一例雞球蟲病的診斷與防治

●羅世民（懷化職業(yè)技術(shù)學(xué)院 湖南 懷化 418000）

雞球蟲病是由幾種艾美耳屬球蟲寄生于雞腸道上皮細(xì)胞所引起的一種常見的烈性原蟲病[1]，是在雞養(yǎng)殖過程中最為常見且危害十分嚴(yán)重的寄生蟲病。病雞感染該病后，往往出現(xiàn)羽毛臟亂、肉髯蒼白、食欲不振、下痢、血便及體重減輕等一系列臨床癥狀，嚴(yán)重感染則會(huì)導(dǎo)致死亡[2]。各個(gè)品種及日齡段的雞均易感，但主要危害雛雞，成年雞對(duì)球蟲有一定的抵抗力。15～50日齡的雛雞發(fā)病率最高，死亡率可高達(dá)80%以上[2-3]，給養(yǎng)殖戶造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。成年雞感染后不出現(xiàn)明顯的病理癥狀，但出現(xiàn)生長(zhǎng)發(fā)育受阻和生產(chǎn)性能下降等情況[4]，常被養(yǎng)殖戶忽視而成為傳染源。

患病雞為主要的傳播源，其他被糞便污染過的器物均可成為傳染源。例如，被帶有雞球蟲卵囊的糞便污染的飼料、鞋子、衣服、飲水、土壤及器具均可傳播雞球蟲病，某些昆蟲也可成為該病的傳播媒介。然而，雞球蟲的孢子化卵囊對(duì)常用消毒劑和外界環(huán)境具有極強(qiáng)的抵抗力，一般常用的消毒劑不能使其失活，其可在土壤中存活4～9 個(gè)月而不失感染力，如在樹蔭遮蔽的地方可存活15～18 個(gè)月。溫度對(duì)雞球蟲的孢子化卵囊影響很大，如環(huán)境溫度超過36℃，孢子化率大幅下降；如超過40℃，雞球蟲孢子化卵囊停止發(fā)育；在65℃環(huán)境下，孢子化卵囊只能存活幾秒鐘。此外，環(huán)境濕度對(duì)孢子化卵囊生長(zhǎng)發(fā)育也影響較大，雞球蟲的孢子化卵囊不耐干燥，曾有學(xué)者將雞球蟲的孢子化卵囊于干燥、室溫的環(huán)境下放置1 d，雞球蟲則失去孢子化能力，喪失全部感染力，潮濕、多雨且氣溫較高的夏季是雞球蟲病的暴發(fā)期，尤其是梅雨季節(jié)。雞球蟲病的傳播途徑為消化道傳播，故而飼養(yǎng)管理?xiàng)l件差，雞舍潮濕、擁擠、不通風(fēng)，易誘發(fā)該病的發(fā)生，且根據(jù)雞球蟲的生物屬性，雞場(chǎng)一旦發(fā)生雞球蟲病很難徹底根治。

雞球蟲病對(duì)雞影響巨大，一旦感染，病愈后也會(huì)造成雞后期生長(zhǎng)緩慢，產(chǎn)蛋率下降[1]，還能誘發(fā)其他疾病[5]。

1 發(fā)病情況

2017年6月17日，湖南婁底市新化縣某養(yǎng)殖戶（飼養(yǎng)規(guī)模為2000 羽）反映在其所飼養(yǎng)的雞群中出現(xiàn)異常狀況。大部分雛雞表現(xiàn)出如羽毛蓬松、臟亂、精神萎頓、閉眼縮頸、雞冠、臉及肉髯蒼白、食欲不振或廢絕、頻頻拉血痢及體重漸行性消瘦等臨床癥狀。一部分成年雞也出現(xiàn)腹瀉、體重減輕、產(chǎn)蛋量下降等臨床癥狀。該養(yǎng)殖戶曾使用阿莫西林、恩諾沙星等抗生素對(duì)病雞進(jìn)行治療，但病情未得好轉(zhuǎn)和控制，反而愈加嚴(yán)重。

2 臨床癥狀

大部分發(fā)病的雛雞表現(xiàn)出羽毛蓬松、無光澤且臟亂，精神沉郁或萎頓，閉眼縮頸，喜堆積在一起，不愿運(yùn)動(dòng)，頭低垂，食欲不振或廢絕，嗉囊充滿酸臭味液體，倒提可從口中流出，雞冠、眼瞼及肉髯蒼白，下痢帶血及漸行性消瘦等癥狀，且多于排出胡蘿卜色糞便后的1～2 d內(nèi)死亡。成年雞無明顯的病理癥狀，主要表現(xiàn)出輕度腹瀉、體重減輕、停止產(chǎn)蛋等癥狀。

3 剖解及病理變化

隨機(jī)挑選1 只瀕臨死亡的病雞進(jìn)行解剖。通過臨床檢查發(fā)現(xiàn)，病雞體格消瘦、羽毛蓬松、雜亂且無光澤、肛門附近的羽毛有糞便附著。盲腸明顯腫大，為正常的3～5 倍，外觀呈棕紅色或暗紅色，質(zhì)地比正常堅(jiān)實(shí)，腔內(nèi)充滿含暗紅色血液的內(nèi)容物。剖解盲腸，可見盲腸內(nèi)充滿血凝塊等壞死物，腸黏膜有彌漫性出血點(diǎn)，一些部位的黏膜發(fā)生嚴(yán)重糜爛和脫落。部分小腸黏膜上附有一層黃綠色假膜，后段腸管的腸黏膜增厚，內(nèi)含大量黏液，充滿氣體。

4 診斷

4.1 初步診斷

根據(jù)臨床癥狀、養(yǎng)殖戶用藥情況及在顯微鏡下觀察到的卵囊形狀，初步診斷為雞球蟲病。

4.2 分子生物學(xué)診斷

收集新鮮的糞便和腸內(nèi)容物于自封袋中，置于冰盒內(nèi)，拿回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)。用糞便基因組DNA 提取試劑盒（購自北京天根生化科技有限公司）提取糞便中的總DNA；將提取的DNA 樣品置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

利用雞球蟲ITS-2 的引物ITS-2-F（5'-ACGT CTGTTTCAGTGTCT-3'），ITS-2-R（5'-AAAT-TCA GCGGGTAACCTCG-3'）[6]，分別對(duì)糞便及腸內(nèi)容物DNA 的ITS-2 區(qū)域部分序列進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)體系為50 μL：高保真酶（Mix）25 μL；ddH2O 22 μL；DNA 模板1 μL；上游引物，1 μL；下游引物，1 μL。反應(yīng)條件：95℃（預(yù)熱）5 min；95℃（變性）30 s，53℃（退火）30 s，72℃（延伸）1 min，共35 個(gè)循環(huán)；最后72℃（延伸）5 min。反應(yīng)完全后，吸取5 μL PCR 產(chǎn)物在1·5%瓊脂糖上進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果均為陽性。將PCR 產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，獲得ITS-2 區(qū)域的部分序列。

將獲得序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示兩者ITS-2序列的相似度為100%。將序列在GenBank 上進(jìn)行BLAST 搜索分析，發(fā)現(xiàn)所獲得的序列與已公布的艾美耳球蟲的ITS-2 序列的相似度為99%～100%，從而確定該病原體為艾美耳球蟲，由此確診雞艾美耳球蟲病。

5 治療

根據(jù)分子生物學(xué)技術(shù)診斷結(jié)果，對(duì)病雞和健康雞群采用氨丙啉、磺胺間二甲氧嘧啶等藥物聯(lián)合用藥進(jìn)行治療。首先，使用氨丙啉拌料飼喂，對(duì)雞群進(jìn)行預(yù)防性驅(qū)蟲和治療，用量為240 mg/kg，1 次/d，連喂7 d[7]；同時(shí)，使用磺胺間二甲氧嘧啶拌料飼喂，以防繼發(fā)性感染，用量為600 mg/kg，連喂3 d，停藥2 d，再連喂3 d[8]。此外，于雞群的飲水中適量添加維生素A 和維生素K，以增強(qiáng)雞的抗病力[9]。1 周后，該養(yǎng)殖場(chǎng)的病情基本得到控制。

6 預(yù)防措施

6.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖戶在平時(shí)的飼養(yǎng)過程中，應(yīng)當(dāng)注重飼料的搭配，使其營(yíng)養(yǎng)均衡；可在飼料中適量添加一定量的維生素和礦物質(zhì)，提高雞的抗病能力。

6.2 改善養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的衛(wèi)生條件

及時(shí)清掃雞舍衛(wèi)生，及時(shí)更換墊料，確保雞舍的地面常處于干燥狀態(tài)，并保持良好通風(fēng)。對(duì)雞排出的糞要置于偏僻處進(jìn)行堆積發(fā)酵[10]。此外，要合理控制雞群的飼養(yǎng)密度，以防止飼養(yǎng)數(shù)量過多，造成擁擠。

6.3 定期消毒

對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的雞籠、料槽、飲水器等器具設(shè)施定期消毒。使用開水或熱堿水對(duì)地面進(jìn)行消毒。同時(shí)，要求工作人員在工作前更換衣物和鞋帽，并經(jīng)消毒后方可開始工作。養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)行封閉式管理，禁止外來人員進(jìn)入，車輛進(jìn)出養(yǎng)殖場(chǎng)必須消毒，從而切斷球蟲的傳播途徑，使發(fā)病率降到最低。

6.4 藥物預(yù)防

在充分了解雞場(chǎng)發(fā)病規(guī)律的基礎(chǔ)上，于球蟲病高發(fā)期之前，使用藥物對(duì)雞球蟲病進(jìn)行預(yù)防。不同時(shí)期輪換藥物或聯(lián)合使用2 種以上藥物進(jìn)行預(yù)防，以避免球蟲產(chǎn)生耐藥性。此外，一旦發(fā)現(xiàn)病雞立即隔離、治療。

6.5 接種疫苗

接種疫苗是一種有效的預(yù)防球蟲病的措施，在雞群免疫前后禁止添加抗球蟲藥物，以免影響疫苗的免疫效果[11]。

7 總結(jié)

雞球蟲病是由幾種艾美耳屬球蟲寄生于雞腸道上皮細(xì)胞所引起的一種常見的烈性原蟲病。該病主要危害雛雞，15～50日齡的雛雞發(fā)病率最高，死亡率可高達(dá)80%以上。成年雞感染后不表現(xiàn)明顯的病理癥狀，而且病雞所表現(xiàn)出來的癥狀也類似于大腸桿菌病或其他細(xì)菌病，極容易誤診。傳統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)操作過于繁瑣，造成診治極為不便，利用分子技術(shù)檢測(cè)不僅克服了傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)的缺陷，同時(shí)也提高了檢測(cè)結(jié)果的精確性，為養(yǎng)殖戶對(duì)該病的診斷和治療提供了便捷有效的途徑。