肖遠(yuǎn)揚(yáng)，李良學(xué)

（武漢科技大學(xué)附屬普仁醫(yī)院 血管外科，湖北 武漢 430081）

腹主動脈瘤（abdominal aortic aneurysm，AAA）是常見的主動脈慢性炎癥擴(kuò)張性疾病，發(fā)病率和病死率高，未破裂的AAA 無明顯特異性癥狀，而破裂的AAA 是影響中老年人健康的重要因素[1-2]。AAA 發(fā)病機(jī)制與主動脈血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）增殖活性降低、凋亡增加、巨噬細(xì)胞浸潤引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)代謝異常密切相關(guān)[3]。盡管如此，VSMC 增殖和凋亡及主動脈局部炎癥浸潤的復(fù)雜分子調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明[4]。AAA 病變組織中異常表達(dá)的微小RNA（miRNA）與疾病發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)[5-6]。如，miR-194 在人和小鼠腹主動脈瘤模型中低表達(dá)，并通過靶向組蛋白去甲基化酶抑制平滑肌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)降解，對主動脈瘤發(fā)揮保護(hù)作用[7-8]。miR-27b-3p 是最新鑒定的miRNA 分子，文獻(xiàn)[9]報道m(xù)iR-27b-3p 在動脈粥樣硬化斑塊中表達(dá)增加，且可能參與動脈粥樣硬化中巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡。通過大數(shù)據(jù)基因芯片數(shù)據(jù)[10]分析發(fā)現(xiàn)，在AAA 組織和血清中miR-27b-3p 表達(dá)顯著上調(diào)。盡管如此，miR-27b-3p 在主動脈VSMC 中的功能及機(jī)制尚不清楚。基于前人研究基礎(chǔ)，本研究旨在體外VSMC 中探討miR-27b-3p 的功能、對單核巨噬細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的影響和作用機(jī)制，為AAA 的治療提供潛在靶點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

人主動脈VSMC 和人單核巨噬細(xì)胞THP-1 購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物細(xì)胞庫，細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640 購自美國Thermo Fisher 公司。細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM 購 于美國Gibco 公司。pcDNA3.1-PTEN 質(zhì)粒 和陰性對照質(zhì)粒、miR-27b-3p 抑制物（miR-27b-3p inhibitor）和模擬物（miR-27b-3p mimics）購自上海吉瑪生物公司。TRIzol 試劑盒購自美國Invitrogen 公司。LipofectamineTM3000 和反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于日本TaKaRa 公司，ELISA 試劑盒購自美國Sigma Aldrich公司。磷酸酶及張力蛋白同源物（phosphatase and tensin homologue，PTEN）、GAPDH、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1）和基質(zhì)金屬蛋白酶 9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）抗體均由美國Cell Signaling Technology 公司購買。上海碧云天生物技術(shù)有限公司提供BCA 蛋白定量試劑盒、CCK-8 試劑盒。美國Promega 公司購買雙螢光素酶報告基因試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 VSMC 置于DMEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，而THP-1 置于RPMI-1640 培養(yǎng)，均在37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長密度達(dá)到80%時，接種到6 孔板（2×105個/孔）中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞單層密度達(dá)到50%～60%時進(jìn)行轉(zhuǎn)染。將VSMC 或THP-1 分別轉(zhuǎn)染miR-27b-3p 抑制物、miR-27b-3p 模擬物和pcDNA3.1-PTEN。轉(zhuǎn)染后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 細(xì)胞分組 為測定miR-27b-3p 敲低對VSMC增殖、凋亡的影響，將VSMC 分別轉(zhuǎn)染miR-27b-3p抑制物（miR-27b-3p 敲低組）、miR-27b-3p 模擬物（miR-27b-3p 過表達(dá)組）、對照序列（對照組）。為研究miR-27b-3p 敲低對THP-1 培養(yǎng)基中炎癥因子和細(xì)胞基質(zhì)相關(guān)蛋白表達(dá)影響，對THP-1 轉(zhuǎn)染miR-27b-3p 抑制物后，分成miR-27b-3p 敲低組和對照組。為研究miR-27b-3p 靶向PTEN 抑制VSMC 增殖和誘導(dǎo)凋亡，將VSMC 分成對照組、PTEN 過表達(dá)組、miR-27b-3p+PTEN 組（同時上調(diào)miR-27b-3p 和PTEN）。

1.2.3 qRT-PCR 檢測miR-27b-3p 表達(dá)水平 收集各組處理后的細(xì)胞，采用TRIzol 提取細(xì)胞中總RNA，并采用NanoDrop 檢測RNA 濃度。采用一步法反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，嚴(yán)格按照qPCR試劑盒說明書檢測miR-27b-3p 表達(dá)水平，以U6 為內(nèi)參。miR-27b-3p 上游引物為5'-CTG GAG TAT GTG CAA CTA TGC-3'，下游引物為5'-GTG CCG AAG GGT CGG T-3'；U6 上游引物為5'-CTC GCT TCG GCA GCA CAT ATA CT-3'，下游引物為5'-ACG CTT CAC GAA TTT GCG TGT C-3'。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.2.4 Western blot 檢測蛋白表達(dá)水平 收集生長良好VSMC 和THP-1，采用RAPI 裂解液提取細(xì)胞中總蛋白，檢測蛋白質(zhì)濃度。取40 μg 蛋白，采用10% SDS-PAGE 分離蛋白、電轉(zhuǎn)膜法將目的條帶轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上，室溫封閉1 h 后（5%脫脂奶粉），然后分別加入PTEN 一抗（1∶400）、TIMP1一抗（1∶300）、MMP-9 一抗（1∶300）、GAPDH 一抗（1∶500），并孵育過夜（4 ℃），加入山羊抗鼠二抗（1∶800）室溫孵育2 h，ECL 染色，凝膠成像儀采集圖像，通過Image J 分析灰度值。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3 次。

1.2.5 CCK-8 檢測VSMC 增殖活力 將處于對數(shù)生長期經(jīng)miR-27b-3p 轉(zhuǎn)染的VSMC 接種于96 孔板中（2×104個/孔），每孔中加入100 μL DMEM 培養(yǎng)基，置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別在4 個時間點(diǎn)（0、24、48、72、96 h）于每孔中加入CCK-8溶液10 μL，繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中孵育4 h 后，酶標(biāo)儀采集每孔光密度（A450 nm）值。

1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測VSMC 凋亡情況 將處于對數(shù)生長期經(jīng)miR-27b-3p 轉(zhuǎn)染的VSMC 接種于96 孔板中（1×105個/孔）中，培養(yǎng)24 h 后，將細(xì)胞經(jīng)過胰蛋白酶消化并洗滌重懸于300 μL PBS 液體中，分別加 入Annexin V-FITC（10 μ L）和PI 溶液（5 μL），混合均勻后避光孵育5 min，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡百分比。

1.2.7 雙螢光素酶報告基因驗(yàn)證miR-27b-3p 和PTEN 的靶向關(guān)系 構(gòu)建PTEN 基因3'UTR，插入pGL3-Promoter 質(zhì)粒載體中，并命名為pGL3-PTEN-3'UTR WT，基因定點(diǎn)突變獲得PTEN 突變型載體，并命名為pGL3-PTEN-3'UTR MUT。將miR-27b-3p 過表達(dá)序列和對照序列、PTEN 野生型載體、PTEN 突變型載體共轉(zhuǎn)染于HEK 293T 細(xì)胞中，常規(guī)培養(yǎng)36 h，采用雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒檢測螢光素酶活性。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.2.8 ELISA 檢測炎性因子的表達(dá)水平 將經(jīng)轉(zhuǎn)染miR-27b-3p 的THP-1 培養(yǎng)于RPMI-1640 培養(yǎng)基，加入含有50%巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，采集培養(yǎng)上清液，檢測上清液中TNF-α、IL-12、IL-4 和IL-10 濃度，嚴(yán)格按照ELISA 試劑盒說明書操作，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

SPSS 22.0 軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-27b-3p敲低對VSMC增殖和凋亡的影響

qRT-PCR 結(jié)果顯示，miR-27b-3p 敲低可降低VSMC 中miR-27b-3p 表達(dá)水平（4.33±0.44vs.9.25±1.24，P＜0.05），miR-27b-3p 過表達(dá)可增加VSMC 中miR-27b-3p 表達(dá)水平（15.33±1.44vs.9.05±1.08，P＜0.05），提示轉(zhuǎn)染成功，具有較好轉(zhuǎn)染效率（圖1A）。CCK-8 結(jié)果顯示，miR-27b-3p 敲低后A450 nm 值在48、72、96 h 3 個時間點(diǎn)高于對照組（均P＜0.05）（圖1B），流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，miR-27b-3p 敲低后VSMC 凋亡率降低（2.13±0.11%vs.10.58±0.35 %，P＜0.05）（圖1C）。

圖1 miR-27b-3p敲低對VSMC增殖和凋亡的影響 A：轉(zhuǎn)染效率測定；B：CCK-8實(shí)驗(yàn)；C：細(xì)胞凋亡檢測Figure 1 Effects of miR-27b-3p knockdown on proliferation and apoptosis of VSMCs A: Determination of transfection efficiency;B: CCK-8 asaay;C: Apoptosis assay

2.2 miR-27b-3p 敲低對THP-1 培養(yǎng)基中炎癥因子和細(xì)胞基質(zhì)相關(guān)蛋白表達(dá)影響

miR-27b-3p 敲低后，THP-1 培養(yǎng)基中促炎因子（TNF-α、IL-12）表達(dá)水平低于對照組，而THP-1 培養(yǎng)基中抑炎癥因子（IL-4、IL-10）表達(dá)水平高于對照組（均P＜0.01）（表1），上述結(jié)果提示miR-27b-3p敲低可抑制THP-1 相關(guān)炎癥反應(yīng)。Western blot 結(jié)果顯示，miR-27b-3p 敲低后，THP-1 的MMP-9 表達(dá)水平低于對照組，而TIMP-1 表達(dá)水平高于對照組（均P＜0.01）（圖2）。

圖2 TPH-1細(xì)胞中細(xì)胞基質(zhì)相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測 A：Western blot結(jié)果；B：表達(dá)量比較Figure 2 Determination of expression levels of cell matrix-related proteins in TPH-1 cells A: Western blot;B: Comparison of expression levels

表1 miR-27b-3p敲低對THP-1培養(yǎng)基中炎癥因子的影響（）Table 1 Effect of miR-27b-3p knockdown on inflammatory factors in THP-1 cell culture medium ()

表1 miR-27b-3p敲低對THP-1培養(yǎng)基中炎癥因子的影響（）Table 1 Effect of miR-27b-3p knockdown on inflammatory factors in THP-1 cell culture medium ()

2.3 miR-27b-3p直接靶基因?yàn)镻TEN

查閱TargetScan 數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)PTEN 存在和miR-27b-3p 結(jié)合位點(diǎn)，是其潛在的靶基因（圖3A），雙螢光素酶報告基因結(jié)果顯示，同對照組相比，miR-27b-3p 過表達(dá)可明顯減少野生型PTEN 質(zhì)粒螢光素酶活性（P＜0.05），但對突變型PTEN 質(zhì)粒螢光素酶活性幾乎無影響（P＞0.05）（圖3B）。

圖3 miR-27b-3p靶基因分析 A：TargetScan數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)PTEN存在和miR-27b-3p結(jié)合位點(diǎn)；B：雙螢光素酶實(shí)驗(yàn)Figure 3 Analysis of the target gene of miR-27b-3p A: TargetScan database showing the existence of the binding site for PTEN and miR-27b-3p;B: Double luciferase assay

2.4 miR-27b-3p過表達(dá)下調(diào)VSMC中PTEN表達(dá)

Western blot 結(jié)果顯示，miR-27b-3p 過表達(dá)可下調(diào) VSMC 中 PTEN 蛋白表達(dá)水平（P＜0.05）（圖4）。

圖4 miR-27b-3p過表達(dá)對VSMC中PTEN表達(dá)的影響Figure 4 Effect of miR-27b-3p overexpression on PTEN expression in VSMCs

2.5 miR-27b-3p 靶向PTEN 抑制VSMC 增殖并誘導(dǎo)凋亡

CCK-8 結(jié)果顯示，PTEN 過表達(dá)可顯著促進(jìn)VSMC 增殖活力（P＜0.05）；拯救實(shí)驗(yàn)顯示，PTEN和miR-27b-3p 同時過表達(dá)后可減緩由PTEN 過表達(dá)對VSMC 增殖的促進(jìn)作用及對細(xì)胞凋亡的抑制作用（P＜0.05）（圖5）。

圖5 miR-27b-3p與PTEN對VSMC增殖與凋亡的影響 A：CCK-8；B：細(xì)胞凋亡檢測Figure 5 Effects of miR-27b-3p and PTEN on proliferation and apoptosis in VSMCs A: CCK-8;B: Apoptosis assay

2.6 miR-27b-3p 靶向PTEN 下 調(diào)THP-1 炎癥反應(yīng)和細(xì)胞基質(zhì)蛋白表達(dá)

ELISA 結(jié)果顯示，PTEN 過表達(dá)后，與對照組相比，THP-1 培養(yǎng)基中TNF-α、IL-12 表達(dá)水平下調(diào)（P＜0.05），同時IL-4、IL-10 濃度上調(diào)（P＜0.05）；miR-27b-3p 和PTEN 同時過表達(dá)后促炎因子（TNF-α、IL-12）和抗炎因子（IL-4、IL-10）表達(dá)水平與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表2）。Western blot 檢測顯示，PTEN 過表達(dá)可抑制MMP-9蛋白表達(dá)和促進(jìn)TIMP-1 蛋白表達(dá)（P＜0.05），miR-27b-3p 和PTEN 同時過表達(dá)后MMP-9 蛋白和TIMP-1 表達(dá)水平與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（圖6）。

圖6 細(xì)胞基質(zhì)蛋白表達(dá)檢測Figure 6 Determination of cell matrix protein expressions

表2 TPH-1細(xì)胞培養(yǎng)基中炎癥因子水平比較（）Table 2 Comparison of inflammatory factors in TPH-1 cell culture medium ()

表2 TPH-1細(xì)胞培養(yǎng)基中炎癥因子水平比較（）Table 2 Comparison of inflammatory factors in TPH-1 cell culture medium ()

注：1）與對照組比較，P＜0.05Notes：1) P＜0.05 vs.control group

3 討論

AAA 是一種嚴(yán)重危及中老年人健康的大血管擴(kuò)張性疾病，患者常缺乏及時治療導(dǎo)致病死率高，手術(shù)和腔內(nèi)治療是主要治療手段[11-13]。AAA 發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，血流動力學(xué)、血管周圍脂肪組織、外膜成纖維細(xì)胞、血管滋養(yǎng)管重塑、管腔內(nèi)血栓和巨噬細(xì)胞亞型分布異常是其常見發(fā)病機(jī)制[14]。近年來研究[15]顯示miRNA 參與調(diào)控AAA 發(fā)生、發(fā)展過程，可作為AAA 潛在的診斷和監(jiān)測進(jìn)展的分子標(biāo)志物。

本研究首先基于文獻(xiàn)[10]報道在AAA 病變組織中miR-27b-3p 表達(dá)水平上調(diào)，通過在體外培養(yǎng)的VSMC 中敲低miR-27b-3p 后發(fā)現(xiàn)miR-27b-3p 敲低后可增加VSMC 增殖，并抑制其凋亡，可發(fā)揮抑制和延緩AAA 進(jìn)展作用。miR-27b-3p 在心腦血管疾病中發(fā)揮重要作用，缺血性休克患者循環(huán)中表達(dá)水平增加，其高表達(dá)來源于損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，而抑制miR-27b-3p 表達(dá)后血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡比例降低，可作為缺血性休克炎癥和內(nèi)皮細(xì)胞損傷的診斷分子標(biāo)志物[16]。在小鼠心肌纖維化模型中miR-27b-3p 高表達(dá)可促進(jìn)小鼠心肌細(xì)胞纖維化和心肌細(xì)胞凋亡[17]。文獻(xiàn)[18]報道在體外培養(yǎng)的經(jīng)過不同濃度的血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的VSMC 中，其miR-199a-5p 表達(dá)水平顯著上調(diào)，且下調(diào)miR-199a-5p后，VSMC 增殖能力增強(qiáng)，而凋亡比例減少，顯示其延緩AAA 的發(fā)生和進(jìn)展。最新研究[7]顯示miR-194在小鼠的腹主動脈瘤模型中表達(dá)水平顯著下調(diào)，同時上調(diào)miR-194 表達(dá)后可抑制VSMC 增殖和促進(jìn)凋亡，增加小鼠AAA 模型中病變動脈中巨噬細(xì)胞數(shù)目、加重炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激程度，提示其高表達(dá)可促進(jìn)AAA 的發(fā)生和進(jìn)展。文獻(xiàn)[19]報道m(xù)iR-155過表達(dá)可抑制VSMC 增殖并誘導(dǎo)VSMC 凋亡而促進(jìn)動脈瘤的進(jìn)展，上述結(jié)果均提示miRNA 可作為VSMC 增殖和凋亡功能的重要調(diào)節(jié)分子，參與AAA發(fā)生和進(jìn)展。

本研究發(fā)現(xiàn)敲低miR-27b-3p 表達(dá)后，在體外培養(yǎng)THP-1 培養(yǎng)基中，促炎因子（TNF-α、IL-12）表達(dá)水平較對照組降低，而抑炎因子（IL-4、IL-10）表達(dá)水平較對照組增加，提示在THP-1 中敲低miR-27b-3p 后可抑制細(xì)胞炎癥反應(yīng)。文獻(xiàn)[20]報道AAA 發(fā)病機(jī)制與單核巨噬細(xì)胞聚集和慢性炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，局部慢性炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)越嚴(yán)重，越易導(dǎo)致動脈壁內(nèi)血栓形成，越易導(dǎo)致AAA 快速進(jìn)展和破裂。文獻(xiàn)[21]報道m(xù)iR-146 在AAA小鼠模型中高表達(dá)，miR-146 敲低表達(dá)后，THP-1中炎癥反應(yīng)降低，主要表現(xiàn)為促炎因子（TNF-α、IFN-γ）表達(dá)水平降低，而抑炎因子（IL-10）表達(dá)水平增加。在小鼠AAA 模型[22]中，miR-155 敲低表達(dá)后，THP-1 中促炎因子（TNF-α、IL-6 和IL-1β）顯著降低，提示miR-155 可能通過抑制單核巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)減輕和延緩血管緊張素Ⅱ所致的小鼠AAA 的形成和進(jìn)展。本研究通過Western blot 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，敲低miR-27b-3p 表達(dá)后，THP-1 表達(dá)的MMP9 表達(dá)水平降低，而TIMP-1 表達(dá)水平增加，前者在AAA 形成和進(jìn)展中發(fā)揮破壞動脈壁細(xì)胞外基質(zhì)和動脈壁彈力纖維作用，進(jìn)而加速AAA 形成，而后者功能正好相反，對AAA 發(fā)揮保護(hù)作用[23]。

本研究進(jìn)一步探討miR-27b-3p 調(diào)控VSMC 和THP-1 參與AAA 發(fā)生和進(jìn)展機(jī)制，生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)PTEN 是miR-27b-3p 的靶基因，通過雙熒光素報告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)，在VSMC 中miR-27b-3p 過表達(dá)可抑制PTEN 表達(dá)，上述實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-27b-3p 直接調(diào)控PTEN 表達(dá)。PTEN 是常見的抑癌基因，其在多種癌癥中表達(dá)水平降低[24]。文獻(xiàn)[25]報道m(xù)iR-17-5p 可促進(jìn)血管內(nèi)皮前體細(xì)胞增殖，從而加速對動脈瘤血管修復(fù)功能，其分子機(jī)制是miR-17-5p 通過調(diào)節(jié)PTEN/PI3K/AKT/VEGFA 信號通路而實(shí)現(xiàn)。文獻(xiàn)[26]報道對過氧化氫誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞損傷，miR-26a 可通過激活PTEN/AKT/mTOR 信號通路而發(fā)揮抑制作用。文獻(xiàn)[27]報道m(xù)iR-29a-3p 可通過靶向調(diào)節(jié)PTEN 而調(diào)節(jié)AAA 發(fā)生和進(jìn)展。

本研究探討miR-27b-3p 靶向PTEN 后是否可影響VSMC 和THP-1 功能。VSMC 中過表達(dá)PTEN 后細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)、凋亡減少。在THP-1 中過表達(dá)PTEN 后，炎癥嚴(yán)重程度減輕、TIMP-1 表達(dá)增加，而MMP-9 表達(dá)降低，上述結(jié)果均顯示PTEN 表達(dá)增加，可以延緩和抑制AAA 發(fā)生和進(jìn)展。盡管如此，當(dāng)PTEN 和miR-27b-3p 同時過表達(dá)時，PTEN 過表達(dá)對AAA 發(fā)生和進(jìn)展的延緩和抑制作用則可被miR-27b-3p 過表達(dá)所抵消。上述結(jié)果證實(shí)miR-27b-3p靶向PTEN 后影響VSMC 和THP-1 功能而參與AAA發(fā)生和進(jìn)展。文獻(xiàn)[28]報道在小鼠動脈瘤模型中miR-126 高表達(dá)可通過激活PI3K/AKT/mTOR 信號通路抑制VSMC 增殖并促進(jìn)凋亡。文獻(xiàn)[29]報道在小鼠腹主動脈瘤模型中，miR-144-3p 表達(dá)可發(fā)揮啟動子作用，促進(jìn)p21 基因表達(dá)而誘導(dǎo)VSMC 凋亡，抑制其增殖活性和遷移能力，促進(jìn)THP-1 炎癥作用，從而加速AAA 動脈瘤發(fā)生和進(jìn)展。

值得一提的是，由于本研究是基于前人在對組織行基因芯片測序及大數(shù)據(jù)分析得出miR-27b-3p在AAA 組織和血清中miR-27b-3p 表達(dá)顯著上調(diào)，故本研究未在AAA 組織及血清中重復(fù)檢測miR-27b-3p的表達(dá)水平，而直接在前人的基礎(chǔ)上在VSMC 和THP-1 中行功能和機(jī)制研究，不可避免地存在一定的不足，后期值得進(jìn)一步在組織標(biāo)本中驗(yàn)證。另外，miR-27b-3p 在動物實(shí)驗(yàn)中的作用也值得進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)miR-27b-3p 可通過靶向PTEN 參與調(diào)節(jié)VSMC 和THP-1 功能，miR-27b-3p 表達(dá)抑制或PTEN 過表達(dá)均可促進(jìn)VSMC 增殖和抑制凋亡、抑制THP-1 炎癥反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白表達(dá)，可能參與延緩AAA 發(fā)生和進(jìn)展。miR-27b-3p/TPEN 分子軸可能在AAA 發(fā)生和進(jìn)展過程發(fā)揮重要作用，可能成為AAA 潛在治療靶點(diǎn)。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。