小動(dòng)物模型阻礙我們更深入了解病毒生物學(xué)。Bissig等[45]最近描述了一種可調(diào)節(jié)系統(tǒng)、用于重新接種免疫缺陷小鼠,特別是缺少富馬乙酰水解酶、重組激活基因2和IL-2受體的γ鏈的小鼠,結(jié)果顯示出這些具有高水平人類(lèi)肝嵌合癥的小鼠(嵌合率可達(dá)95%)可傳播HBV和HCV,感染HCV的小鼠對(duì)抗病毒治療有反應(yīng)。這種模型將為研究HBV和HCV感染以及其他可能的人類(lèi)肝病性病原體實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)可能性,并證明可測(cè)試抗病毒藥物。

9 轉(zhuǎn)基因肝纖維化動(dòng)物模型

基因遺傳因素是肝纖維化中一個(gè)重要影響因素,構(gòu)建小鼠轉(zhuǎn)基因肝纖維化模型包括基因敲除、基因突變和基因轉(zhuǎn)染等方法,通過(guò)一條明確的途徑來(lái)研究肝纖維化的發(fā)病機(jī)制。近年來(lái),基于流體動(dòng)力學(xué)的基因傳遞技術(shù)引起了人們的廣泛關(guān)注?；静襟E是將裸質(zhì)粒DNA大量高速注射到動(dòng)物尾靜脈,該方法實(shí)現(xiàn)了肝中外源基因的高表達(dá),為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供了一種高效簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)染方法。Yang等[46]運(yùn)用基于流體動(dòng)力學(xué)的基因傳遞系統(tǒng)建立了動(dòng)態(tài)小鼠肝纖維化模型,發(fā)現(xiàn)小鼠肝中的TGF-β可高水平表達(dá),在誘導(dǎo)狀態(tài)下Col1A2和血清α-SMA這兩個(gè)纖維化和HSC活化的指標(biāo)上調(diào)。這種模型代表了一種動(dòng)態(tài)且可逆的肝纖維化,可用來(lái)研究肝纖維生成的早期分子機(jī)制或篩選用于臨床的抗纖維化藥物。但缺點(diǎn)是誘導(dǎo)的時(shí)間短暫,纖維化水平并未達(dá)到大規(guī)模(小葉纖維化)。其他基因模型還有Ob/ob、Db/db、Foz/Foz、SREBP-1c轉(zhuǎn)基因等[47]。

10 復(fù)合模型

由于單一因素造?？傆斜锥?且肝纖維化的形成本身受各方面因素影響,因此部分研究者們可根據(jù)自己的模型需要,組合各種因素建立更穩(wěn)定和更精準(zhǔn)機(jī)制的理想動(dòng)物模型。這種將多種因素方法結(jié)合起來(lái)建立肝纖維化動(dòng)物模型的方法稱(chēng)之為復(fù)合模型。馮勁立等[48]以?xún)?nèi)毒素脂多糖肝纖維化模型與DMN誘導(dǎo)法相結(jié)合形成復(fù)合型模型,既能提高造模的穩(wěn)定性,還能更好模擬疾病生理?xiàng)l件。

11 總結(jié)

在小鼠動(dòng)物模型發(fā)展史上已有多種模型,從純化學(xué)試劑和酒精引起烈性肝損傷到AngⅡ“無(wú)炎癥”誘導(dǎo)、基因誘導(dǎo)等微損傷模型,各種模型各有特點(diǎn)。其中以CCl4誘導(dǎo)法較成熟,但其造模時(shí)間、給藥方式和劑量無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。免疫性肝纖維化模型的主動(dòng)誘導(dǎo)特性與人類(lèi)肝纖維化形成機(jī)制最為接近,臨床基礎(chǔ)研究的適用性更強(qiáng),便于推廣,但模型中所用蛋白的種類(lèi)以及攻擊階段蛋白的增加量和時(shí)間各有不同。其他模型中的酒精用量、接種病毒用量等均無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),故而在模型的重復(fù)性方面就存在差異。大多數(shù)模型與我國(guó)肝纖維化的主要病因仍有較大差距,因其不存在病毒復(fù)制且不維持進(jìn)行性肝實(shí)質(zhì)損傷的過(guò)程?，F(xiàn)有成模技術(shù)均不能符合所有肝纖維化理想要求,僅能根據(jù)各個(gè)模型的發(fā)生機(jī)制、建立方法和病理特點(diǎn),結(jié)合研究目的選擇不同的成模方法,以盡量滿(mǎn)足研究需求。

因此筆者認(rèn)為,今后的研究應(yīng)加強(qiáng)機(jī)理、病理學(xué)方面的研究,建立能客觀(guān)反映人肝纖維化發(fā)病機(jī)制的、涉及肝炎病毒的動(dòng)物模型,可應(yīng)用組學(xué)技術(shù)在蛋白、基因和代謝等方面尋求多種病因,以期找到共同致病因素的支點(diǎn),針對(duì)關(guān)鍵基因和目標(biāo)蛋白藥物的研發(fā),使其能預(yù)防肝硬化、肝癌等嚴(yán)重并發(fā)癥,最終改善肝纖維化患者的預(yù)后。目前興起的表觀(guān)遺傳學(xué)在肝纖維化機(jī)制上的研究或許可為我們打開(kāi)新的大門(mén)。筆者還認(rèn)為,由于人類(lèi)的肝纖維化是多種因素共同作用的結(jié)果,因此可首選復(fù)合造模法,其次是選擇成模方法成熟的如CCl4誘導(dǎo)法。希望通過(guò)一代又一代研究者的摸索,可以改良造模方法,縮短造模時(shí)間,提高成模率,建立在給藥劑量、方式和時(shí)間以及纖維化程度評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)上有更統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的模型,以期為肝纖維化基礎(chǔ)研究做出更大貢獻(xiàn)。