何珍珍，袁小亮

（1. 贛南醫(yī)學(xué)院2019級碩士研究生；2. 贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，江西 贛州 341000）

相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，目前國內(nèi)肺癌的死亡增長幅度及危害程度居惡性腫瘤之首［1］。由于在疾病早期，肺癌患者多無癥狀或癥狀少且無特異性，絕大部分未能引起足夠重視，導(dǎo)致約2/3 的患者在確診時已無早期手術(shù)治療機會，因此肺癌的死亡率始終居高不下［2］，而五年生存率的提高有賴于肺癌的早期診斷治療［3］。由此可見，肺癌高死亡率和它的早期診斷治療呈負相關(guān)，因此早發(fā)現(xiàn)、早診治可顯著降低肺癌患者死亡率［4］。有研究表明，對于降低肺癌患者死亡率，傳統(tǒng)的肺癌診斷方法作用有限［5］。

目前臨床主要通過影像學(xué)檢查、細胞學(xué)檢查、組織學(xué)檢查及腫瘤標志物來診斷肺癌。常規(guī)影像X線胸片對于直徑＜5～6 mm的病變難以識別，且空間分辨率差；低劑量CT存在輻射風(fēng)險、容易漏診、假陽性率高和醫(yī)療費用偏高等問題；PET-CT檢查對于直徑＜8 mm 的肺癌結(jié)節(jié)其陽性率不高［6］，且具有該設(shè)備的醫(yī)療單位較少，加之費用昂貴，患者依從性不高。細胞學(xué)檢查中痰液及胸水標本檢出率低，易受人為因素影響。各種組織學(xué)檢查對于直徑小的病灶檢出率低，且各種活檢和手術(shù)都是有創(chuàng)操作，患者依從性低。腫瘤標志物或可彌補上述不足，但目前尚無明確的能指導(dǎo)治療決策的肺癌生物標志物。常規(guī)腫瘤標志物晚期肺癌患者的診斷效能更高［7］。已知的新型標志物尚未大規(guī)模運用于臨床，還需進一步更具說服力的科學(xué)驗證。上述用于肺癌診斷的標志物，其敏感性及特異性均不高，嘗試用各種新方法探索肺癌相關(guān)的特異性分子標志物已成為研究熱點。質(zhì)譜檢測技術(shù)作為肺癌診斷的新方法，發(fā)展迅速，其具有高靈敏度、所需樣本量少、分析快速、可同時進行分離和鑒定等優(yōu)點，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于肺癌不同生物樣本的研究中，以期發(fā)現(xiàn)一些新的能預(yù)測肺癌發(fā)生發(fā)展的特異性分子標志物，在將來成為肺癌診斷方法的補充。

1 質(zhì)譜技術(shù)概述

質(zhì)譜分析法就是通過對被測樣品離子質(zhì)荷比的測定獲得物質(zhì)分子量的一種分析方法。質(zhì)譜儀由進樣系統(tǒng)、離子源、質(zhì)量分析器、檢測器及數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)組成。樣品進樣方式包括直接進樣和色譜進樣，單組分、高沸點的液體樣品可采用直接進樣。色譜起化合物分離作用，分為液相色譜（LC）和氣相色譜（GC），多組分樣品可采用色譜進樣。離子源將樣品離子化，傳統(tǒng)電離方式有電子電離（EI）、化學(xué)電離（CI）、場電離（FI）、場解吸（FD）、快原子轟擊（FAB）、基質(zhì)輔助激光解吸電離（MALDI）、電噴霧電離（ESI）、大氣壓化學(xué)電離（APCI）。目前研發(fā)的直接離子化技術(shù)，如表面解吸化學(xué)電離（DAPCI）、電噴霧萃取電離（EESI）、大氣壓解吸光電離（DAPPI）等改進了傳統(tǒng)電離方式需復(fù)雜的樣本預(yù)處理方面的不足。質(zhì)量分析器可分離不同質(zhì)荷比的離子，有扇形磁場質(zhì)量分析器（Magnetic-Sector）、四級桿質(zhì)量分析器（Quadrupole）、離子阱質(zhì)量分析器（IT）、飛行時間質(zhì)量分析器（TOF）和傅里葉變換離子回旋共振分析器（FTICR）。不同類型的離子源和質(zhì)量分析器相互配合，構(gòu)成目前常見的質(zhì)譜儀。如APCI常與四級桿及離子阱質(zhì)量分析器組合；MALDI 通常與TOF 相結(jié)合，組成MALDI-TOF-MS。

2 質(zhì)譜技術(shù)在肺癌分子標志物中的應(yīng)用

肺癌發(fā)生是多因素多步驟的發(fā)展過程，在發(fā)生分子水平及亞細胞層次的改變后才發(fā)生細胞形態(tài)學(xué)改變［8］。肺癌患者的這些改變，可呈現(xiàn)在不同生物樣本中成分的變化。由此為質(zhì)譜技術(shù)檢測上述生物樣本尋找新的肺癌分子標志物提供可能。以下對質(zhì)譜檢測在肺癌代謝標志物、蛋白標志物、核酸標志物及每類標志物的適用樣本的研究進行綜述。

2.1 代謝標志物生物體代謝物質(zhì)種類繁多，為保證分析物的精確定量，常通過色譜、電泳兩種技術(shù)降低分析前樣品的復(fù)雜性。因此，代謝標志物的分析通常采用液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）、氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）、毛細管電泳-質(zhì)譜（CE-MS）等技術(shù)?；竟ぷ髟恚簶悠吠ㄟ^色譜柱或毛細管遷移進行分離，然后被引入質(zhì)譜儀，經(jīng)離子源電離為離子，在質(zhì)量分析器中根據(jù)質(zhì)荷比的不同被分離后進行測量，最終通過質(zhì)譜峰顯示質(zhì)譜圖。其中，LC-MS無需對樣品進行衍生化預(yù)處理，適宜分析大分子、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定的化合物；GC-MS 對樣品預(yù)處理條件要求較高，因此，其預(yù)處理過程相對復(fù)雜，且其檢測結(jié)果受多方面因素影響，如富集方法的選擇、色譜柱種類的選擇、色譜升溫的條件等［9］；CE-MS 可快速、高分辨率地分析核酸、氨基酸、羧酸和糖磷酸酯等帶電的代謝物質(zhì)。而不同的離子源類型所進行的電離方式，可區(qū)分不同類型和不同數(shù)量的代謝物。目前質(zhì)譜檢測用于肺癌代謝標志物的研究，其生物樣品包括以下幾種。

2.1.1 血液標本MAEDA J 等［10］研究探討了血漿氨基酸譜作為篩查非小細胞肺癌患者的新標志物的可能性。通過對141 例非小細胞肺癌患者和423例健康對照者的靜脈血中氨基酸濃度進行液相色譜-質(zhì)譜法測定，同時對研究數(shù)據(jù)進行處理并構(gòu)建診斷模型，發(fā)現(xiàn)無論疾病分期或組織類型，均可較好區(qū)分非小細胞肺癌患者和對照組。說明血漿氨基酸譜可作為非小細胞肺癌的一種潛在篩查工具。陳瑩蓉等［11］運用高效液相-四級桿-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對30 例肺癌患者與30 例健康人血清進行研究。結(jié)果顯示，肺癌患者和正常對照人群的代謝譜有明顯差異，其中3-羥基-3-甲基戊二酸、鞘氨醇、氯磷膽堿、甘油磷酸-N-花生四烯乙醇胺、磷脂酰膽堿和γ-亞油酸等6 種物質(zhì)差異最為明顯，說明上述代謝物有可能成為區(qū)分肺癌患者和正常對照人群的潛在代謝標志物。GUO Y M 等［12］收集58 例肺癌患者和495 例健康人的血清，利用傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜分析技術(shù)進行分析，發(fā)現(xiàn)有多達141種血液代謝物在肺癌患者和健康人間存在顯著差別，脂肪酸衍生物、鞘磷脂、溶血磷脂酰膽堿等組成的幾種脂類可能與肺癌的進展相關(guān)，使用其中幾種作為生物標志物進行分類，可較好地將兩組進行區(qū)分，敏感性和特異性分別為100%和91%。說明利用血液標本進行質(zhì)譜分析有望開發(fā)輔助篩查工具，用于肺癌患者的篩查。

2.1.2 尿液標本尿液代謝組學(xué)近年已成為發(fā)現(xiàn)非侵入性生物標志物的一個重要領(lǐng)域，這些生物標志物可檢測特定疾病或治療干預(yù)的微妙代謝差異。與其他生物液體相比，尿液的特點是易于收集，代謝物豐富，能反映體內(nèi)所有生化途徑的失衡。迄今為止，在所有的分析技術(shù)中，質(zhì)譜為分析尿液中的大部分代謝物成分提供了最好的靈敏度、選擇性和識別能力。結(jié)合質(zhì)譜法的定性和定量能力，以及相關(guān)技術(shù)（如超高效液相色譜和親水作用液相色譜）的不斷改進，液相色譜-質(zhì)譜法無疑是尿液代謝組學(xué)中應(yīng)用最廣泛、信息量最大的分析工具［13］。

親水相互作用色譜/液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)是一種很有前景的代謝組學(xué)研究工具，可揭示高度復(fù)雜樣品的更多信息，YANG Q 等［14］采用自行研制的親水相互作用色譜/液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)對肺腺癌、肺鱗癌患者的尿代謝組學(xué)進行研究發(fā)現(xiàn)，馬尿酸、甜菜堿、肉毒堿等物質(zhì)在肺癌患者尿液中明顯升高。AN Z L 等［15］建立了電噴霧電離、大氣壓化學(xué)電離、大氣壓光電離和快速分辨液相色譜-質(zhì)譜相結(jié)合的綜合電離方法，并在液相-色譜質(zhì)譜分析中獲得全面的代謝物譜。利用該項技術(shù)，研究者發(fā)現(xiàn)了肺癌患者尿液中潛在的包括氨基酸、核苷和吲哚在內(nèi)的11 種生物標志物。MATHé E A 等［16］使用無偏性液相色譜-質(zhì)譜法對469 例肺癌患者和536 例對照人群中收集的尿液進行分析測定，發(fā)現(xiàn)肌酸核糖苷、N-乙酰神經(jīng)氨酸兩種物質(zhì)可能是腫瘤組織中較高的泌尿臨床代謝組學(xué)標志物，與肺癌早期診斷和預(yù)后差有關(guān)。ZHAO C C 等［17］采用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜檢測肺癌組與對照組尿液，研究結(jié)果提示，肺癌的發(fā)生發(fā)展與d-谷氨酰胺及d-谷氨酸代謝紊亂、氨基酸失衡密切相關(guān)。

2.1.3 呼出氣體標本直接離子化質(zhì)譜技術(shù)可直接對樣品進行分析，檢測結(jié)果受可變因素影響較小［7］。而高壓光子電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)具有電離效率高、分子離子產(chǎn)率高、碎裂程度低等特點，是目前最有效、最受歡迎的在線監(jiān)測痕量揮發(fā)性有機化合物的軟電離技術(shù)之一［18-19］。

劉曉妮［20］通過電噴霧萃取電離聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)了內(nèi)源性肺癌特征性揮發(fā)性有機化合物，分別為丁二烯、乳清酸、四氫生物蝶呤、N-苯乙酰谷氨酰胺等，并對這4種進行了深入研究，闡明了其產(chǎn)生機制。郭冰清［21］則利用質(zhì)子轉(zhuǎn)移反應(yīng)質(zhì)譜檢測呼出氣體，共檢出8種內(nèi)源性揮發(fā)性有機化合物，并在其中找到甲醇、異戊二烯、乙醛等3種肺癌患者呼氣中特征性揮發(fā)性有機化合物。MENG S S 等［22］采集139例肺癌患者和289例健康成人的呼氣樣本，利用高壓光子電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)進行檢測，并建立肺癌檢測模型，該模型能區(qū)分肺癌患者和健康人，具有高度的敏感性和特異性。這項診斷性研究的結(jié)果表明，呼出氣體測試可能是肺癌檢測的可靠方法，而高壓光子電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)可能提供快速而準確的呼氣檢測方法。

2.1.4 胸腔積液標本根據(jù)檢測目標物質(zhì)的不同，胸水樣本可同時采用氣相-色譜質(zhì)譜聯(lián)用及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用兩種方法。劉會君［23］運用頂空固相微萃取-氣相色譜/質(zhì)譜技術(shù)分析肺癌患者、非肺癌（肺部良性疾?。┗颊咝厍环e液樣本的揮發(fā)性代謝物。研究發(fā)現(xiàn)，兩組胸腔積液樣本中均存在酮類、苯系衍生物這兩種主要代謝物，而酮類、醇類和酚類在兩組患者中有明顯區(qū)別，可能為惡性胸水中特異性揮發(fā)性代謝物，最終篩選得到環(huán)己酮、2-乙基-1-己醇兩種差異性代謝物。冶學(xué)燕等［24］應(yīng)用非靶向超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，研究探討了惡性胸腔積液與結(jié)核性胸腔積液中的代謝組學(xué)特征。發(fā)現(xiàn)結(jié)核性胸腔積液中1-油酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿、替普瑞酮、亞油酸甲酯和1-十七烷酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿顯著升高，提示上述物質(zhì)有可能是潛在的用于鑒別兩種胸腔積液的標志物。

2.1.5 支氣管肺泡灌洗液標本目前質(zhì)譜技術(shù)用于支氣管肺泡灌洗液代謝標志物研究相對較少。CALLEJóN-LEBLIC B 等［4］收集來自24 例肺癌患者和31例對照患者的支氣管肺泡灌洗液樣本，基于直接注入三重四極桿飛行時間質(zhì)譜與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)合技術(shù)進行代謝組學(xué)分析，在肺癌患者的支氣管肺泡灌洗液中共發(fā)現(xiàn)42種改變的代謝物，其中谷氨酸和谷氨酰胺代謝途徑受主要影響。研究表明，甘油和磷酸對肺癌診斷和預(yù)后具有敏感性和特異性生物標志物的潛力。

2.1.6 肺組織標本在進行肺腫瘤切除手術(shù)時，常通過冰凍切片快速明確組織的良惡性，但這種方法準確度不高。因此，若能尋找到更快速、更準確的檢驗方法用于確定肺癌組織的侵襲邊界，將更有助于確定手術(shù)切除范圍，從而避免因此造成的腫瘤復(fù)發(fā)或二次手術(shù)的發(fā)生。歐陽永中等［25］以未經(jīng)處理的肺鱗癌患者的腫瘤切片和正常組織切片作為樣本，利用結(jié)合隨機森林算法構(gòu)建的DAPCI-MS 進行檢測，可實現(xiàn)兩組切片的準確鑒別，該研究還提出磷脂酰膽堿、鞘磷脂類化合物可作為區(qū)分兩組切片的潛在特征性標志物。

2.2 蛋白標志物生物樣本蛋白標志物的質(zhì)譜檢測，通常需通過雙向凝膠電泳（2-DE）或液相色譜進行預(yù)分離以降低分析物的復(fù)雜性，提取出所需蛋白。相關(guān)研究也將蛋白芯片、磁珠分離等技術(shù)用于血液、尿液、胸水等樣本中蛋白的預(yù)分離。2-DE 由于分辨率和準確率低、蛋白質(zhì)重疊等缺點，逐漸被質(zhì)譜技術(shù)所取代。經(jīng)過預(yù)分離的樣品經(jīng)離子源電離成離子，或是不經(jīng)過預(yù)分離直接經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸電離離子化。離子在磁場中發(fā)生偏轉(zhuǎn)，在質(zhì)量分析器中根據(jù)質(zhì)荷比的不同進行分離后，得到質(zhì)譜圖。飛行時間質(zhì)量分析器適用于生物大分子。電離技術(shù)中MALDI、ESI、SELDI 均適合分析大分子化合物。因此，MALDI-TOF-MS、SELDI-TOF-MS 等質(zhì)譜技術(shù)，適宜分析蛋白、肽、核酸等物質(zhì)。用于肺癌蛋白標志物質(zhì)譜檢測的生物樣本來源廣泛。

2.2.1 血液標本HUANG W 等［26］收集了37 例非小細胞肺癌患者放化療前后的血清，并根據(jù)放化療敏感性將患者分為兩組，利用LC-MS對兩組間差異表達的蛋白進行分析，發(fā)現(xiàn)Alpha-1抗胰蛋白酶（a1-AT）水平在兩組間存在差異（P＜0.05），說明質(zhì)譜蛋白組學(xué)方法或可找到判定放化療預(yù)后的肺癌標志物。楊拴盈等［27］則采用液體芯片-飛行時間質(zhì)譜對肺癌患者、良性疾病患者及健康人的血清樣本檢測，同時應(yīng)用相關(guān)分析工具分析數(shù)據(jù)并建立判別模型，該模型對肺癌及對照組的識別率分別為82.22%和80.00%，對早期肺癌的識別率為76.92%，可用于鑒別肺癌與非肺癌患者，待大規(guī)模驗證后可進一步對潛在的標志蛋白進行鑒定。

2.2.2 尿液標本LV P P 等［28］以72 例小細胞肺癌患者和72例健康人血清和尿液樣本為研究對象，用銅離子螯合納米磁珠提取血清和尿肽，并用MALDI-TOF-MS 進行分析，該研究強調(diào)了小細胞肺癌患者與健康人之間血清和尿肽的差異。利用MALDI-TOF-MS 可建立靈敏度和特異性均較高的血、尿肽診斷分類模型。但該研究對小細胞肺癌相關(guān)多肽只進行了小規(guī)模驗證，在未來還需進行大規(guī)模臨床操作驗證，有望為開發(fā)快速、無創(chuàng)、小樣本量的基于血清和尿液的診斷方法奠定基礎(chǔ)。ZHOU M R等［29］利用LC-MS 分析了不同分期的肺腺癌患者和健康人的血清和尿液，分別在血清和尿液中鑒定出441、1 161 種蛋白質(zhì)。其中血清中延伸因子1-α2、蛋白酶體亞基α 型和生精相關(guān)蛋白水平，肺癌患者明顯高于健康對照組；跨膜蛋白143、鈣黏附素5、纖維連接蛋白1和集合素-11 水平，轉(zhuǎn)移性肺癌患者顯著低于非轉(zhuǎn)移性肺癌患者。前列腺特異性抗原、前列腺酸性磷酸酶在Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者尿液中顯著降低，中性粒細胞防御素1明顯升高。上述蛋白可能是肺腺癌早期診斷、轉(zhuǎn)移的潛在特異性生物標志物。此外，該研究還指出，血清和尿液中這些標志物的相對含量可用來判斷肺腺癌的進展，實現(xiàn)準確分期和診斷。

2.2.3 胸腔積液標本許晶［30］采集65 例晚期肺腺癌患者及32例結(jié)核性胸膜炎患者的胸腔積液，應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法（磁珠聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜）進行分析，發(fā)現(xiàn)兩組患者胸腔積液中存在明顯的多肽差異，這種差異多肽可能為肺癌患者胸腔積液中潛在的特異性分子標志物。該研究還通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)建立了肺癌惡性胸腔積液診斷模型，并與傳統(tǒng)胸水診斷方法進行對比，發(fā)現(xiàn)其較胸水細胞涂片檢出率高；與胸水傳統(tǒng)標志物癌胚抗原檢測相比兩者敏感性與特異性相當(dāng)，但前者的檢測較后者更加簡便、快速。張文雄等［31］則采用SELDI-TOF-MS 技術(shù)分析良、惡性胸腔積液，結(jié)果顯示，兩組胸腔積液間存在多個差異蛋白波峰，選用其中兩種差異蛋白為標志物建立了診斷模型，有望用于鑒別良惡性胸腔積液。

2.2.4 痰液標本痰液檢測敏感度及特異度低，且易受人為因素影響，質(zhì)譜技術(shù)可彌補上述不足。中性解吸電噴霧萃取電離質(zhì)譜（ND-EESI-MS）是痰液質(zhì)譜檢測的新方法，可檢測未經(jīng)預(yù)處理的痰液標本。ZHANG J Y 等［32］采用ND-EESI-MS 檢測非小細胞肺癌、肺良性疾病患者及健康人的痰液發(fā)現(xiàn)，可明顯區(qū)分肺癌組與對照組的質(zhì)譜峰。魏益平等［33］利用ND-EESI-MS 檢測發(fā)現(xiàn)，非小細胞肺癌患者的痰液樣品的指紋譜圖明顯區(qū)別于非肺癌患者痰液。說明ND-EESI-MS 能較好區(qū)分非小細胞肺癌和非肺癌患者，對于非小細胞肺癌的診斷可做到速度快且無創(chuàng)傷。但該研究所納入的樣本量過小，且未進一步研究差異質(zhì)譜峰的具體物質(zhì)。

2.2.5 唾液標本XIAO H等［34］將肺癌患者及健康人的唾液作為研究樣本，利用雙向差示凝膠電泳和質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)，肺癌患者唾液中代謝物改變，說明肺癌發(fā)生時，唾液中存在蛋白組生物標志物。該研究證實，唾液質(zhì)譜檢測區(qū)分肺癌與非肺癌患者的可行性，為肺癌患者唾液檢測提供了一種新方法。

2.2.6 支氣管肺泡灌洗液標本支氣管肺泡灌洗液具有創(chuàng)傷較小、干擾蛋白少、組分特異性高等優(yōu)點，能更好用于肺癌臨床診斷研究。PASTOR M D等［35］采用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳對慢性阻塞性肺疾病及肺癌患者肺泡灌洗液中的蛋白質(zhì)進行分離，然后利用MALDI-TOF-MS 進行檢測，確定了能夠區(qū)分這兩種病理實體的不同蛋白質(zhì)組圖譜。CARVALHO A S 等［36］對90 例可疑肺癌患者進行了為期兩年的前瞻性觀察，利用LC-MS 對這些患者的支氣管肺泡灌洗液進行蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，最終確診為肺癌患者的肺泡灌洗液與非肺癌患者相比，共存在130 個有顯著差異的表達蛋白，與相關(guān)研究進行比較，可作為肺癌診斷的有利實驗依據(jù)。

2.2.7 肺組織標本肺組織是含有腫瘤相關(guān)信息最為豐富的研究材料。因此，研究者們針對肺組織的蛋白標志物進行了大量相關(guān)研究。質(zhì)譜檢測方法具有免標記、高靈敏性、高特異性、同組分同時檢測等優(yōu)點[37]。在LI B R 等［38］的研究中，將無轉(zhuǎn)移的鱗狀細胞肺癌的腫瘤組織、腫瘤鄰近的正常支氣管上皮組織細胞膜中提取的蛋白質(zhì)，經(jīng)2-DE 預(yù)分離后，采用MALDI-TO-MS 對25 個差異顯著的蛋白斑點進行鑒定，發(fā)現(xiàn)了一些在肺癌鱗癌組織和相鄰正常組織中有差異表達的候選生物標志物蛋白。

2.3 核酸標志物MALDI-TOF-MS的出現(xiàn)，使得質(zhì)譜檢測核酸、蛋白等生物大分子成為可能［39］?；驹恚簶颖驹诨|(zhì)的輔助作用下，核酸分子解析為單電荷離子，飛行時間質(zhì)量分析器可通過離子到達檢測器的飛行時間對其進行分離后，得到所需圖譜。目前用于肺癌核酸標志物質(zhì)譜檢測的生物樣本有尿液、血液、肺腫瘤組織等。

2.3.1 尿液標本修飾核苷是機體RNA 轉(zhuǎn)錄后修飾產(chǎn)物，不能被細胞再利用，經(jīng)血液隨尿液排出體外。由于腫瘤細胞RNA 周轉(zhuǎn)速度快，因此修飾核苷在很多種惡性腫瘤患者尿液中明顯較健康人高［40］。MCENTIRE J E 等［41］通過高效液相色譜法測定了49例男性肺癌患者、35例其他癌癥患者和48例非腫瘤性疾病住院患者血清中的廣譜修飾核苷。研究發(fā)現(xiàn)，假尿嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、1-甲基腺嘌呤核苷等13 種修飾核苷在肺癌患者血清中的濃度水平明顯區(qū)別于非腫瘤性疾病患者。吳逸明等［42］利用高效液相色譜法檢測出肺癌患者尿液中假尿嘧啶核苷和肌苷量比值明顯高于健康人。王文昭等［43］采用二維液相色譜在線分析系統(tǒng)檢測的尿修飾核苷代謝輪廓譜，可快速準確地區(qū)分肺癌與非肺癌患者。馮璐［40］應(yīng)用高效液相色譜在線系統(tǒng)分別檢測肺癌患者與健康人尿中Pseu、mlA、mlI、mlG 及m2G五種核苷，同時應(yīng)用液相色譜法檢測尿中肌酐，以兩者比值表示核苷濃度，分析其與肺癌發(fā)生、病理分型及腫瘤分期間的關(guān)系。結(jié)果提示，尿中Pseu、mlA、mlI、mlG及m2G可能成為肺癌診斷的分子標志物，其中mlA 對肺癌診斷的準確性最高，mlI 可能有助于肺癌的病理分型；mlA、mlI 和Pseu 三者聯(lián)合檢測即可保證對肺癌患者檢測的極高敏感度，可能有助于確定肺癌的高危人群。

2.3.2 血液標本臨床上現(xiàn)有的用于非小細胞肺癌病理分型診斷方法有限，研究者們嘗試尋找可用于指導(dǎo)病理分型的特異標志物。DNA 甲基化是近年研究熱點，朱劍武等［44］采用MassARRAY 質(zhì)譜甲基化測序方法，檢測血清樣本，發(fā)現(xiàn)與健康人相比，IGSF4 基因在非肺癌患者中呈高甲基化狀態(tài)。說明該檢測方法可在無創(chuàng)的情況下，對非小細胞肺癌患者進行早期診斷。

2.3.3 肺組織標本EGFR 和ALK 基因突變陽性的非小細胞肺癌患者，經(jīng)靶向藥物治療后可獲得較好的療效，研究者們嘗試尋找更多突變基因以輔助肺癌患者的診治。TIAN H X 等［45］建立了一種在MassARRAY 質(zhì)譜平臺上，通過AgenaIPLEX 化學(xué)和基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜分析，可以對中國人肺癌組織標本中的基因突變進行高度平行多重檢測的方法。傳統(tǒng)直接測序法因靈敏度低導(dǎo)致假陽性率高，而該檢測方法顯示了質(zhì)譜檢測高靈敏性的特點，可彌補直接測序法的不足。

3 小結(jié)與展望

質(zhì)譜檢測技術(shù)目前廣泛應(yīng)用于肺癌分子標志物的研究中，研究樣本包括血液、痰液、呼出氣體、尿液、胸水、唾液、支氣管肺泡灌洗液、肺組織等，相關(guān)標志物包括代謝標志物、蛋白標志物、核酸標志物等，有望作為肺癌診斷方法的有力補充，在將來成為肺癌的無創(chuàng)性篩查或診斷手段。

質(zhì)譜檢測在肺癌診斷方面的研究雖取得一定成果，但尚有待解決的問題存在，比如上述樣本的收集、處理以及檢測方法的標準化尚未統(tǒng)一，儀器操作人員技術(shù)水平參差不齊，均可能導(dǎo)致得到的標志物診斷價值存在差異。但不可否認，一旦質(zhì)譜檢測廣泛應(yīng)用于臨床，將極大提高診斷效率，節(jié)約時間及人力、物力成本，期待質(zhì)譜技術(shù)在將來能檢測出更多的特異性肺癌分子標志物，從而能早期診斷肺癌患者，以指導(dǎo)并改善目前肺癌的臨床診治現(xiàn)狀。