二級生物安全實驗室風險排查探討★

馬慧娟，牛鵬飛，肖 云，朱成晶

（江蘇省生產(chǎn)力促進中心（江蘇省理化測試中心），江蘇 南京 210042）

0 引言

二級生物安全實驗室是基礎(chǔ)實驗室，在該安全級別的實驗室操作的微生物不會對健康成人、動物和環(huán)境造成嚴重危害。為做好安全管理，應(yīng)對二級生物安全實驗室進行風險評估，風險評估是指在風險事故發(fā)生之前，運用各種方法系統(tǒng)地、連續(xù)地認識所面臨的各種風險以及分析風險事故發(fā)生的潛在原因。GB 19489—2008 就對實驗室需要建立相應(yīng)的風險評估、危險識別等措施進行規(guī)定[1]，雖然國家在生物安全風險評估管理方面的有關(guān)法律、法規(guī)和技術(shù)標準很多，但是實驗室管理人員或者實驗室使用人員中真正掌握和了解這些資料的卻很少。目前我國二級生物安全實驗室設(shè)立單位內(nèi)仍缺乏相關(guān)的安全管理人員對實驗室開展風險識別，開展區(qū)域生物安全風險評估的更少，醫(yī)療機構(gòu)、科研院所、高校檢測機構(gòu)中的工作或管理人員，對于實驗室開展風險評估的相應(yīng)經(jīng)歷和經(jīng)驗十分有限，很大程度上難以完成機構(gòu)風險排查這項工作[2]。針對工作人員在實驗室風險評估或風險排查實際過程中存在的問題和困難，本文通過收集和整理生物安全領(lǐng)域的相關(guān)法律法規(guī)、國家標準以及相關(guān)技術(shù)規(guī)范，對國內(nèi)外有風險評估經(jīng)歷和經(jīng)驗的機構(gòu)的風險評估內(nèi)容進行總結(jié)，初步建立了一套標準化的生物安全實驗室生物安全風險評估體系，對于病原微生物實驗室設(shè)立單位開展生物安全風險評估工作有重要的參考意義，同時也便于設(shè)立病原微生物實驗室的單位根據(jù)需要風險排查的幾個方面進行自查，以便提高自身的生物安全管理水平。

根據(jù)國家對二級生物安全實驗室的法律、規(guī)范、標準等相關(guān)要求，本文一共設(shè)置了9 個生物安全風險評估方面的相關(guān)指標，包括組織管理體系建立和實施、人員管理、實驗室備案、實驗室環(huán)境和設(shè)施設(shè)備、實驗活動管理、菌（毒）種和生物樣本管理、實驗廢棄物處置、實驗活動生物安全風險評估、應(yīng)急預(yù)案和應(yīng)急設(shè)施。

1 組織管理體系建立和實施

二級生物安全實驗室的建設(shè)規(guī)范合理是實驗室安全的基礎(chǔ)，同時實驗室的防護設(shè)備的配置也要符合足量的要求，生物安全管理體系的建立是否完善適用也對實驗室的安全管理起到了重要的作用。生物安全體系文件主要包括管理手冊、程序文件、標準操作規(guī)程和各種操作記錄，在組織管理排查中，應(yīng)關(guān)注以下幾點：一是單位是否成立生物安全委員會并發(fā)文通告；二是單位法定代表人或分管領(lǐng)導(dǎo)是否為生物安全委員會負責人；三是生物安全委員會人員配備（應(yīng)包括所有相關(guān)科所負責人）是否合理；四是單位是否落實生物安全具體責任部門和管理責任人；五是單位是否建立生物安全管理體系；六是生物安全管理體系是否包括生物安全管理手冊、程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書（操作規(guī)程）和快速閱讀的實驗室安全手冊、各類記錄表格4 個層次；七是生物安全管理體系管理要素是否完善，程序文件和作業(yè)指導(dǎo)書是否滿足實際工作需要。

2 人員管理

病原微生物檢測的檢測過程、結(jié)果判斷幾乎全部是人為操作，對檢測人員的人員素質(zhì)要求很高，在日常標準的執(zhí)行和檢測操作過程等方面，人員在理論知識方面缺乏和操作經(jīng)驗方面的不足，都會影響到實驗室的檢測結(jié)果。微生物實驗室工作人員在日常管理中，一是要定期做好對人員的監(jiān)督，對于實驗室中的檢測指標，應(yīng)分新人和舊人對指標檢測的全過程，如：標準的理解、檢測過程、結(jié)果判斷、原始記錄的書寫等進行監(jiān)督，如發(fā)現(xiàn)有掌握不足和不準確的地方應(yīng)及時采取糾正措施；二是要定期做好人員的系統(tǒng)培訓(xùn)，每年年初應(yīng)制定實驗室人員的內(nèi)部培訓(xùn)和外部培訓(xùn)計劃并按計劃實施，標準體系和生物安全管理體系隨著時間的變化在不斷完善，如果一直沿襲傳統(tǒng)的檢測或運行方式，就難以滿足實際的需求，甚至發(fā)生嚴重的質(zhì)量事故，給實驗室整體工作帶來極大危害；三是要每年做好人員崗位符合性評價，應(yīng)定期對實驗室的技術(shù)人員對應(yīng)所在的崗位職責和所從事的工作內(nèi)容進行符合性評價，一旦發(fā)現(xiàn)人員不能勝任，應(yīng)及時調(diào)整工作崗位。

在人員管理排查中，應(yīng)重點關(guān)注：一是各類記錄信息是否可追溯；二是法定代表人、實驗室負責人、關(guān)鍵管理崗位代理人、生物安全監(jiān)督員、檢驗人員和維保人員等職責是否明確；三是檢驗人員數(shù)量是否滿足開展實驗活動的需要；四是高致病性病原微生物實驗室活動是否做到2 人及2 人以上同時操作；五是對進入實驗室操作的檢驗人員是否經(jīng)授權(quán)上崗或?qū)徟?；六是檢驗人員是否有生物安全上崗證；七是壓力蒸汽滅菌器操作人員（必要時）等是否具有專業(yè)上崗證；八是單位或科所是否每年組織相關(guān)人員（采樣、檢驗、維保、實習(xí)、進修人員等）進行生物安全培訓(xùn)；九是是否建立實驗人員（包括檢驗人員、洗消人員、廢棄物處置人員以及其他維保人員等）健康檔案（包括與崗位相關(guān)的體檢項目、本底血清或特定病原的免疫功能相關(guān)記錄、必要的免疫接種資料等）并進行健康監(jiān)護（定期體檢、開展免疫接種等）；十是管理人員和檢驗人員是否簽訂了安全承諾書或安全責任書；十一是檢測人員是否簽署必要的知情同意書。

3 實驗室備案

《中華人民共和國生物安全法》第五章第四十四條規(guī)定：“設(shè)立病原微生物實驗室，應(yīng)當依法取得批準或者進行備案”。在進行實驗室風險排查時，應(yīng)對實驗室是否在相應(yīng)屬地的衛(wèi)健委備案進行風險排查：一是生物安全實驗室是否按照不同區(qū)域（核心區(qū)或準備區(qū)等）、不同級別（一至四級生物安全實驗室）、不同功能（病原微生物實驗室或?qū)嶒瀯游飳嶒炇遥┤鐚嵾M行備案；二是法定代表人、實驗室負責人、生物安全負責人、檢驗人員、安全人員、實驗活動（新增病原微生物檢測項目）、生物安全設(shè)施設(shè)備新增或計量等相關(guān)信息變化時是否在一個月內(nèi)完成備案更新；三是高致病性實驗活動是否每半年及時上報。

4 實驗環(huán)境和設(shè)施設(shè)備

二級生物安全實驗室的建設(shè)應(yīng)符合GB 19489 的規(guī)定，實驗室的設(shè)置應(yīng)符合無回路的原則，同時人流物流分開，確保在時間和空間上有效隔離各種日常工作和檢測活動。實驗室的通風過濾系統(tǒng)應(yīng)符合恒溫恒濕要求，且實驗室內(nèi)空氣應(yīng)經(jīng)過初、中、高效過濾器的過濾以符合實驗室內(nèi)塵埃粒子、沉降菌等的要求。實驗室內(nèi)溫度應(yīng)符合18～26 ℃，濕度符合30%～70%，應(yīng)定期進行實驗室內(nèi)核心工作區(qū)沉降菌的測定。實驗室內(nèi)通風應(yīng)符合遠端送風、近端回風的設(shè)計要求，每小時的換氣次數(shù)應(yīng)達到8～10 次，實驗室核心工作區(qū)域相對于外圍區(qū)域要有-5～-10 Pa 的靜壓差。人流與物流要分開，并且人流和物流要根據(jù)實驗室的工作需要合理布局，人流與物流的方向應(yīng)為從潔凈度高的區(qū)域流向潔凈度低的區(qū)域[3]。在實驗室環(huán)境和設(shè)施設(shè)備排查中，應(yīng)做到幾點：一是排查實驗室的設(shè)置、設(shè)計和布局是否合理；二是實驗室的主入口是否設(shè)置門禁控制設(shè)施并授權(quán)進入；三是是否配備與實驗活動相適應(yīng)的生物安全柜、壓力滅菌器及個人防護裝備等設(shè)施；四是實驗區(qū)域入口及內(nèi)部各實驗室門口是否張貼正確的生物危害警告標識或?qū)Ｓ脴俗R；五是生物安全設(shè)施設(shè)備是否按照要求進行檢定或校準，對檢定或校準結(jié)果是否進行適用性核查。

5 實驗室活動管理

對實驗室活動管理進行風險排查時，應(yīng)從以下幾個方面進行：一是從事（高致病性）病原微生物實驗活動是否按照規(guī)定要求經(jīng)過審批；二是實驗活動是否在與其防護級別相符的生物安全實驗室內(nèi)開展（具體按照《人間傳染的病原微生物名錄》規(guī)定執(zhí)行）；三是實驗活動是否嚴格按照國家標準、技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程（作業(yè)指導(dǎo)書）等要求操作；四是是否在同一個獨立安全區(qū)域內(nèi)只同時從事一種高致病性病原微生物的實驗活動；五是單位是否制定年度生物安全工作計劃；六是是否定期開展生物安全內(nèi)部檢查，對發(fā)現(xiàn)的問題是否及時整改并記錄。

6 菌毒種和生物樣本管理

實驗室內(nèi)菌（毒）種和生物樣本的管理是實驗室生物安全管理的重要內(nèi)容，應(yīng)嚴格按照規(guī)范要求進行安全管理，在進行風險排查時，應(yīng)做到以下幾點：一是實驗室是否建立菌（毒）種目錄；二是菌（毒）種是否做到雙人雙鎖保管，菌（毒）種和生物樣本是否做到臺賬和物品數(shù)量一致，致病性菌（毒）種和陽性生物樣本是否做到雙人雙鎖；三是菌（毒）種和陽性生物樣本的使用、移交、銷毀等是否經(jīng)過審批；四是是否具備菌（毒）種及陽性生物樣本適宜和安全的保存區(qū)域和設(shè)備，是否具有相應(yīng)的安保措施；五是高致病性菌（毒）種和陽性生物樣本轉(zhuǎn)運是否辦理《準運證》，《準運證》是否與實際轉(zhuǎn)運的微生物項目一致并在有效期內(nèi)，轉(zhuǎn)運包裝是否符合要求（具體按照《人間傳染的病原微生物名錄》規(guī)定執(zhí)行）。

7 實驗廢棄物處置

實驗室廢棄物處置要根據(jù)是否是醫(yī)療廢棄物交由專門的廢棄物公司進行處理，在進行風險排查時，應(yīng)從以下幾個方面進行：一是根據(jù)病原微生物種類、污染的對象和污染程度是否選擇適宜的消毒和滅菌方法并記錄；二是對消毒和滅菌效果是否進行定期監(jiān)測和記錄；三是病原體的培養(yǎng)基、陽性生物樣本和菌（毒）種保存液等高危實驗廢棄物在移出實驗室前是否就地進行消毒或滅菌；四是危險廢棄物的暫存區(qū)位置是否合理，是否有明顯的警示標識和相關(guān)安保措施防止廢棄物的流失、泄露或擴散等；五是危險廢棄物的暫存區(qū)是否根據(jù)不同危險廢棄物的性質(zhì)和危險性（感染性、損傷性、病理性、化學(xué)性、藥物性）進行分類包裝、堆放、處置和標識；六是單位和實驗室是否由專人處理廢棄物，人員是否經(jīng)過培訓(xùn)并配備適當?shù)?、足量的個體防護裝備；七是實驗室內(nèi)危險廢棄物的轉(zhuǎn)運是否有固定的轉(zhuǎn)運路線，廢棄物的轉(zhuǎn)載是否超過規(guī)定容量；八是銳器是否直接棄置于耐扎的容器內(nèi)；九是廢棄物的最終處置是否交由有資質(zhì)的單位集中處置；十是內(nèi)部和外部轉(zhuǎn)運交接是否均有可追溯的記錄，記錄保存期限是否不少于3 年（特殊規(guī)定除外）；十一是廢棄物的暫時貯存設(shè)施是否定期進行消毒和清潔。

8 實驗活動生物安全風險評估

實驗室要對自身開展的實驗活動進行生物安全風險評估，在進行風險排查時，要做到：一是在開展新的病原微生物項目或?qū)嶒灮顒樱òz測、診斷、教學(xué)、研究）前是否進行風險評估并有記錄；二是對發(fā)現(xiàn)的風險是否及時排除和控制；三是當相關(guān)政策、法規(guī)、標準更新或發(fā)生生物安全事件時，是否重新進行風險評估；四是風險評估報告是否經(jīng)法定代表人批準；五是風險評估報告是否包括編制人員、編制依據(jù)、編制日期、評估結(jié)論等必要的信息；六是是否定期審查風險評估報告。

9 應(yīng)急預(yù)案和應(yīng)急設(shè)施

實驗室建立生物安全應(yīng)急預(yù)案并開展應(yīng)急演練，在進行風險排查時，應(yīng)對以下幾個方面進行：一是是否建立了單位層面的應(yīng)急預(yù)案（包括組織、事故報告和處理、記錄要求等）；二是實驗室是否有針對可能發(fā)生的各類意外事件（針刺、病原微生物泄露等）處置的技術(shù)方案；三是實驗是否配備了可正常使用的洗眼器（BSL-2）、緊急噴淋裝置（涉及刺激性或腐蝕性物質(zhì)的操作且風險較大時）、滅火器等應(yīng)急設(shè)施和實驗活動相關(guān)的有效的應(yīng)急物資（例如碘伏、創(chuàng)可貼、個人防護裝備等）；四是單位是否明確定點救治醫(yī)院；五是實驗室標注的應(yīng)急撤離路線是否清晰；六是單位或?qū)嶒炇颐磕晔欠耖_展應(yīng)急演練；七是相關(guān)人員是否參加演練；八是是否確保相關(guān)人員知曉和掌握應(yīng)急預(yù)案。

10 結(jié)語

生物安全風險事故發(fā)生較多，且與生物風險因子密切相關(guān)，容易引起一系列生物安全風險事故，引發(fā)的后果及其次生后果極其嚴重。因此，通過以上9 個方面的內(nèi)容對生物安全實驗室進行風險評估，通過建立的條款檢查實驗室是否存在這些方面的問題，并對發(fā)現(xiàn)的問題的原因進行追究，從而提出針對性的生物安全風險防范和控制對策，對于單位的安全生產(chǎn)及員工安全有著極為重要的意義。