范昆,周文慧,宮小迪,曲健祿,付麗*

(1.山東省果樹研究所，山東泰安 271000；2.泰安市林業(yè)保護發(fā)展中心，山東泰安 271000)

蘋果斑點落葉病是中國蘋果產(chǎn)區(qū)的重要病害之一，由半知菌亞門鏈格孢屬的鏈格孢蘋果轉(zhuǎn)化型(Alternariaalternataf.sp. mali)侵染所致，該病害不僅危害蘋果葉片，對新梢和果實也會有影響[1,2]。發(fā)病嚴(yán)重時，病葉率可達90%，造成果樹提前落葉，直接影響后期果實產(chǎn)量和品質(zhì)[3]。目前，對蘋果斑點落葉病的防治主要以化學(xué)藥劑為主，較多使用的農(nóng)藥為代森錳鋅、戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑等單劑產(chǎn)品[4,5]。由于常年使用這些藥劑，導(dǎo)致蘋果斑點落葉病對這些藥劑已逐漸產(chǎn)生抗藥性[6]。生產(chǎn)上急需新的高效、低毒的殺菌劑配方。

農(nóng)藥復(fù)配是研制和開發(fā)農(nóng)藥新品種的重要途徑之一。苯醚甲環(huán)唑?qū)儆谌蝾悮⒕鷦?，其殺菌原理是通過干擾病原菌細(xì)胞的C14脫甲基化作用，抑制麥角甾醇的生物合成，從而使甾醇滯留于細(xì)胞膜內(nèi)，損壞膜的生理作用，導(dǎo)致真菌死亡[7]。該藥劑具有良好的內(nèi)吸性，兼具預(yù)防和治療的作用。吡唑醚菌酯是一種兼具吡唑結(jié)構(gòu)的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，通過阻止細(xì)胞色素b和C1間電子傳遞而抑制線粒體呼吸作用，使線粒體不能產(chǎn)生和提供細(xì)胞正常代謝所需要的能量，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡[8]。該藥劑具有保護、冶療、葉片滲透傳導(dǎo)等作用。筆者對苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯具有不同作用機制的藥劑進行科學(xué)復(fù)配研究，開展室內(nèi)聯(lián)合毒力測定，選擇適合的混配制劑進行田間藥效試驗，以篩選出高效、低殘留的殺菌劑配方，為有效防控蘋果斑點落葉病危害，提高蘋果品質(zhì)和產(chǎn)量提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試藥劑，共6種，如表1，其中苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯原藥分別先用少量丙酮溶解，配成10 000 μg/mL的母液，再以0.2%的體積分?jǐn)?shù)加入乳化劑吐溫80，于冰箱中4 ℃下貯藏備用，使用時以無菌水稀釋至所用濃度。

供試病原菌及培養(yǎng)基，蘋果斑點落葉病菌(Alternariaalternataf.sp.mali)由山東省果樹研究所果樹植保團隊病理學(xué)方向鑒定、保存；PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂16 g，去離子水1 000 mL)。

表1 試驗藥劑及來源

1.2 試驗設(shè)計與方法

1.2.1 室內(nèi)聯(lián)合毒力測定

室內(nèi)單劑毒力測定[5]：先將苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯母液分別配制成5個濃度梯度(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L)，將病原菌于PDA培養(yǎng)基上25 ℃預(yù)培養(yǎng)4 d，用直徑5 mm的打孔器在靠近菌落邊緣的圓周上打取菌餅，接種到含有不同藥劑濃度的培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)基上兩種藥劑終濃度均為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L，每皿一片，置于25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)4 d，用十字交叉法測定各處理的菌落生長直徑，以清水為對照，每濃度處理重復(fù)4次。測定菌落徑向線性生長量，確定藥劑對菌落生長的抑制率。通過菌絲生長抑制概率值和藥劑濃度對數(shù)值之間的線性回歸分析，求出各藥劑對菌株的有效抑制中濃度(EC50值)。

室內(nèi)混配藥劑聯(lián)合毒力測定[9]：在單劑毒力測定的基礎(chǔ)上，將供混配的苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯母液分別按體積比例分別設(shè)置4∶1、2∶1 、1∶1 、1∶2、1∶3共5個配比，按不同配比配制成最終質(zhì)量濃度為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L 5個系列濃度的含藥PDA培養(yǎng)基，確定藥劑對菌落生長的抑制率。每處理濃度重復(fù)4次，以不加藥劑的PDA培養(yǎng)基作為對照，求出混配藥劑對菌株的有效抑制中濃度EC50值，利用孫云沛法[10]計算混配劑的共毒系數(shù)(CTC)，評價混配劑的增效作用。

試驗數(shù)據(jù)均由Microsoft Excel 2010、DPS數(shù)據(jù)處理工作平臺進行統(tǒng)計分析，計算出每種藥劑的EC50值、95%置信限區(qū)間。

混配劑理論毒力指數(shù)TTI=單劑A的TI × PA+單劑B的TI × PB

(PA和PB分別為混配劑中有效成分的百分含量)

增效作用判斷：CTC≥120，具有增效作用；80

1.2.2 田間藥效試驗

試驗地點在山東省果樹研究所天平湖基地。蘋果品種為新紅星，樹齡為8年，株行距為3 m×5 m，常規(guī)管理，歷年來蘋果斑點落葉病發(fā)生較嚴(yán)重。

試驗濃度設(shè)置為30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑有效成分用量85.7、100、120 mg/kg；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑66.7 mg/kg；250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7 mg/kg；80%代森錳鋅可濕性粉劑1 000 mg/kg；以清水為空白對照。

小區(qū)隨機排列，每小區(qū)2株樹，重復(fù)4次。分別于2021年于5月27日(發(fā)病前)、6月10日、6月24日進行3次噴藥。每株噴灑藥液4 L。于2021年6月24日、7月8日分別調(diào)查病葉發(fā)生情況，按分級標(biāo)準(zhǔn)記載并計算病情指數(shù)和防治效果[6]。

2 結(jié)果分析

2.1 室內(nèi)毒力測定

苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯及5個不同配比的混配藥劑對蘋果斑點落葉病菌的毒力測定結(jié)果見表2。苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯對蘋果斑點落葉病菌均有較好的抑制活性。其中苯醚甲環(huán)唑與吡唑醚菌酯的配比2∶1、1∶1、1∶3的共毒系數(shù)(CTC)分別為126.28、120.37、137.15，對蘋果斑點落葉病菌的毒力具有明顯的增效作用，當(dāng)配比為1∶3時的共毒系數(shù)值最高，增效作用最顯著。

表2 苯醚甲環(huán)唑與吡唑醚菌酯不同比例混配對蘋果斑點落葉病菌的毒力測定結(jié)果

2.2 田間藥效試驗

30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌懸浮劑對蘋果斑點落葉病田間防效試驗結(jié)果見表3。2021年6、7月施藥后的2次調(diào)查，30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑120 mg/kg處理防效(84.35%，86.14%)均顯著高于對照藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑66.7 mg/kg、250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7 mg/kg、80%代森錳鋅可濕性粉劑1 000 mg/kg，其100 mg/kg處理的防效(82.61%、84.38%)與對照藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑66.7 mg/kg防效(81.35%、82.88%)差異不顯著，而顯著優(yōu)于250 g/L吡唑醚菌酯乳油 166.7 mg/kg(79.07%、80.67%)和80%代森錳鋅可濕性粉劑1 000 mg/kg的防效(78.91%、80.93%)；其85.7 mg/kg處理的防效與對照藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑66.7 mg/kg、250 g/L吡唑醚菌酯乳油 166.7 mg/kg和80%代森錳鋅可濕性粉劑1 000 mg/kg防效差異的不顯著 。

表3 30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑防治蘋果斑點落葉病藥效結(jié)果

3 小結(jié)與討論

本試驗室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯以2∶1、1∶1、1∶2和1∶3復(fù)配后，均對蘋果斑點落葉病菌防治有增效作用，其中以1∶3增效最為顯著，共毒系數(shù)(CTC)為137.15。田間藥效試驗表明，30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑3個濃度處理均對蘋果斑點落葉病的防效均在80%以上，其中以有效成分120 mg/kg的防效最高，顯著優(yōu)于3種對照藥劑。綜合考慮田間防效、有效成分用量成本及抗藥性風(fēng)險等因素，推薦30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑有效成分用量為85.6～120 mg/kg。

2018年，劉保友等[11]將苯醚甲環(huán)唑與克菌丹混配防治蘋果斑點落葉病，農(nóng)藥制劑減少了50.55%，降低農(nóng)藥投入成本35.35%以上。2020年，郝麗霞等[12]使用38%吡唑醚菌酯·戊唑醇懸浮劑防治蘋果斑點落葉病，田間藥效試驗的防效在90%以上，顯著優(yōu)于對照藥劑?？梢?，復(fù)配藥劑的使用確實增加了對蘋果斑點落葉病的防治效果，減少了藥劑使用量，延緩了抗藥性的產(chǎn)生。目前尚未有苯醚甲環(huán)唑與吡唑醚菌酯進行復(fù)配防治蘋果斑點落葉病的藥劑登記及文獻報道。因此，30%苯醚甲環(huán)唑·吡唑醚菌酯懸浮劑作為蘋果斑點落葉病有效防控藥劑和延緩病原菌抗藥性發(fā)展的混配制劑具有良好的推廣和應(yīng)用潛力。