徐崢嶸，高軍軍，薛喜娟

（甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730046）

近年來，甘肅省大部分市、縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室已完成建設(shè)或改造，基本都具備開展口蹄疫、禽流感、包蟲病等疫病的血清學(xué)檢測(cè)能力，其中血清學(xué)抗體檢測(cè)在免疫效果評(píng)判、疫病診斷、養(yǎng)殖場(chǎng)疫病風(fēng)險(xiǎn)因子評(píng)估等方面發(fā)揮著重要作用。在口蹄疫、豬瘟、豬圓環(huán)、豬偽狂犬、禽白血病、包蟲病等抗體檢測(cè)中，最常用的是ELISA檢測(cè)技術(shù)，但受限于部分獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備落后、試驗(yàn)人員操作水平差異和試劑耗材品質(zhì)差異等因素，造成抗體檢測(cè)結(jié)果異常，無法準(zhǔn)確判斷抗體水平。因此，要客觀分析不同影響因素，并提出相應(yīng)對(duì)策，從而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展血清學(xué)抗體檢測(cè)的必要性

隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，動(dòng)物跨區(qū)域流通日趨頻繁，多種動(dòng)物疫病的發(fā)生概率也隨之升高。通過臨床癥狀評(píng)估免疫效果是比較滯后的方法，不能對(duì)動(dòng)物疫病做出早期預(yù)判，也會(huì)增加疫病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)?？贵w監(jiān)測(cè)可以準(zhǔn)確評(píng)估免疫效果，評(píng)判動(dòng)物健康情況，對(duì)合理制定動(dòng)物疫病防制方案具有指導(dǎo)意義，基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室（包括養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)驗(yàn)室）開展血清學(xué)抗體檢測(cè)可將被動(dòng)治療變?yōu)橹鲃?dòng)防制。

2 基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)狀

2.1 試驗(yàn)操作人員配備不足

目前，甘肅省大部分縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室人員緊缺。工作人員身兼數(shù)職，既要簽寫原始記錄，又要出具檢測(cè)報(bào)告及疫情報(bào)告，還要兼任其他工作，導(dǎo)致動(dòng)物抗體檢測(cè)工作無法高效率完成。

2.2 實(shí)驗(yàn)室經(jīng)費(fèi)投入不足

甘肅省大部分市、縣級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室已完成改造，但仍有部分實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)較薄弱，經(jīng)費(fèi)投入不足，缺少設(shè)備更新維護(hù)經(jīng)費(fèi)，影響動(dòng)物免疫抗體檢測(cè)工作的有效開展。

2.3 未嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督管理制度

部分基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督管理制度不完善，欠缺有效的內(nèi)審和管理評(píng)審機(jī)制[1]。由于工作任務(wù)量大、時(shí)間緊等原因，存在試驗(yàn)操作步驟不規(guī)范、儀器設(shè)備維護(hù)不及時(shí)、生物安全制度執(zhí)行不到位等現(xiàn)象，影響了抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.4 表格和檢測(cè)報(bào)告填寫不規(guī)范

個(gè)別記錄表格設(shè)計(jì)不合理，信息不能充分填寫，可追溯性不強(qiáng)。此外，檢測(cè)報(bào)告不完善，副本中內(nèi)容不全或填寫不規(guī)范，有的報(bào)告中沒有做到樣品唯一性編號(hào)，影響報(bào)告的準(zhǔn)確性。

3 影響獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)結(jié)果的因素分析

3.1 免疫因素

3.1.1 疫苗因素 近年來動(dòng)物疫病混合感染現(xiàn)象越來越嚴(yán)重，使得疫苗接種種類也越來越多。除了強(qiáng)制免疫的疫苗外，也可自主采購疫苗實(shí)施免疫，但部分養(yǎng)殖戶所選疫苗毒株的血清型與本場(chǎng)疫病流行不符，且同時(shí)給動(dòng)物接種多種疫苗，使動(dòng)物產(chǎn)生臨床反應(yīng)[2]，影響到免疫抗體效價(jià)檢測(cè)工作。此外，疫苗保存、運(yùn)輸、使用方法不當(dāng)也會(huì)造成免疫效果整體低下。

3.1.2 動(dòng)物種類因素 不同種類動(dòng)物接種同種疫苗時(shí)（如O型、A型二價(jià)滅活疫苗）所產(chǎn)生的抗體效價(jià)會(huì)有所差別，產(chǎn)生的免疫應(yīng)答受免疫抑制劑和母源抗體的影響，還會(huì)受物種遺傳疾病的影響。

3.2 樣品因素

一般動(dòng)物接種疫苗3～12個(gè)月后（根據(jù)不同疫苗在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體效價(jià)的閾值來確定）采集血清，如果血清運(yùn)輸或保存條件不符合標(biāo)準(zhǔn)，或多次凍融，就會(huì)使ELISA試驗(yàn)或血凝抑制試驗(yàn)的準(zhǔn)確性降低。

3.3 試劑因素

不同廠家或不同批次的試劑在使用效果上存在差異，如果購買的ELISA檢測(cè)試劑質(zhì)量不好、穩(wěn)定性不高，或操作人員未嚴(yán)格按照說明書保存試劑，都會(huì)影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.4 實(shí)驗(yàn)室因素

3.4.1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備的檢測(cè)與維護(hù) 實(shí)驗(yàn)室的酶標(biāo)儀、移液器都要定期校準(zhǔn)，恒溫培養(yǎng)箱、冰箱的溫度要用計(jì)量校正合格的溫度計(jì)進(jìn)行校正，如果不及時(shí)校正會(huì)造成試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。

3.4.2 實(shí)驗(yàn)室溫濕度 大多血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室安裝1～2個(gè)掛機(jī)空調(diào)，實(shí)驗(yàn)室溫濕度過高或過低，都會(huì)影響血凝抑制試驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間，出現(xiàn)滴度錯(cuò)誤的結(jié)果。

3.5 人為因素

3.5.1 試劑放置不當(dāng) 商品化檢測(cè)試劑盒中所有試劑包括包被板應(yīng)在檢測(cè)之前置于室溫（20～25 ℃）40 min以上，如果沒有平衡至室溫放置會(huì)導(dǎo)致抗原抗體反應(yīng)不徹底出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

3.5.2 加樣操作不規(guī)范 加樣過程中的人為差異是影響重大動(dòng)物疫病抗體效價(jià)的主要因素之一。由于部分基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在崗人員少且調(diào)動(dòng)頻繁，抗體檢測(cè)過程中的人為差異更為明顯，尤其在加樣過程和樣品稀釋過程要規(guī)范操作，如加樣或稀釋過程中包被板或稀釋板不能出現(xiàn)氣泡、每次加樣或稀釋都應(yīng)均勻定量、冷凍樣品使用前及樣品稀釋后應(yīng)完全混勻、移液器要定期校正和規(guī)范操作，以上任何一個(gè)過程出現(xiàn)偏差都會(huì)直接影響試驗(yàn)結(jié)果。

3.5.3 孵育時(shí)間與溫度因素 試驗(yàn)操作人員未控制好抗原（抗體）包被板的孵育時(shí)間和實(shí)驗(yàn)室溫度，影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。血凝試驗(yàn)一般在室溫下孵育，未控制好孵育時(shí)間（實(shí)驗(yàn)室溫度升高，孵育時(shí)間應(yīng)相應(yīng)縮短）會(huì)導(dǎo)致標(biāo)定的抗原滴度出現(xiàn)錯(cuò)誤。

3.5.4 儀器使用問題 酶標(biāo)儀使用前未預(yù)熱和自檢就直接進(jìn)行樣品測(cè)試會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，酶標(biāo)儀未定期校準(zhǔn)會(huì)降低酶標(biāo)孔比色的準(zhǔn)確度，從而影響酶標(biāo)孔的準(zhǔn)確讀數(shù)；洗板機(jī)結(jié)束洗板后未用蒸餾水清洗洗液孔，會(huì)導(dǎo)致洗液結(jié)晶堵塞孔口出現(xiàn)單孔或多孔堵塞的現(xiàn)象，或洗板過程中使用放置時(shí)間較長(zhǎng)的洗液也會(huì)出現(xiàn)堵孔現(xiàn)象[3]，影響洗板效果。

3.5.5 結(jié)果判定因素 ELISA檢測(cè)過程中，底物顯色結(jié)束后需加終止液，并在15 min內(nèi)完成讀板，所設(shè)波長(zhǎng)要與說明書一致，讀板結(jié)束后在試驗(yàn)成立的條件下判定結(jié)果，如果沒有準(zhǔn)確理解說明書的判定公式或試驗(yàn)人員計(jì)算步驟不熟練，就會(huì)出現(xiàn)試驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤的情況。

4 基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室提高血清學(xué)抗體檢測(cè)能力的對(duì)策

4.1 提高思想認(rèn)識(shí)

抗體檢測(cè)在免疫效果評(píng)判、疫病診斷、風(fēng)險(xiǎn)因子評(píng)估等方面具有非常重要的作用，所以基層獸醫(yī)主管部門應(yīng)提高思想認(rèn)識(shí)，給實(shí)驗(yàn)室配備足夠的檢測(cè)人員，保證日常血清學(xué)抗體檢測(cè)工作正常進(jìn)行。

4.2 健全監(jiān)督管理制度

應(yīng)不斷完善監(jiān)督管理制度，保證日常工作責(zé)任到人；確保酶標(biāo)儀、移液器等儀器設(shè)備做到正確使用和及時(shí)維護(hù)，規(guī)范處理試驗(yàn)產(chǎn)生的危險(xiǎn)廢物，并定期對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行理論知識(shí)考試和實(shí)操考試。

4.3 強(qiáng)化技術(shù)培訓(xùn)

定期組織檢測(cè)人員參加業(yè)務(wù)知識(shí)學(xué)習(xí)和實(shí)操培訓(xùn)，重點(diǎn)解析口蹄疫流行病學(xué)態(tài)勢(shì)、口蹄疫各種標(biāo)準(zhǔn)化診斷技術(shù)及樣品采集流程、非洲豬瘟流行病學(xué)態(tài)勢(shì)、非洲豬瘟各種標(biāo)準(zhǔn)化診斷技術(shù)及樣品采集流程、包蟲病流行病學(xué)態(tài)勢(shì)、包蟲病各種標(biāo)準(zhǔn)化診斷技術(shù)及樣品采集流程，使檢測(cè)人員不斷提高業(yè)務(wù)水平。

4.4 規(guī)范表格填寫

從檢測(cè)操作程序、檢測(cè)原始記錄到檢測(cè)報(bào)告的出具，每個(gè)環(huán)節(jié)都要進(jìn)行嚴(yán)格管理和控制。記錄內(nèi)容應(yīng)完整地體現(xiàn)檢測(cè)依據(jù)、檢測(cè)項(xiàng)目、檢測(cè)方法、檢測(cè)數(shù)據(jù)和必要的過程數(shù)據(jù)，保證記錄規(guī)范、準(zhǔn)確，做到樣品信息可追溯、可跟蹤。

4.5 嚴(yán)控試驗(yàn)環(huán)節(jié)

標(biāo)本合格是檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的前提[4]。嚴(yán)格按照規(guī)程采集樣品，樣品的備份和保存由樣品管理員專人負(fù)責(zé)，并對(duì)廢棄樣品及時(shí)進(jìn)行高壓滅菌處理；根據(jù)不同試驗(yàn)類型選用敏感性、特異性高及穩(wěn)定性好的檢測(cè)試劑，每一批檢測(cè)試劑最好用已知盲樣或質(zhì)控品進(jìn)行驗(yàn)證，確保試劑的準(zhǔn)確性和有效性；嚴(yán)格控制血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室的溫度、濕度，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

5 結(jié)語

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在動(dòng)物疫病診斷、疫情監(jiān)測(cè)、流行病學(xué)調(diào)查、免疫效果評(píng)價(jià)、防控風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等工作中發(fā)揮著重要作用，但影響實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)結(jié)果的因素較多，如人為因素、樣品因素、動(dòng)物種類因素、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境因素等，因此應(yīng)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)督管理，做好樣品規(guī)范采集工作、儀器設(shè)備校準(zhǔn)保養(yǎng)工作，從而確保抗體檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為畜禽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展提供技術(shù)支持。