■劉 瑩陳 鑫易 鑫鄭 磊饒 勇李林祥趙小玲舒 剛*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川成都 611130；2.四川中弘天然藥物有限責(zé)任公司，四川成都 611130；3.巴中市綠色農(nóng)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展研究院，四川巴中 636000；4.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，四川成都 611130）

產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋周期可分為前期、高峰期和后期三個(gè)階段[1]。產(chǎn)蛋后期是指產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋率小于80%，或產(chǎn)蛋雞周齡大于48周齡的階段。產(chǎn)蛋雞進(jìn)入產(chǎn)蛋后期會(huì)伴隨一系列的生理健康問題，如脂質(zhì)代謝失調(diào)、氧化性損傷、免疫性能降低和鈣磷吸收代謝紊亂等[2]。其中，脂質(zhì)代謝失調(diào)最明顯的病理現(xiàn)象就是脂肪肝。脂肪肝是由于產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋量下降，對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)需求量降低，以致攝入過多的營養(yǎng)物質(zhì)會(huì)在肝臟內(nèi)沉積，進(jìn)而引發(fā)的營養(yǎng)代謝病[3]。在我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)的無抗背景下，如何改善蛋雞脂肪肝癥狀、保證產(chǎn)蛋后期蛋雞機(jī)體的健康，對(duì)于提高其生產(chǎn)性能、延長其使用年限和提高其養(yǎng)殖生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。

中醫(yī)以疏肝解郁、健脾消導(dǎo)為主，清熱解毒、利膽化積為輔，減少肝臟脂肪沉積[4]。本試驗(yàn)采用的護(hù)肝中藥提取物的主要成分為柴胡、茵陳、板藍(lán)根和大青葉組成的中草藥方劑提取物（后文簡稱護(hù)肝提取物）。柴胡和茵陳作為此中藥復(fù)方的君臣角色，起保肝護(hù)肝作用?，F(xiàn)代藥理研究表明，柴胡具有抗癌、抗抑郁、抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝、保腎等藥理作用[5]，茵陳具有保肝利膽、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抑菌和抗病毒等作用[6]。其中柴胡中的皂苷具有提高肝臟內(nèi)抗氧化分子水平、降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平，改變肝再生增強(qiáng)因子的功能，從而減少炎癥反應(yīng)起到保護(hù)肝臟的作用[7]。已有研究發(fā)現(xiàn)，茵陳提取物對(duì)長期飼喂高脂飼糧導(dǎo)致的肉雞脂肪肝出血綜合征的肝臟脂肪變性具有明顯的抑制作用[8]。板藍(lán)根和大青葉輔佐柴胡和茵陳，加強(qiáng)對(duì)脂肪肝的治療作用，同時(shí)提高產(chǎn)蛋量。板藍(lán)根清熱解毒、涼血利咽，具有抗菌、抗病毒、增強(qiáng)免疫、解熱等作用[9]。大青葉清熱解毒、涼血消斑，可用于抗病毒、抑菌、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、解熱、抗炎等[10]。研究報(bào)道飼糧添加0.75%板藍(lán)根和0.75%大青葉可顯著提高肉雞采食量和體增重，降低料重比，提高半凈膛率[11]。目前對(duì)中藥單體、中藥復(fù)方作為飼料添加劑提高產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋率的影響研究較多，但對(duì)于中藥復(fù)方提取物作為飼料添加劑對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞脂肪肝的影響較少。

本試驗(yàn)旨在探究在飼糧中添加不同劑量護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、臟器指數(shù)和抗氧化功能的影響，擬提高產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋率、改善蛋雞肝臟脂肪變性現(xiàn)象以及改善日糧營養(yǎng)水平，為推進(jìn)護(hù)肝提取物在蛋雞生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用提供科學(xué)參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

護(hù)肝提取物：由四川中弘天然藥物有限責(zé)任公司提供（主要成分為柴胡、茵陳、板藍(lán)根和大青葉，按照10∶1提取而成）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)日糧

試驗(yàn)時(shí)間為2021年12月—2022年1月。選取體重2.0 kg 左右的80 周齡產(chǎn)蛋后期山地梅花雞180 只作為試驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分為4 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15 羽，分別為對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，低劑量組、中劑量組和高劑量組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.2‰、0.4‰、0.8‰護(hù)肝提取物。基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)過程中，試驗(yàn)雞只自由采食和飲水，消毒、免疫程序按常規(guī)進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 樣品采集

試驗(yàn)第21 天，從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取4 枚雞蛋，即每組12 枚新鮮雞蛋，在24 h 內(nèi)進(jìn)行常規(guī)蛋品質(zhì)指標(biāo)檢測。試驗(yàn)結(jié)束后，禁食12 h，每組隨機(jī)選取5只雞，稱重，翅靜脈采血，2 500 r/min 離心10 min，制備血清；采血后麻醉處死，取肝臟組織，一部分-20 ℃保存，用于生化指標(biāo)測定；一部分固定于多聚甲醛中，用于病理組織學(xué)觀察。

1.4 檢測指標(biāo)

1.4.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)

每日同一時(shí)間統(tǒng)計(jì)各組各重復(fù)蛋雞的產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋重量，試驗(yàn)結(jié)束后，計(jì)算各組總產(chǎn)蛋率、平均合格蛋重和料蛋比。

1.4.2 蛋品質(zhì)樣品采集24 h內(nèi)，采用全自動(dòng)蛋品質(zhì)測定儀測定各組各重復(fù)雞蛋的蛋重、蛋橫徑、蛋縱徑、蛋型指數(shù)、蛋白高度、哈夫單位、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼重、蛋黃重等指標(biāo)。

1.4.3 臟器指數(shù)

試驗(yàn)結(jié)束后，各組雞稱重并麻醉后處死，剖取肝臟、卵巢和輸卵管，稱重，計(jì)算相應(yīng)臟器指數(shù)。剖取卵泡并計(jì)數(shù)。

臟器指數(shù)（g/kg）=臟器重量（g）/活體重（kg）

1.4.4 血液生化指標(biāo)

取血清樣品，嚴(yán)格按照試劑盒說明書檢測丙二醛（MDA）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、還原型谷胱甘肽（GSH）等血清抗氧化指標(biāo)，檢測高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）等血清生化學(xué)指標(biāo)和堿性磷酸酶（ALP）、ALT、AST等血清肝酶活性，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.4.5 肝臟抗氧化指標(biāo)

取-20 ℃保存的肝臟樣品，嚴(yán)格按照試劑盒說明書檢測MDA、T-SOD、T-AOC 和GSH，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.4.6 肝臟病理組織形態(tài)

將多聚甲醛固定后的肝臟組織采用石蠟包埋，切成4 μm切片，按照蘇木精-伊紅（H.E.）染色標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行。圖像由倒置顯微鏡和CellSens 標(biāo)準(zhǔn)處理系統(tǒng)（PLYMPUS）獲得。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用單因子方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，最小顯著差數(shù)法（LSD）進(jìn)行多重比較，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞總生產(chǎn)性能的影響

如表2 所示，與對(duì)照組相比較，低、中、高劑量組在產(chǎn)蛋率上分別升高39.20%、39.20%和54.16%，均具有顯著差異（P＜0.05）；在料蛋比指標(biāo)上低、中、高劑量組分別下降23.86%、25.08%、35.75%，均具有顯著差異（P＜0.05）；在平均合格蛋重方面，3個(gè)試驗(yàn)組均無顯著差異（P＞0.05）。

表2 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

如表3 所示，與對(duì)照組相比較，護(hù)肝提取物高劑量組的蛋黃比例呈顯著差異（P＜0.05），其余試驗(yàn)組的各項(xiàng)指標(biāo)無顯著差異（P＞0.05）。

表3 添加護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

2.3 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞臟器指數(shù)的影響

如表4所示，與對(duì)照組相比較，3個(gè)試驗(yàn)組的肝臟指數(shù)、卵巢指數(shù)和卵泡個(gè)數(shù)均無顯著差異（P＞0.05）；其中，低劑量組的輸卵管指數(shù)與對(duì)照組相比較增加了20.93%，具有顯著差異（P＜0.05），中劑量組和高劑量組與對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。

表4 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞臟器指數(shù)的影響

2.4 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

如表5 所示，與對(duì)照組相比較，低、中、高劑量組血清中的MDA、T-AOC、T-SOD和GSH均無顯著差異（P＞0.05）。

表5 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.5 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

如表6 所示，與對(duì)照組相比較，低、中、高劑量組血清中的ALP、ALT 和AST（除低劑量組外）具有顯著差異（P＜0.05），其余各項(xiàng)指標(biāo)無顯著差異（P＞0.05）。

表6 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

2.6 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

如表7 所示，與對(duì)照組相比較，低、中、高劑量組肝臟組織中的MDA、T-AOC、T-SOD和GSH均無顯著差異（P＞0.05）。

表7 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

2.7 護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞肝臟病理組織形態(tài)的影響

如圖1所示，對(duì)照組肝臟細(xì)胞嚴(yán)重脂肪變性，肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡，細(xì)胞核擠于一側(cè)，細(xì)胞核濃縮；低劑量組肝臟組織有輕微脂肪變性，部分肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡；而中劑量組和高劑量組肝臟細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)明顯脂肪變性，肝臟組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排行整齊且大小基本一致，細(xì)胞核基本居于細(xì)胞中央且核膜完整。

圖1 肝臟組織H.E.染色切片（200×）

3 討論

3.1 護(hù)肝提取物對(duì)山地梅花雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

隨著產(chǎn)蛋日齡的增長，蛋雞機(jī)體步入衰老，產(chǎn)蛋性能逐漸下降。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加中藥單體或中藥復(fù)方可以提高蛋雞生產(chǎn)性能。李立順等[12]在研究柴芪散對(duì)蛋雞的影響中發(fā)現(xiàn)，添加0.3%柴芪散可以明顯提高總產(chǎn)蛋量和11.0%產(chǎn)蛋率。王士杰等[13]研究發(fā)現(xiàn)，加味小柴胡散可顯著增加鵪鶉的平均日增重和平均日采食量，有效降低鵪鶉的料重比。敖禮林[14]研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飼糧中添加0.3%的復(fù)方中草藥（含柴胡、黨參、茵陳等），能提高10%產(chǎn)蛋率，又能提高飼料利用率和延長產(chǎn)蛋高峰期。本試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果一致，添加護(hù)肝提取物的低、中、高劑量組與對(duì)照組相比均顯著提高了39.20%、39.20%和54.16%的產(chǎn)蛋率；在料蛋比指標(biāo)上分別顯著下降23.86%、25.08%、35.75%。與李立順等[12]研究結(jié)果相比，低劑量組和中劑量組產(chǎn)蛋率增加了5.48%，護(hù)肝提取物高劑量組甚至增加了一倍多。由此表明，在飼糧中添加護(hù)肝提取物能顯著提高產(chǎn)蛋后期梅花蛋雞的生產(chǎn)性能，提高飼料轉(zhuǎn)化率，增加養(yǎng)殖場經(jīng)濟(jì)效益和生產(chǎn)效益。

3.2 護(hù)肝提取物對(duì)山地梅花雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響

蛋品質(zhì)是影響商品蛋雞生產(chǎn)效益的重要因素，主要受蛋禽種類、遺傳、營養(yǎng)、環(huán)境因素影響[15]。根據(jù)盧世杰等[16]的研究，飼糧中添加含板藍(lán)根的中草藥添加劑，能積極改善壩上長尾雞雞蛋蛋品質(zhì)。謝全喜等[17]研究益生菌和中草藥復(fù)方劑時(shí)發(fā)現(xiàn)，含柴胡的中藥復(fù)方能顯著提高蛋黃顏色，含板藍(lán)根的中草藥復(fù)方能顯著提高蛋形指數(shù)和蛋殼厚度。本試驗(yàn)中護(hù)肝提取物高劑量組的蛋黃比例與對(duì)照組相比顯著增加。在蛋殼強(qiáng)度方面，3個(gè)試驗(yàn)組與對(duì)照組比較雖無顯著差異，但高劑量組在蛋殼強(qiáng)度上與對(duì)照組相比升高了7.45%，提高蛋殼強(qiáng)度能減少生產(chǎn)運(yùn)輸過程中因蛋殼破損帶來的損失，增加經(jīng)濟(jì)效益。本試驗(yàn)在飼糧中添加護(hù)肝提取物在蛋形指數(shù)、蛋殼厚度和蛋黃顏色等上與對(duì)照組無顯著差異，出現(xiàn)與先前研究不同的結(jié)果，可能是由于中藥配方的比例不同或加工工藝不同。

3.3 護(hù)肝提取物對(duì)山地梅花雞產(chǎn)蛋后期臟器指數(shù)的影響

臟器指數(shù)的改變通常可以反映動(dòng)物機(jī)體生理或病理狀態(tài)。王迎春等[18]研究表明，在非產(chǎn)蛋時(shí)期輸卵管的重量可減少9%。因此輸卵管指數(shù)在一定程度上與產(chǎn)蛋性能有關(guān)聯(lián)性。本試中、驗(yàn)低劑量組的輸卵管指數(shù)與對(duì)照組相比較增加了20.93%，具有顯著差異。這一結(jié)果與本試驗(yàn)添加護(hù)肝提取物提高產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋率一致，可以進(jìn)一步說明在飼糧中添加0.2‰護(hù)肝提取物可以改善產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能。

3.4 護(hù)肝提取物對(duì)山地梅花雞產(chǎn)蛋后期血清、肝臟生化指標(biāo)的影響

現(xiàn)代大規(guī)模畜禽行業(yè)存在集約化嚴(yán)重、活動(dòng)空間不足等現(xiàn)象，導(dǎo)致蛋雞生理機(jī)能下降，代謝紊亂等問題的加重，從而誘導(dǎo)蛋雞脂肪肝的產(chǎn)生，以致脂肪肝成為產(chǎn)蛋后期蛋雞廣泛存在的疾病之一。因此通過測定肝臟或血清生化指標(biāo)，探究護(hù)肝提取物是否對(duì)脂肪肝具有改善作用是常用實(shí)驗(yàn)室方法。ALT、AST 主要在心肌細(xì)胞和肝肌中活性較高，在血清中的活性較低，只有組織細(xì)胞處于病理狀態(tài)時(shí)，血清中的ALT、AST 活性升高。江楠等[7]研究發(fā)現(xiàn)，柴胡中的皂苷具有提高肝臟內(nèi)抗氧化分子水平，降低血清ALT、AST水平，改變肝再生增強(qiáng)因子的功能，從而減少炎癥反應(yīng)，起到保護(hù)肝臟的作用。何順勇等[19]觀察發(fā)現(xiàn)，柴胡疏肝散能降低非酒精性脂肪肝患者血清ALT、AST含量，說明柴胡疏肝散具有保護(hù)肝細(xì)胞和減輕肝細(xì)胞變性壞死的作用。本試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果一致，與對(duì)照組相比，3個(gè)試驗(yàn)組血清中的ALP、ALT和AST（除低劑量組外）均顯著降低，說明護(hù)肝提取物具有治療產(chǎn)蛋后期蛋雞脂肪肝綜合征的潛力，減輕肝損傷。

3.5 護(hù)肝提取物對(duì)山地梅花雞產(chǎn)蛋后期肝臟病理組織形態(tài)的影響

肝臟組織病理學(xué)觀察能直觀反映產(chǎn)蛋后期梅花蛋雞肝臟組織病理變化。有曼等[20]在研究柴胡皂苷b2對(duì)LPS/GalN 誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠肝組織病理學(xué)的影響中發(fā)現(xiàn)，高劑量治療組肝小葉結(jié)構(gòu)較完整，炎性細(xì)胞浸潤灶明顯減少，且損傷程度隨藥物濃度增大而逐步減輕。本試驗(yàn)在飼糧中添加護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞肝臟組織脂肪變性減輕，肝臟組織結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，肝細(xì)胞排行整齊且大小基本一致，細(xì)胞核基本居于細(xì)胞中央且核膜完整，與上述血清肝酶ALT和AST活性結(jié)果一致，說明護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞肝功能有保護(hù)作用。

4 結(jié)論

在飼糧中添加不同劑量護(hù)肝提取物能顯著提高山地梅花雞產(chǎn)蛋后期產(chǎn)蛋率和輸卵管指數(shù)，降低料蛋比，提高生產(chǎn)性能和飼料利用率；也能明顯提高蛋品質(zhì)，為生產(chǎn)帶來更多收益。同時(shí)，對(duì)血清抗氧化指標(biāo)有一定改善作用，同時(shí)發(fā)揮保肝功能。綜上所述，在飼糧中添加不同劑量護(hù)肝提取物對(duì)產(chǎn)蛋后期梅花蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和臟器指數(shù)有一定提升作用且能改善肝臟損傷，且添加0.8‰護(hù)肝提取物效果最佳。