張 君，李阿潔

(1.空軍軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,陜西 西安 710038;2.銅川市人民醫(yī)院耳鼻喉科,陜西 銅川 727000)

鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤(Sinus nasal inverted papilloma，SNIP)是臨床比較常見的一種鼻腔腫瘤，這種腫瘤會對周圍結構產生破壞、易侵襲、易復發(fā)，而且癌變發(fā)生率較高[1]。流行病學研究[2]發(fā)現(xiàn)，SNIP發(fā)病多為男性，且多為良性腫瘤，其發(fā)生率約為原發(fā)性鼻腔腫瘤的0.5%～4.0%。國際上將乳頭狀瘤分為蕈狀、柱狀和內翻性三種組織類型，且發(fā)生多與人乳頭狀瘤病毒相關，患者臨床多表現(xiàn)為涕中帶血、流涕、嗅覺減退、頭痛以及鼻塞等。隨著患者腫瘤進一步擴大，臨床分期進展，可累及的部位也逐漸增加，出現(xiàn)對應的體征和癥狀，降低患者生活質量。研究[3]發(fā)現(xiàn)，對SNIP早診斷并確定其發(fā)展情況對于疾病的治療效果及預后具有重要影響。當前對于SNIP分期多采取Krouse的分期理念進行[4]，但此種評價方式需要對患者進行影像學、病理學和生化指標等多項診斷，辨別較為繁瑣。所以，如何找到更準確、便捷的疾病嚴重程度判斷方式，及時明確SNIP診斷和預后判斷成為研究熱點內容。研究[5-6]發(fā)現(xiàn)，結腸癌轉移相關基因1(Metastasis related gene 1 of colon cancer，MACC1)表達可通過提升細胞轉移和遷移能力，促進腫瘤細胞擴散與浸潤。磷酸化需肌醇酶1蛋白(phosphorylated inositol-requiring enzyme 1 protein,p-IRE1)的表達可通過對內質網所產生的損傷，增加內質網折疊障礙，從而促進腫瘤細胞病變過程。因此，為了提升SNIP的診斷分析效能，本研究探討MACC1和p-IRE1在鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤組織中的表達及其與臨床分期的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 篩選我院80例鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤患者，納入時間為2018年1月至2020年1月，均行外科手術治療，在手術過程中取患者瘤組織進行病理診斷，依照不同分期將所有患者分為四組，即T1組(n=18)、T2組(n=23)、T3組(n=25)和T4組(n=14)。病例納入標準：所有患者均采取鼻內鏡下鼻腔鼻竇腫瘤切除術進行治療，且術后病理診斷確診為鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤；Krouse分期為T1～T4期[病灶沒有侵襲鼻竇和鼻腔以外的部分，且無惡變?yōu)門1期；腫瘤發(fā)展到篩竇和竇口竇道鼻道復合體，可能累及鼻腔和上頜竇內側部分，且無惡變?yōu)門2期；腫瘤主要在上頜竇，蝶竇和(或)額竇，同時可能累積鼻腔或篩竇，無惡變?yōu)門3期；腫瘤累及超出鼻竇或鼻腔范圍，例如翼腭窩、顱內或眼眶等，出現(xiàn)惡變?yōu)門4期]；手術前后所有患者均未接受過非甾體抗炎藥物治療和放化療；病例資料完整；對本研究知情并簽署同意書。排除標準：合并鼻咽癌或其他癌癥者；合并嚴重重要器官功能障礙者；不同意進行組織檢查者；年齡>80歲；合并缺氧性疾病者；中途退出或不配合隨訪者。本研究經我院倫理委員會批準。80例鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤患者中男46例，女34例；年齡34～76歲，平均(56.36±6.32)歲。另選取20例同期來我院體檢的健康志愿者鼻腔黏膜組織作為對照組，其中男11例，女9例；年齡35～73歲，平均(55.63±5.27)歲。

1.2 研究方法 取80例患者的鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤組織和對照組志愿者的鼻腔黏膜組織進行切片，應用免疫組織化學染色法檢測組織的MACC1和p-IRE1表達水平，具體方法為：組織切片應用梯度乙醇脫水和二甲苯脫蠟之后，應用枸櫞酸抗原修復液進行抗原熱修復，并放置在體積分數為3%的雙氧水10 min，溫度為37 ℃，將內源性過氧化物酶滅活，并應用PBS進行漂洗3次，每次5 min；應用體積分數為20%的正常羊血清進行室溫孵育，時間為15 min，封閉非特異性抗原，隨后用濾紙將多余封閉液吸取，滴入由博士德生物工程有限公司提供的MACC1和p-IRE1抗體，放置在4 ℃的冰箱內，孵育過夜。將切片放置在PBS中震蕩漂洗3次，每次15 min，注意動作要輕柔。隨后將組織周圍的液體擦干后滴入生物素標記羊抗兔IgG，室溫孵育30 min后進行漂洗，再應用鏈霉素卵白素工作液孵育15 min，再次漂洗，應用H2O2或DAB進行染色，4～10 min后，進行漂洗，隨后封片保存。并在光鏡下進行觀察，光鏡倍數為400倍，其中陽性細胞為棕黃色顆粒，分別計數細胞總數與陽性細胞數，計算MACC1和p-IRE1陽性細胞數的表達率平均值。

對80例鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤患者在治療3年后進行門診復查隨訪，其中包括血液生化檢查、骨掃描，腹部B超、胸部CT、頸部+鼻腔鼻竇MRI、體格檢查來綜合判定患者預后情況，將出現(xiàn)鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤復發(fā)或癌變者分為預后不良組，將其他患者分為預后良好組。收集所有患者一般資料，包括性別、年齡、臨床分期、是否初發(fā)、組織分化程度等。并搜集所有患者鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤組織MACC1和p-IRE1表達水平，具體免疫組化法同上。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計學軟件分析。計數資料以[例(%)]表示，行χ2檢驗；相關性分析采用Spearman相關系數；采用Logistic回歸分析單因素指標與預后的關系；P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者一般資料及MACC1和p-IRE1表達情況對比 預后良好組與預后不良組患者性別、年齡、是否初發(fā)情況對比無統(tǒng)計學差異(均P>0.05)，兩組患者臨床分期、組織分化程度、MACC1和p-IRE1陽性情況對比有統(tǒng)計學差異(均P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者一般資料與臨床指標對比[例(%)]

2.2 不同臨床分期患者MACC1和p-IRE1表達情況對比 不同臨床分期患者MACC1和p-IRE1組織表達情況對比差異有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，T4組明顯高于T3組、T2組、T1組和對照組(均P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床分期患者MACC1和p-IRE1表達情況對比(例)

2.3 MACC1和p-IRE1表達情況與臨床分期的相關性 Spearman相關分析結果顯示MACC1和p-IRE1與鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤臨床分期呈正相關(r=0.423、0.539，均P<0.05)，見表3。

表3 MACC1和p-IRE1表達情況與臨床分期的相關性

2.4 鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤組織MACC1和p-IRE1表達對患者預后的預測價值 經Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)：MACC1和p-IRE1為鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤的預后獨立因素(均P<0.05)，見表4。

表4 鼻腔鼻竇內翻性乳頭狀瘤組織MACC1和p-IRE1表達對患者預后的預測價值

3 討 論

SNIP的主要特點為局部侵襲強、術后復發(fā)率高，因此很容易發(fā)展為鱗狀細胞癌，危險性較高，臨床診斷較為復雜。SNIP雖然屬于良性上皮源性腫瘤，但它特有的生物學行為特征使多數學者認為其屬于交界性腫瘤的一種，臨床治療原則為徹底切除腫瘤，所以多以手術治療為主，但術后復發(fā)率較高，因此早期診斷與預測SNIP的預后成為臨床研究熱點[7-9]。隨著SNIP組織內蛋白檢測發(fā)展，越來越多學者認為，通過SNIP組織內相關基因和蛋白的檢測對于SNIP診斷與預后預測具有重要價值。其中MACC1位于人7號染色體上，由2個羥基、SH3及ZU5結構組成，其中MACC1總的2個羥基結構內的酪氨酸殘基會出現(xiàn)DNA損失，隨后導致殘基出現(xiàn)磷酸化，促使信號傳導通路呈現(xiàn)級聯(lián)酶促反應，造成細胞無限制分裂，最終腫瘤細胞轉移和侵襲。研究[10-12]發(fā)現(xiàn)，正常組織中MACC1蛋白多為低表達或不表達，而在肺癌、胃癌、肝癌等多種惡性實體腫瘤呈現(xiàn)出高表達狀態(tài)，且腫瘤遷移發(fā)生率較高。IRE1是一種蘇氨酸或絲氨酸蛋白酶，可感受未折疊蛋白和錯誤折疊蛋白內質網管蓄積情況，進而改變相應激酶結構，隨后磷酸化導致p-IRE1的增加，發(fā)生下游生物學效應。研究[13-14]發(fā)現(xiàn)，IRE1在乳腺癌、宮頸癌等組織表達過高，且與臨床分期存在一定相關性。因此，本研究主要分析MACC1和p-IRE1在SNIP組織中的表達及其與臨床分期的關系，希望能夠為SNIP的診斷與治療提供參考。

本研究結果表明，不同臨床分期患者MACC1和p-IRE1組織表達水平對比差異有統(tǒng)計學意義，T4組明顯高于T3組、T2組、T1組和對照組，由此證明，SNIP臨床分期越高，疾病越嚴重，則MACC1和p-IRE1陽性表達率越高，與張貴等[15]研究相似。張貴等[15]研究發(fā)現(xiàn)，MACC1和p-IRE1水平與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展存在一定關系。這主要是因為，MACC1可通過對腫瘤細胞生物學特征所產生的影響來提升腫瘤細胞變形能力，從而促進腫瘤細胞對于鄰近的鼻黏膜組織產生浸潤。另外，MACC1上升還能夠導致細胞間質成分分解，從而為腫瘤細胞轉移提供有利條件。p-IRE1屬于磷酸化需醇激酶的一種，可通過對內質網折疊錯誤產生影響的同時，導致機體腫瘤細胞內核轉錄基因NF-κB激活，促使腫瘤細胞DNA出現(xiàn)持續(xù)性增殖的過程[16]。Spearman相關分析結果顯示MACC1和p-IRE1與SNIP臨床分期呈正相關。提示MACC1和p-IRE1組織表達水平越高，SNIP臨床分期越高。Lin等[17]研究發(fā)現(xiàn)，MACC1基因多態(tài)性與肝細胞癌的臨床分期呈正相關。Kobelt等[18]研究發(fā)現(xiàn)，新確定的MEK-1酪氨酸磷酸化靶點MACC1可通過批準的MEK-1抑制劑進行藥物治療，以限制結直腸癌轉移，與本研究結果相符。另外，童晶濤等[19]也研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌癌組織中需肌醇酶1蛋白表達水平與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展呈明顯相關性。本研究預后良好組與預后不良組患者性別、年齡、是否初發(fā)情況對比差異無統(tǒng)計學意義，兩組患者臨床分期、組織分化程度、MACC1和p-IRE1陽性情況對比差異有統(tǒng)計學意義；經Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)：MACC1和p-IRE1為SNIP的預后獨立因素。因此，臨床可考慮應用MACC1和p-IRE1表達水平來對SNIP的預后進行預測。這主要是因為，MACC1表達上升能夠提升腫瘤細胞轉移能力，促進腫瘤細胞擴散，而p-IRE1上升會提升NF-κB激活程度，促進下游核轉錄因子激活，促進腫瘤細胞增殖[20]。

綜上所述，SNIP組織中MACC1和p-IRE1陽性表達率明顯高于健康鼻腔黏膜組織，且MACC1和p-IRE1表達水平與SNIP的臨床分期呈正相關。另外，可通過MACC1和p-IRE1陽性表達來預測SNIP患者的預后情況，且MACC1和p-IRE1為SNIP的預后獨立因素。