楊 迪 張 翼 張衛(wèi)紅

骨肉瘤屬于一類來源于間葉組織的惡性腫瘤，早期階段患者臨床癥狀不明顯，但是此類疾病惡性程度高，盡早進(jìn)行診斷，可以有效提高患者生存率?；诜肿铀?，探討骨肉瘤疾病的發(fā)生機(jī)制，積極尋找早期診斷生物指標(biāo)，屬于目前研究熱點(diǎn)之一。骨肉瘤疾病的發(fā)病機(jī)制尚且無確切說明，但是大部分研究學(xué)者表示其與多基因作用有關(guān)。轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1(TfR1)屬于一類細(xì)胞膜相關(guān)糖蛋白，主要功能為參與細(xì)胞內(nèi)鐵的攝取過程，尤其在鐵代謝過程中具有重要作用。鐵元素可參與機(jī)體DNA合成、氧運(yùn)送等過程，說明鐵元素在細(xì)胞代謝等過程具有重要作用。正常生理情況下，TfR1主要介導(dǎo)內(nèi)吞作用完成鐵元素的攝取。相關(guān)研究稱，TfR1蛋白在多種腫瘤疾病中均存在表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象，如宮頸癌[1]、子宮內(nèi)膜癌[2]、膠質(zhì)瘤[3]等。研究證實(shí)[4]，鐵螯合劑可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長，表明TfR1屬于鐵代謝中重要蛋白之一，且與腫瘤進(jìn)展有關(guān)。血管生成在腫瘤疾病發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)屬于血管生產(chǎn)關(guān)鍵刺激因子，研究發(fā)現(xiàn)[5]，腫瘤發(fā)生和發(fā)展中，VEGF過表達(dá)尤其重要，且進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)骨肉瘤患者預(yù)后差與VEGF高表達(dá)存在關(guān)系。腎上腺髓質(zhì)素(ADM)具有血管舒張效應(yīng)。近年來，有研究顯示[6]，ADM具有促血管生成作用，另外也有研究報(bào)道[7]，ADM具有促進(jìn)腫瘤生長的作用。ADM在前列腺癌、乳腺癌等疾病中均存在高表達(dá)，但在骨肉瘤疾病中的研究較少。本次研究主要探討ADM、TfR1、VEGF在骨肉瘤組織中的表達(dá)及與預(yù)后關(guān)系，明確其是否可作為預(yù)測預(yù)后指標(biāo)，內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月至2019年10月在我院就診的骨肉瘤患者60例，所有患者均同意手術(shù)治療。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合骨肉瘤疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均經(jīng)過病理證實(shí)為骨肉瘤；②手術(shù)治療前均無其他抗腫瘤治療史，如放化療及免疫抑制劑治療等；③入院資料均完整；④具有石蠟標(biāo)本。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他惡性腫瘤疾病史者；②手術(shù)治療期間死亡者；③心、肺等重要臟器功能不全；④合并自身免疫系統(tǒng)類疾病者。

60例骨肉瘤患者中男性22例，女性38例，平均年齡(15.9±2.6)歲，平均腫瘤大小(5.81±1.02)cm，組織分化：高分化51例、中低分化9例，轉(zhuǎn)移22例，Enneking分期：低度危險(xiǎn)44例、高度危險(xiǎn)16例。

1.2 免疫組織化學(xué)染色法

手術(shù)中獲取癌組織及癌旁組織，予以適量的4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，厚度為4 μm即可，再予以適量的PBS溶液修復(fù)抗原，再予以DAB溶液顯色，蘇木精溶液復(fù)染，將蛋白表達(dá)為陽性切片作為陽性對照組，將僅含有PBS溶液的切片作為陰性對照組，脫水、透明及顯微鏡觀察。

結(jié)果判定：主要依據(jù)細(xì)胞染色百分比及染色的強(qiáng)度評分。①細(xì)胞染色的評分：0分表示染色細(xì)胞百分比<1%；1分表示染色細(xì)胞百分比為1%～25%；2分表示染色細(xì)胞百分比為25%～50%；3分表示染色細(xì)胞百分比為51%～80%；4分表示染色細(xì)胞百分比為>80%。②細(xì)胞染色的強(qiáng)度：0分表示無染色標(biāo)記；1分表示淡黃色標(biāo)記；2分表示棕黃色染色標(biāo)記；3分表示棕褐色染色標(biāo)記。最終評分為細(xì)胞染色的評分與細(xì)胞染色的強(qiáng)度評分乘積，0～3分表示低表達(dá)；4～7分表示中表達(dá)；>7分表示高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

SPSS25.0軟件統(tǒng)計(jì)整理，ADM、TfR1、VEGF蛋白陽性表達(dá)率均以%表示，組間比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示組間存在意義。Pearson相關(guān)性分析ADM、TfR1、VEGF蛋白表達(dá)的關(guān)系，并進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)；Kaplan-Meier法分析患者累積生存率。

2 結(jié)果

2.1 ADM、TfR1、VEGF在骨肉瘤組織中的表達(dá)

癌組織ADM、TfR1、VEGF表達(dá)(78.33%、73.33%、76.67%)均顯著高于癌旁組織，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=48.348、34.286、51.400，P均<0.05)。見表1。

表1 ADM、TfR1、VEGF在骨肉瘤組織中的表達(dá)(例，%)

2.2 骨肉瘤組織中ADM、TfR1、VEGF中高表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

骨肉瘤組織中ADM、TfR1、VEGF表達(dá)均與組織分化、是否轉(zhuǎn)移以及Enneking分期有關(guān)(P<0.05)，但與性別、腫瘤大小均無關(guān)(P>0.05)。見表2。

表2 骨肉瘤組織中ADM、TfR1、VEGF中高表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例，%)

2.3 骨肉瘤組織中ADM、TfR1、VEGF表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系

ADM、TfR1、VEGF中高表達(dá)組患者2年累積存活率均顯著低于低表達(dá)組(P<0.05)。見圖1、圖2、圖3。

圖1 ADM表達(dá)與骨肉瘤患者預(yù)后

圖2 TfR1表達(dá)與骨肉瘤患者預(yù)后

圖3 VEGF表達(dá)與骨肉瘤患者預(yù)后

2.4 骨肉瘤組織中ADM、TfR1、VEGF表達(dá)的相關(guān)性

ADM蛋白表達(dá)分別與TfR1、VEGF蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.621，γ=0.553，P均<0.05)，TfR1蛋白表達(dá)與VEGF蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.671，P<0.05)。見表3。

表3 骨肉瘤組織中ADM、TfR1、VEGF表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

TfR1在多種腫瘤疾病中均存在高表達(dá)，如結(jié)腸癌[8]、胰腺癌[9]、淋巴瘤[10]等。與正常細(xì)胞比較，TfR1表達(dá)較高的細(xì)胞鐵吸收率更高。大多數(shù)研究均表示，TfR1因子表達(dá)可預(yù)測患者預(yù)后，如翟勇等的研究中[11]，TfR1表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后有關(guān)，且其高表達(dá)患者中預(yù)后恢復(fù)更差。而本次研究結(jié)果也表明，TfR1在骨肉瘤癌組織內(nèi)的表達(dá)明顯上調(diào)，與目前研究報(bào)道結(jié)果具有一致性，提示TfR1在骨肉瘤疾病發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用。同時(shí)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，TfR1表達(dá)與組織分化、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、以及Enneking分期存在關(guān)系，且存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、組織分化程度低及Enneking分期高的組織中表達(dá)明顯更高，說明TfR1可參與骨肉瘤疾病進(jìn)展、侵襲及遷移等過程。觀察TfR1低表達(dá)組與中高表達(dá)組比較，低表達(dá)組生存率顯著更高，說明通過檢測TfR1表達(dá)，可以檢測患者預(yù)后恢復(fù)情況。

VEGF屬于特異性高的促血管內(nèi)皮生長的因子，其表達(dá)水平是檢測血管生成疾病的重要指標(biāo)。研究稱[12]，腫瘤血管生成是多種腫瘤患者預(yù)后因素，VEGF可以通過誘導(dǎo)血管生成，進(jìn)而參與細(xì)胞侵襲、增殖等多種生物學(xué)行為。另外研究報(bào)道[13]，VEGF與骨肉瘤分化程度、組織分化及腫瘤分期存在關(guān)系。而本次研究結(jié)果顯示，VEGF也與組織分化、是否轉(zhuǎn)移以及Enneking分期有關(guān)，與本次研究具有一致性。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤癌組織中VEGF表達(dá)較高，且高表達(dá)骨肉瘤患者預(yù)后較差，此項(xiàng)研究進(jìn)一步表明VEGF與骨肉瘤進(jìn)展、侵襲以及轉(zhuǎn)移等有關(guān)。

多項(xiàng)研究表明，ADM參與多種腫瘤疾病，如Zhang等的研究[14]，與正常人群比較，骨肉瘤患者ADM水平明顯更高。另外Li等的研究顯示[15]，卵巢上皮癌患者臨床病理參數(shù)如臨床分期與ADM表達(dá)有關(guān)，且分期越晚，ADM表達(dá)越高。又如Bozkurt等研究稱[16]，ADM表達(dá)與組織分化有關(guān)，且分化程度高，ADM表達(dá)越低。而本次研究結(jié)果也顯示，ADM在骨肉瘤癌組織表達(dá)更高，且與分化程度、組織分化及腫瘤分期有關(guān)，與目前研究報(bào)道一致。ADM表達(dá)越高，預(yù)后越差，表明ADM也參與骨肉瘤進(jìn)展，且可能在其轉(zhuǎn)移及生長過程中具有重要作用。相關(guān)性分析顯示，ADM、TfR1、VEGF之間均存在正相關(guān)性，說明三者均可能在骨肉瘤疾病中存在協(xié)同作用。

綜上所述，ADM、TfR1、VEGF在骨肉瘤組織中陽性表達(dá)率較高，且與骨肉瘤患者預(yù)后有關(guān)，通過檢測上述指標(biāo)可以預(yù)測患者預(yù)后，同時(shí)也可作為此類疾病治療靶點(diǎn)。