郭 玲

（河南省鎮(zhèn)平縣農(nóng)業(yè)綜合執(zhí)法大隊 474250）

牛布魯氏菌病是在養(yǎng)牛場中常見的一種細(xì)菌性傳染性疾病，本病還是一種人畜共患病，屬于國家規(guī)定的二類傳染病[1]。本病可以給養(yǎng)殖場造成嚴(yán)重的威脅，而且本病的病程較長，會長時間存在于養(yǎng)殖場中，其能夠造成多種動物的感染發(fā)病，所以在養(yǎng)殖場中很難能夠?qū)Ρ静∵M(jìn)行凈化，造成病原菌的威脅是長期的。有統(tǒng)計結(jié)果表明本病每年在全球170多個國家均有發(fā)生，而且發(fā)生后造成的經(jīng)濟損失巨大，可以達(dá)到甚至?xí)^40億美元。而且本病的發(fā)生還具有公共衛(wèi)生安全意義。

1 病原簡介

本病的病原為布魯氏菌，是一種外觀呈卵圓形的短小桿菌，菌體不生有鞭毛，也不會形成芽孢和莢膜。菌體經(jīng)過革蘭氏染色后呈現(xiàn)出革蘭氏陰性。通?？梢愿鶕?jù)其菌體的宿主以及所在宿主體內(nèi)產(chǎn)生抗體的情況將本病分為七個種，分別是：羊種布魯氏菌、牛種布魯氏菌、豬種布魯氏菌、犬種布魯氏菌、綿羊布魯氏菌、森林鼠種布魯氏菌以及海洋哺乳動物布魯氏菌種[2]。其中牛種布魯氏菌、羊種布魯氏菌和豬種布魯氏菌在我國較為常見和流行。通常造成牛感染的布魯氏菌也為這三種。

布魯氏菌是一種在動物細(xì)胞內(nèi)寄生的細(xì)菌，其進(jìn)入動物體內(nèi)后主要是對生殖系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)形成危害，病?？梢酝ㄟ^精液、乳汁以及流產(chǎn)后流出的黏液甚至流產(chǎn)胎兒向體外排毒。病原具有非常強的侵襲力，可以通過受損的皮膚黏膜甚至是完整的皮膚黏膜侵入機體內(nèi)，從而使得機體出現(xiàn)發(fā)病。

布魯氏菌對環(huán)境的抵抗力較差，通常應(yīng)用常規(guī)消毒液均可以將其殺死，在日常飼養(yǎng)管理中，用于本病的消毒藥物有來蘇兒、福爾馬林和生石灰。病原對光和熱也較為敏感，通常在陽光照射下經(jīng)過4h后，病原就可以被殺滅。用巴氏滅菌法，經(jīng)過10min也可以將本菌殺死。在60℃的環(huán)境中，經(jīng)過30min后，本菌就可以被滅活。70℃的水中僅需要5min，如果是沸水中，本菌可以被瞬間滅活。但在土壤和皮毛中可以存活較長時間，通常可以達(dá)到2個月以上。在病牛的分泌物中，本菌可以存活超過4個月，在污染的水中可以存活超過5個月。

本菌對一些抗生素較為敏感，常見的有四環(huán)素和土霉素等，有時鏈霉素也具有良好的效果。

2 流行病學(xué)

本病的傳染源為發(fā)病牛和帶菌牛，這些?？梢酝ㄟ^分泌物和排泄物以及流產(chǎn)組織等向體外排出病原，這些病原可以對周圍環(huán)境形成污染，尤其是對飼料、水源以及土壤等，本病原甚至可以在空氣中懸浮。有的病牛在痊愈后，體內(nèi)還帶有病原，可以長期向體外排出病原。當(dāng)健康牛接觸到這些受到污染的物質(zhì)時，就會受到病原菌的侵襲，從而引起發(fā)病。本病的傳播途徑大多是經(jīng)過直接接觸，這也是本病傳播的最主要的方式。就是在健康牛接觸到病牛的分泌物或排泄物以及被這些物質(zhì)所污染的物質(zhì)時，可以直接感染發(fā)生本病。常見的有糞便、尿液、精液、陰道分泌物和流產(chǎn)胎兒以及流產(chǎn)胎衣、羊水等。本病還可以通過消化道進(jìn)行感染，牛食用了受到污染的飼料和飲水時，也可以引起本病的發(fā)生。有證據(jù)表明，本病還可以通過蚊蟲叮咬和吸血等行為進(jìn)行傳播，但相對傳播有限。在公牛和母牛進(jìn)行交配時也有可能會傳播本病，但傳播率較低，有時給母牛人工授精和接生時，如果人員和器具攜帶有病原，也可能會造成母牛的感染和發(fā)病。本病的易感動物為多種動物，常見的為羊、馬、豬等，也對人具有易感性。其中牛的易感性最高，在牛中，又以處于妊娠期的母牛易感性最高，這也是引起母牛流產(chǎn)的最主要的原因。

本病主要是感染成年牛，犢牛對本病具有一定的免疫力，發(fā)病較少。通常公牛比母牛的易感性低，發(fā)病率也較低。年齡較大的牛也會比成年牛的發(fā)病率低。本病的發(fā)生還與飼養(yǎng)管理有關(guān)，當(dāng)飼養(yǎng)管理不良時，發(fā)病率會有明顯的上升趨勢。尤其是在通風(fēng)不良以及日光照射時間過短或者牛舍內(nèi)外過于臟亂，甚至在營養(yǎng)配比不均衡時也可以引起本病的發(fā)病率升高。有一些牛在感染本病后可以自愈，但能向周圍環(huán)境中排毒。

本病的發(fā)生沒有明顯的季節(jié)性，但在天氣寒冷的季節(jié)發(fā)病率會略有升高。本病多呈地方流行性，通常在新的疫區(qū)可以大規(guī)模暴發(fā)，本病的潛伏期的長短通常和病牛的體質(zhì)情況以及發(fā)病型和疫苗的免疫情況具有相關(guān)性，最長可以達(dá)到6個月。

3 臨床癥狀

牛在感染病原后，在經(jīng)過0.5～6個月的潛伏期后，就會出現(xiàn)臨床癥狀，通常不同性別的牛表現(xiàn)出的臨床癥狀有所區(qū)別，主要臨床癥狀表現(xiàn)在繁殖性能的危害。

3.1 母牛

母牛在發(fā)病期最典型的癥狀是出現(xiàn)流產(chǎn)，只要是在妊娠期的母牛感染發(fā)病后，大部分會出現(xiàn)流產(chǎn)，也可能有部分母牛不出現(xiàn)流產(chǎn)。通常，母牛在流產(chǎn)前可見乳房腫脹，陰唇出現(xiàn)紅腫，陰道內(nèi)的黏膜也出現(xiàn)潮紅，有的病牛的陰道黏膜上還常見有呈米粒狀的結(jié)節(jié)，顏色呈紅色，并從陰道內(nèi)流出黏膿性的分泌物，這些分泌物呈現(xiàn)出的顏色為灰白色或灰色。這樣不久之后，母牛就會表現(xiàn)為流產(chǎn)癥狀。流產(chǎn)后的病牛還常見有胎衣滯留的情況，并不斷從陰道內(nèi)排出大量分泌物，具有惡臭氣味，顏色呈現(xiàn)出棕紅色。經(jīng)過1～2周后，母牛的這些癥狀會慢慢消失。如果母牛在妊娠早期發(fā)生流產(chǎn)，那么流產(chǎn)的胎兒為死胎。當(dāng)母牛在妊娠后期出現(xiàn)流產(chǎn)，那么流產(chǎn)的胎兒可能會是活胎，但胎兒的體質(zhì)較弱，常會在產(chǎn)出后的一段時間內(nèi)出現(xiàn)死亡的情況。

3.2 公牛

公牛在發(fā)生本病后的癥狀主要是在生殖系統(tǒng)，常見公牛陰莖發(fā)紅和腫大，而且出現(xiàn)睪丸和附睪的炎癥。病牛如果病程較急，通常表現(xiàn)出的癥狀為睪丸突然腫大嚴(yán)重，而且有劇痛感，病牛還表現(xiàn)出明顯的體溫升高的情況。

3.3 其他癥狀

有的病牛在發(fā)病后還表現(xiàn)為關(guān)節(jié)部位的腫脹和疼痛，尤其是前肢部位出現(xiàn)明顯的水腫，還可見有滑囊炎的情況，后肢有時也可見有明顯的腫脹。病牛表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎，甚至還可出現(xiàn)有淋巴結(jié)的炎癥。

4 病理變化

根據(jù)不同性別的牛出現(xiàn)的臨床癥狀不同，其內(nèi)部的病理變化也有所差異。

4.1 母牛

對發(fā)病母牛進(jìn)行剖檢，可見其病變主要集中在生殖系統(tǒng)，如子宮、卵巢和輸卵管等部位。病牛可見子宮內(nèi)膜有充血和水腫的情況，外觀顏色呈現(xiàn)或紅色或灰紅色。在局部位置還可見有潰瘍灶或壞死灶。在絨毛膜上有散在的壞死灶，在病灶的外表和內(nèi)部以及間隙中存在有大量的黃色或灰紅色的液體狀物質(zhì)，呈黏膿性。卵巢和輸卵管上出現(xiàn)囊腫，還表現(xiàn)出炎癥病灶。胎膜出現(xiàn)明顯的水腫，呈現(xiàn)出膠凍樣的浸潤，而且在胎膜的表面上覆蓋有大量的纖維素樣物質(zhì)和膿性物質(zhì)。對于母牛出現(xiàn)流產(chǎn)后對流產(chǎn)胎兒進(jìn)行剖檢，可見胎兒體內(nèi)的臟器出現(xiàn)腫大的情況，特別是在肝臟和肺臟等部位病變明顯，有大量的壞死灶。胎兒還可見有明顯的敗血癥的情況。

4.2 公牛

公牛的病變主要是集中在陰莖和睪丸等部位，將陰莖和睪丸切開后，可見切面上會有大量的化膿灶，在黏膜上還有大量的結(jié)節(jié)。

4.3 其他病變

將前肢和關(guān)節(jié)部位切開后可見在這些部位有淡黃色或灰白色的液體流出。

5 診斷方法

本病的診斷方法主要是通過病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷以及分子生物學(xué)診斷。通常病原學(xué)診斷和血清學(xué)診斷應(yīng)用較為廣泛，而分子生物學(xué)診斷雖然具有較高的靈敏度和特異性，但其對技術(shù)和試驗儀器的要求較高，不適合在臨床上進(jìn)行本病的診斷。本病通過對臨床癥狀和病理變化的觀察僅可以做出初步診斷，并不能夠確診。

5.1 病原學(xué)診斷

病原學(xué)診斷是采用對病原進(jìn)行分離和鑒定，通常是在病牛的陰道內(nèi)取分泌物，胎兒的胃內(nèi)容物，而后將這些內(nèi)容物通過改良的抗酸染色或應(yīng)用KOSTERS染色。而后鏡檢，在視野中可見有弱的抗酸性布魯氏菌的形態(tài)時，可以確定為布魯氏菌感染。在病原學(xué)診斷中，還可以從病料組織中分離病原菌，經(jīng)過對病原菌的培養(yǎng)和生化特性分析以及通過革蘭氏染色后進(jìn)行鏡檢，也可以確診本病。

5.2 血清學(xué)診斷

本病的血清學(xué)診斷方法常見的有4種，分別是虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、補體結(jié)合試驗和酶聯(lián)免疫吸附試驗以及乳環(huán)試驗等。

5.2.1 虎紅平板凝集試驗

本試驗是通過將玻璃平板分割成為方格，每個方格的大小約為4*4cm2，而后在方格中標(biāo)注血清的編號，而后在每個方格中滴入月30μL的待檢測的血清，并且在待檢測血清的邊上滴加30μL的抗原，將血清和抗原混勻，觀察，如果混合后產(chǎn)生了絮狀和顆粒狀的凝集顆粒，則可以判定待檢測的血清呈陽性，由此可以確診本病，如果二者混合后呈現(xiàn)出粉紅色，則應(yīng)當(dāng)判定待檢血清為陰性血清。對結(jié)果的判定應(yīng)當(dāng)在4min內(nèi)，否則結(jié)果會不準(zhǔn)確。

5.2.2 試管凝集試驗

試管凝集是在針對抗原進(jìn)行稀釋后與待檢血清進(jìn)行反應(yīng)。抗原的稀釋應(yīng)用的稀釋液為0.5%的石炭酸生理鹽水。這樣進(jìn)行二者反應(yīng)，在37℃的溫度下恒溫放置20h，再放置于室溫下進(jìn)行2h的平衡，就可以對結(jié)果進(jìn)行觀察判定。

5.2.3 補體結(jié)合試驗

補體結(jié)合反應(yīng)時在平板凝集和試管凝集的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，當(dāng)二者的結(jié)果均為陰性時，可以進(jìn)行補體結(jié)合試驗，通過補體結(jié)合試驗可以對結(jié)果再次判定。有時補體結(jié)合反應(yīng)和其他兩個反應(yīng)的結(jié)果不同，則以補體結(jié)合試驗的結(jié)果為準(zhǔn)。

5.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗

本試驗的診斷結(jié)果具有較高的靈敏度和特異性，而且特異性要高于補體結(jié)合試驗。在進(jìn)行試驗時，要對測試板中抗原進(jìn)行包被，而后加入待檢血清，經(jīng)過37℃的溫度一段時間后，加入酶標(biāo)二抗以及底物和終止液，將結(jié)果置于酶標(biāo)儀中進(jìn)行觀察讀數(shù)，根據(jù)讀數(shù)結(jié)果判定待檢測血清的陰性還是陽性。

5.2.5 乳環(huán)試驗

對于奶牛來說，還可以通過采集乳汁來進(jìn)行試驗，在牛奶中加入蘇木精染色抗原，這樣牛奶中的抗體就會和抗原相結(jié)合，結(jié)合后可以顯示顏色，會在牛奶的表面形成一層藍(lán)色的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，從而可以診斷本病。但應(yīng)用本方法時會有非特異性的反應(yīng)，這就要在應(yīng)用前進(jìn)行區(qū)分。

5.3 分子生物學(xué)診斷

目前應(yīng)用于本病診斷的分子生物學(xué)技術(shù)主要是PCR技術(shù)，核酸雜交技術(shù)等。這些技術(shù)主要是針對病原的核酸進(jìn)行鑒定。從而達(dá)到診斷的效果。通常應(yīng)用最廣的就是PCR技術(shù)，應(yīng)用本技術(shù)具有較高的特異性和靈敏度，檢測速度快，可以檢測出病料中的微量病原。應(yīng)用本方法可以檢測出病料中的1pg的病原DNA[3]。但本方法對操作人員的操作要求較高，對試驗儀器設(shè)備的需求也較高，不適于在臨床診斷中進(jìn)行應(yīng)用。

6 防控措施

本病的預(yù)防需要通過綜合性一系列防控措施來達(dá)到良好的效果。通過單一的方式進(jìn)行預(yù)防不僅效果不好，還會導(dǎo)致養(yǎng)殖人員陷入盲目樂觀的情況，使得對本病放松警惕，使得疾病發(fā)生，造成嚴(yán)重的后果。

6.1 疫苗接種

通過疫苗接種是預(yù)防本病的最有效的方式，在實際生產(chǎn)中要予以重視。當(dāng)前，國內(nèi)應(yīng)用的疫苗為布魯氏菌弱毒苗，本疫苗通常是采用肌肉注射和皮下注射的方式進(jìn)行免疫，也可以采用噴霧和口服的方式進(jìn)行免疫。通常本病只是在疫區(qū)進(jìn)行接種，尤其是種公牛和種母牛一定要接種本疫苗，尤其是在配種前和分娩前要進(jìn)行接種。此外，肉牛也要接種疫苗。但本病的接種要注意疫苗的質(zhì)量，要根據(jù)說明對疫苗進(jìn)行運輸、保存和使用。以防止疫苗失效，從而導(dǎo)致牛群在接種后不能產(chǎn)生有效的抗體，使得牛群對本病沒有免疫力。疫苗在使用前，還要按照說明對疫苗進(jìn)行稀釋，對牛群進(jìn)行免疫時，要應(yīng)用適宜的劑量，如果劑量過大容易引起牛群反應(yīng)過大，甚至可以導(dǎo)致本病的發(fā)生，如果劑量過小，則會導(dǎo)致免疫效果不好。而且在接種疫苗前不能使用抗生素類藥物，防止這些藥物對免疫效果產(chǎn)生影響。對于有的牛自身體質(zhì)較差或者是處于疾病過程中，應(yīng)當(dāng)先給牛提升免疫力和治療疾病，當(dāng)?；謴?fù)健康后，再進(jìn)行疫苗接種工作。給牛群接種疫苗后的1個月，應(yīng)當(dāng)對牛群進(jìn)行抽檢，采集血液檢測血液中的抗體水平，以便能夠?qū)σ呙绲拿庖咝ЧM(jìn)行監(jiān)測，如果牛群抗體水平較低時，需要對牛群進(jìn)行補免。

6.2 改變養(yǎng)殖模式

養(yǎng)殖場應(yīng)采取自繁自養(yǎng)的飼養(yǎng)模式，這樣可以避免在場外引種時將病原引入。但有的養(yǎng)殖場不具備自繁自養(yǎng)的條件，需要從養(yǎng)殖場外進(jìn)行引種，這就需要在引種前先要對引種養(yǎng)殖場所在地進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，以確保引種地不是疫源地。而后要對所引進(jìn)的牛進(jìn)行檢疫，確保其沒有攜帶特定病原。在引種過程中，應(yīng)當(dāng)盡量減少運輸?shù)木嚯x和時間，這樣可以避免在引種路上接觸到病原而引起感染。在引進(jìn)養(yǎng)殖場后，需要進(jìn)行一段時間的隔離，在隔離期間，牛沒有出現(xiàn)臨床癥狀，才可以將其混群飼養(yǎng)。

6.3 加強飼養(yǎng)管理

在養(yǎng)殖場進(jìn)行養(yǎng)殖時，需要通過加強飼養(yǎng)管理來提升牛群的非特異性免疫力，增強其對病原的抵抗力。通常是在養(yǎng)殖的過程中，需要給牛群提供營養(yǎng)良好的飼料，并且飼料中所含有的營養(yǎng)成分的配比適宜，可以確保牛群能夠采食到的營養(yǎng)物質(zhì)全面，能夠提升其機體的免疫力。在管理中，應(yīng)當(dāng)給牛群提供良好的環(huán)境，包括溫度、濕度和通風(fēng)等條件。通常要求在不同的季節(jié)，牛舍內(nèi)應(yīng)當(dāng)具有相對恒定的溫度，尤其是在氣候寒冷和氣候炎熱的季節(jié)，要能夠?qū)εＩ醿?nèi)溫度進(jìn)行調(diào)節(jié)，使得溫度和濕度不會變化劇烈，不僅可以避免由于溫度和濕度變化造成牛的生理反應(yīng)，還可以減少這些因素對牛形成應(yīng)激。在牛舍內(nèi)，要有良好的通風(fēng)條件，能夠及時將舍內(nèi)的有害氣體排出，尤其是在冬天，在通風(fēng)的同時要注意通風(fēng)與保溫的關(guān)系，避免過度通風(fēng)造成舍內(nèi)的溫度下降。

6.4 做好清掃和消毒工作

牛舍要勤打掃，及時將舍內(nèi)的有害物質(zhì)清理出去，尤其是牛的糞便和尿液等，通過及時清理可以減少這些物質(zhì)滋生病原而導(dǎo)致牛舍內(nèi)環(huán)境受到污染。這些污染物清理出去后，要在特定區(qū)域進(jìn)行無害化處理，通常是通過堆肥發(fā)酵的方式進(jìn)行處理，這樣可以將其中的病原微生物通過熱發(fā)酵的方式殺滅。這些處理過的糞污還可以應(yīng)用于農(nóng)田，作為肥料。

養(yǎng)殖場應(yīng)當(dāng)制定科學(xué)的消毒計劃，并能夠按照消毒計劃定期進(jìn)行消毒，在消毒時，要注意做到對養(yǎng)殖場內(nèi)所有區(qū)域都消毒到位，避免出現(xiàn)死角而導(dǎo)致病原長期存在，給牛群造成威脅。消毒液要定期進(jìn)行輪換使用，不能長期應(yīng)用同一種消毒藥物，防止病原對消毒藥物產(chǎn)生耐藥性。

6.5 病牛處理

在養(yǎng)殖場一旦發(fā)生疫病，要立即進(jìn)行隔離診斷，對于確診的病牛，應(yīng)當(dāng)立即進(jìn)行全群撲殺，并對尸體進(jìn)行無害化處理。

7 結(jié)語

牛布魯氏菌病是對養(yǎng)牛業(yè)危害很大的一種傳染病，本病的發(fā)生可以造成養(yǎng)殖場遭受巨大的經(jīng)濟損失，所以在養(yǎng)殖過程中，要注意對本病的防控，把握養(yǎng)殖的每個環(huán)節(jié)，避免出現(xiàn)紕漏而導(dǎo)致疫情的發(fā)生。