單曉曉，周樂樂，李大偉，尹慧慧，陶穩(wěn)穩(wěn)，李俊瑩，楊 璇，彭 燦, 金傳山，汪小莉，張彩云*

1. 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012

2. 藥物制劑技術(shù)與應(yīng)用安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230012

3. 安徽省教育廳現(xiàn)代藥物制劑工程技術(shù)研究中心，安徽 合肥 230012

4. 安徽省道地中藥材品質(zhì)提升創(chuàng)新協(xié)同中心，安徽 合肥 230012

5. 安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院藥物制劑研究所，安徽 合肥 230012

6. 中藥復(fù)方安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230012

阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）是發(fā)生于老年和老年前期，以進行性認(rèn)知功能障礙和行為損害為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，患者常伴有認(rèn)知障礙、記憶力減退及人格改變等臨床表現(xiàn)，最終喪失生活自理能力[1-2]。有研究表明，AD 的發(fā)病機制多樣，如膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)耗竭、氧化應(yīng)激導(dǎo)致神經(jīng)元功能紊亂、tau 蛋白過度磷酸化、興奮性神經(jīng)元損傷、神經(jīng)炎癥等[3]，均會促進AD 的發(fā)生發(fā)展。AD 發(fā)病率隨著社會人口老齡化趨勢的不斷加劇逐年上升[4]。目前，臨床上常用于治療AD 的藥物主要有加蘭他敏和鹽酸多奈哌齊，可通過抑制乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase，AchE）的水解，改善患者記憶力[5]。另外，美金剛也被批準(zhǔn)用于中重度至重度AD 患者的治療[5]。但是，這些化學(xué)藥存在作用途徑單一、療效不理想且胃腸道反應(yīng)明顯等缺點。

因此，從中醫(yī)藥寶庫中挖掘治療AD 的經(jīng)典方劑對于防治AD 具有重要意義。開心散始載于唐代孫思邈《備急千金要方》，主好忘，具有養(yǎng)心安神、益氣定志的功效[6]。方中遠(yuǎn)志為君藥，有安神益智之功效，可交通心腎、祛痰、消腫，通過多成分、多靶點、多途徑作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)[7]。人參為臣藥，具有大補元氣、安神益智的功效，可增強遠(yuǎn)志補益、交通心腎之功，石菖蒲和茯苓為佐使相須為用，增加全方的開竅滲濕之力[6]。4 藥配伍具有安神定志、益氣養(yǎng)心的作用，充分體現(xiàn)了中醫(yī)藥治療慢性疾病的優(yōu)勢和特色。開心散是國家中醫(yī)藥管理局于2018 年頒布的《古代經(jīng)典名方目錄（第1 批）》100 首之一，是臨床上沿用至今、療效確切、具有治療AD 特色與優(yōu)勢的經(jīng)典名方。本文就AD 的發(fā)病機制、開心散治療AD 的藥效基礎(chǔ)及目前開心散防治AD 的作用機制進行綜述，為經(jīng)典名方開心散的新藥開發(fā)和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 AD 的發(fā)病機制

1.1 神經(jīng)炎癥反應(yīng)

大量研究證實，腦內(nèi)炎癥反應(yīng)的過度激活與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)，AD 患者腦中炎癥刺激因子大量釋放，激活星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，從而促進其釋放更多炎癥因子[8]。在炎癥反應(yīng)早期，膠質(zhì)細(xì)胞對于清除β 樣淀粉樣蛋白（β amyloid peptide，Aβ）和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)具有重要作用，但是持續(xù)的炎癥反應(yīng)會誘導(dǎo)神經(jīng)元的變性和死亡[9]。祝紹峰等[10]對Aβ 誘導(dǎo)的AD 模型小鼠檢測時發(fā)現(xiàn)，AD 模型小鼠的神經(jīng)元炎癥細(xì)胞數(shù)目增多，炎癥因子大量釋放，導(dǎo)致小鼠神經(jīng)元損傷。因此，神經(jīng)炎癥也被認(rèn)為是AD 發(fā)生的重要因素。

1.2 氧化應(yīng)激反應(yīng)

氧化應(yīng)激是體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡表現(xiàn)出的應(yīng)激反應(yīng)，其發(fā)生在腦組織和神經(jīng)元受損之前，在AD 發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用[11]。由于正常腦組織無法存儲氧，且對氧的需求量較高，導(dǎo)致腦神經(jīng)對體內(nèi)氧的變化高度敏感。腦內(nèi)神經(jīng)元中的脂肪酸易被氧化產(chǎn)生大量的過氧化物，由于血腦屏障使氧化產(chǎn)生的活性氧無法被及時有效清除，導(dǎo)致腦組織更容易發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，還有可能誘發(fā)Aβ 的聚集，最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和死亡[12-13]。

1.3 Tau 蛋白過度磷酸化假說

Wischik 等[14]在AD 患者大腦中分離出tau 蛋白，首次證實tau 蛋白參與AD 的發(fā)生發(fā)展。穆斌等[15]在檢測人血清中tau 蛋白水平時發(fā)現(xiàn)AD 患者血清中tau 蛋白水平高于正常人群，且神經(jīng)元在細(xì)胞內(nèi)異常聚集、折疊形成纖維纏結(jié)。微管蛋白組裝連接，突觸結(jié)構(gòu)的形成與相關(guān)功能的發(fā)揮均與tau蛋白的表達(dá)有關(guān)，過度或異常磷酸化的tau 蛋白喪失促進微管自組裝的生物學(xué)活性，導(dǎo)致微管發(fā)生解聚，神經(jīng)元變性，進而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡和AD 的發(fā)生[16]。

1.4 膽堿能假說

膽堿能假說是目前臨床比較公認(rèn)的發(fā)病機制之一。乙酰膽堿（acetylcholine，ACh）是腦內(nèi)重要的興奮性化學(xué)神經(jīng)物質(zhì)，參與記憶、學(xué)習(xí)等多種腦內(nèi)高級活動[17]。膽堿能通路中蛋白質(zhì)的損傷伴隨著AD 發(fā)病率的增加[18]。Whitehouse 等[19]在對AD 患者腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)檢查時發(fā)現(xiàn)，患者腦內(nèi)的膽堿能神經(jīng)元發(fā)生了嚴(yán)重的神經(jīng)性病變，且突觸前膜的膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)生耗竭。另有研究證實，與ACh有關(guān)的酶，如AchE、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（choline acetyl transferase，ChAT）在AD 患者腦內(nèi)也產(chǎn)生了不同程度的受損，ACh 的合成與釋放減少，進而導(dǎo)致患者在學(xué)習(xí)和記憶等認(rèn)知方面功能受損[20]。以上研究表明，腦內(nèi)ACh 的減少可能是導(dǎo)致AD 發(fā)生的重要原因。

1.5 Aβ 級聯(lián)假說

Aβ 由β-分泌酶水解淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）產(chǎn)生并釋放到細(xì)胞外的多肽，是構(gòu)成老年斑的主要成分[21]。在正常生理條件下，Aβ 的生成與降解保持平衡，而在AD 患者腦內(nèi)Aβ 生成過多，卻不能及時清除，聚積成不溶性的淀粉樣蛋白，沉積于腦內(nèi)形成淀粉樣斑塊，并產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用[22]。研究發(fā)現(xiàn)，Aβ 會加速腦細(xì)胞，尤其是星形膠質(zhì)細(xì)胞的衰老，從而損害認(rèn)知功能[23]。以上結(jié)果均表明Aβ 級聯(lián)假說是AD 的發(fā)病機制之一。

1.6 其他

膽堿能神經(jīng)參與調(diào)節(jié)腦組織錐體細(xì)胞，釋放神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸，與突觸上的N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid，NMDA）受體結(jié)合，使鈣通道適度開放，調(diào)節(jié)腦的學(xué)習(xí)與記憶過程。在正常人腦中，突觸內(nèi)外的NMDA 受體數(shù)量保持相對平衡的狀態(tài)，而在AD 患者腦內(nèi)，谷氨酸能相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)被異常激活，谷氨酸過度釋放，引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子超負(fù)荷運載，NMDA 受體受損，致使相關(guān)的腦組織神經(jīng)元受損甚至死亡[24]。

除此之外，基因突變[25]、胰島素轉(zhuǎn)導(dǎo)異常[26]、腸道菌群失調(diào)[27]、溶酶體的酸性環(huán)境改變[28]等也會導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，進而導(dǎo)致AD 的發(fā)生。AD 的發(fā)病機制見圖1。

圖1 AD 的發(fā)病機制Fig. 1 Pathogenesis of AD

2 開心散治療AD 的理論基礎(chǔ)及藥效基礎(chǔ)

2.1 中醫(yī)理論基礎(chǔ)

AD 患者早期表現(xiàn)為認(rèn)知功能障礙，屬于中醫(yī)老年癡呆的范疇，病變同時涉及肝臟和其他多個臟腑[29-31]。孫思邈在《備急千金要方》中提出，呆病是因為“腎精竭乏，陽氣日衰”而致“心力衰退”[6]。程國彭在《醫(yī)學(xué)心悟》中探討腎虛與智衰的關(guān)系中指出“腎主智，腎虛則智不足——故喜忘其前言”[32]。傅俊杰[33]認(rèn)為AD 的發(fā)生歸因于腎，并指出腎氣的溫煦可以保證腦髓的充實，而腎腦髓的充實又促進腦功能的發(fā)揮。隋華等[34]研究發(fā)現(xiàn)陰虛是AD 發(fā)生的關(guān)鍵，在整個AD 的發(fā)生發(fā)展中陰虛貫穿始終。癡呆發(fā)病過程中多臟腑出現(xiàn)功能失調(diào)，導(dǎo)致痰淤內(nèi)生、痹阻腦竅。顏德磐等[35]在探討癡呆與瘀阻的關(guān)系時指出，癡呆與內(nèi)傷七情密切相關(guān)，認(rèn)為氣血充盈，神智才能清醒，“腦髓純者靈，雜者鈍”，如若清靈之府不能與臟氣相通，氣血無法灌注至腦，腦失所養(yǎng)，遂導(dǎo)致“雜者鈍”，病情出現(xiàn)進行性加劇。由此可見，淤血也是AD 產(chǎn)生的病理學(xué)基礎(chǔ)。綜上，AD 屬于腎虛脾弱、腦竅痹阻之證。

《神農(nóng)本草經(jīng)》將開心散方中4 味藥列為上品，君藥遠(yuǎn)志安神寧心、去痰開竅，佐用石菖蒲可加強化痰開竅的功能，配伍茯苓則可加強交通心腎的作用，臣藥人參大補元氣、安神益智，以茯苓輔之，健脾化痰、利水滲濕，佐以石菖蒲補五臟、醒神明[36]，4 藥均具有養(yǎng)心安神的功效?！秱浼鼻Ы鹨健分杏涊d開心散用法用量“遠(yuǎn)志、人參各四分，茯苓二兩，菖蒲一兩；右四味治下篩，飲服方寸匕，日三”[6]，臨床上常在此基礎(chǔ)上隨證加減用于癡呆、健忘的治療。

2.2 歷史沿革基礎(chǔ)

開心散出自孫思邈的《備急千金要方》，具有養(yǎng)心安神、益氣定志的功效[6]。表1 匯總了歷代醫(yī)家對開心散主治病證的描述，可以看出不同時期開心散的處方組成并未發(fā)生改變，只是在用藥劑量上存在差異，主治功能并未隨著時代變遷發(fā)生明顯改變，仍主要用于改善神經(jīng)系統(tǒng)功能退化而引起的癡呆、改善學(xué)習(xí)記憶能力、鎮(zhèn)靜安神[37]。

表1 歷代醫(yī)家對開心散治療AD 的記載Table 1 Medical records of Kaixin Powder in treatment of AD in past dynasties

2.3 藥效物質(zhì)基礎(chǔ)

開心散方中遠(yuǎn)志的主要成分有三萜皂苷、蒽醌、糖苷等，其中遠(yuǎn)志皂苷（遠(yuǎn)志皂苷A～F 等）是遠(yuǎn)志的主要活性成分[45]。現(xiàn)代藥理研究表明，遠(yuǎn)志皂苷能夠抑制神經(jīng)細(xì)胞的毒性，調(diào)節(jié)Aβ 的轉(zhuǎn)運與清除，改善AD 的臨床癥狀，對大鼠的神經(jīng)細(xì)胞起到保護作用[46]。蔣輝等[47]采用Aβ1-42誘導(dǎo)建立AD 動物模型，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志皂苷可顯著改善AD 模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。姚允怡等[48]觀察遠(yuǎn)志醇提取物（含寡糖酯類成分）對AD 小鼠海馬區(qū)新生神經(jīng)元增長的影響，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志醇提取物可以有效降低小鼠大腦組織中氧化應(yīng)激、Aβ40、Aβ42水平，改善AD 病理癥狀，對AD 模型小鼠的大腦起到保護作用。郝彥偉等[49]通過Aβ1-40誘導(dǎo)建立AD 大鼠模型，給予遠(yuǎn)志散12、6、3 g/kg 治療10 周后，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志散給藥組大鼠較模型組大鼠逃避潛伏期均有不同程度的縮短，海馬CA1 區(qū)細(xì)胞數(shù)目與形態(tài)有明顯改善，提示遠(yuǎn)志散能夠有效改善AD 大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。

人參含有皂苷、多糖和揮發(fā)油等多種化學(xué)成分，其中人參皂苷Rg1、Rb1、Re等為其主要有效成分[50]。王繼鳳等[51]建立了AD-人參活性成分-靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)人參可以參與調(diào)節(jié)絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）通路而發(fā)揮防治AD 的作用。鄭麗娜[52]通過Aβ25-35誘導(dǎo)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞造成AD 模型，并給予人參皂苷Re 進行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Re 通過抑制線粒體的凋亡和凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1/c-Jun 氨基末端激酶信號通路，發(fā)揮神經(jīng)系統(tǒng)保護作用。劉琳等[53]發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1成分可以回調(diào)AD 模型小鼠血清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、γ-干擾素、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和IL-6 水平，從而發(fā)揮抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)、保護神經(jīng)細(xì)胞免受損傷的功效。商崇智等[54]將人參皂苷Rg2作用于東莨菪堿誘導(dǎo)的AD 模型小鼠，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg2可使AD 模型小鼠的逃避潛伏期顯著縮短，大腦皮層中ACh 含量、ChAT 活性升高，提示人參皂苷Rg2對AD 有顯著療效。同時，人參皂苷Rb1和Rg 也可通過促進腦組織蛋白質(zhì)合成改善AD小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙[55]。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，開竅藥石菖蒲具有鎮(zhèn)靜、抗疲勞、益智等功效，其所含成分β-細(xì)辛醚和α-細(xì)辛醚可透過血腦屏障用于心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)等疾病的治療[56]。石菖蒲中治療AD 的主要活性成分是揮發(fā)油，韓沅沅等[57]構(gòu)建了石菖蒲揮發(fā)性成分-疾病-靶點網(wǎng)絡(luò)分析，結(jié)果得出石菖蒲中α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚等多種揮發(fā)性成分可多途徑地保護中樞神經(jīng)系統(tǒng)，發(fā)揮治療AD 的作用。同時，也有研究發(fā)現(xiàn)石菖蒲的α-細(xì)辛醚成分能夠顯著抑制超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性及神經(jīng)元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）蛋白表達(dá)，對疲勞運動大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力產(chǎn)生顯著改善作用[58]。濃度比例為20%和100%的石菖蒲揮發(fā)油能夠?qū)β25-35蛋白結(jié)構(gòu)的空間轉(zhuǎn)化產(chǎn)生抑制作用，影響其二級結(jié)構(gòu)進而阻止Aβ 聚集和纖維形成，因此可以推測此類成分對AD 具有良好的療效[59]。高寧辛[60]利用Aβ1-42誘導(dǎo)的AD 大鼠模型，并用石菖蒲揮發(fā)油進行治療，蘇木精-伊紅染色發(fā)現(xiàn)治療組較模型組小鼠大腦海馬區(qū)細(xì)胞無嚴(yán)重?fù)p傷，說明石菖蒲揮發(fā)油能夠誘導(dǎo)大鼠海馬神經(jīng)的再生，促進和保護海馬神經(jīng)元的生長，進而發(fā)揮改善AD 的藥理作用。

茯苓是一種應(yīng)用廣泛的藥食同源性中藥，主要含有三萜類和多糖類化合物[61]。相關(guān)研究顯示，茯苓酸可以抑制炎癥因子的分泌，調(diào)節(jié)炎性蛋白和相關(guān)酶的活性，實現(xiàn)抗炎和抗氧化作用[62-63]。高冰冰等[64]比較了開心散和去茯苓開心散對D-半乳糖誘導(dǎo)的AD 模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)開心散組AD 模型小鼠動物的學(xué)習(xí)記憶能力顯著提高，動物腦組織中AchE 活力降低，SOD 活力升高，丙二醛含量降低，而去茯苓開心散對AD 模型小鼠療效不顯著，說明茯苓在開心散治療AD 的過程中發(fā)揮著重要作用。

在開心散全方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究方面，呂春曉[65]通過D-半乳糖和Aβ25-35誘導(dǎo)的AD 大鼠模型，利用行為學(xué)實驗、腦組織病理切片檢查及學(xué)習(xí)記憶能力測試等證明開心散對AD 大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的改善與治療作用；并基于此鑒定出了26 種開心散入血成分，其中包括23 個開心散中的原型成分和3個代謝產(chǎn)物。分析結(jié)果表明，開心散入血成分主要為人參皂苷類、遠(yuǎn)志酮類、遠(yuǎn)志皂苷類和西伯利亞遠(yuǎn)志糖類。另有研究表明開心散可顯著改善APP/老素基因1（presenilin 1，PS1）雙轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙和海馬組織病理變化，而去遠(yuǎn)志開心散的作用則弱于開心散全方，提示遠(yuǎn)志可能是開心散改善學(xué)習(xí)記憶障礙的主要藥味；遠(yuǎn)志寡糖酯有改善病理損傷的作用，但其對學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用不顯著，推測其在開心散全方中可能與其他成分協(xié)同發(fā)揮作用[66]。馮曉曉等[67]表征了開心散方中6 種成分在Aβ1-42誘導(dǎo)的AD 模型大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)行為，結(jié)果表明α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚的達(dá)峰時間（tmax）和消除半衰期（t1/2）均較短，表明二者在AD 模型大鼠體內(nèi)吸收迅速、消除快；茯苓新酸A 和B 吸收迅速，但消除緩慢，而去氫土莫酸和松苓新酸的tmax和t1/2均較長，說明吸收和消除均緩慢。此外，去氫土莫酸的藥-時曲線存在雙峰現(xiàn)象，其平均滯留時間也較長，這可能源于較強的肝腸循環(huán)。Wang 等[68]建立了一種靈敏、可靠的超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用方法用于比較正常大鼠和AD 大鼠ig 開心散后遠(yuǎn)志酮III、西伯利亞遠(yuǎn)志酮B、細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6、細(xì)葉遠(yuǎn)志苷A、人參皂苷Re 和人參皂苷Rb1的藥動學(xué)研究，結(jié)果表明2 組間西伯利亞遠(yuǎn)志酮B、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5和細(xì)葉遠(yuǎn)志苷A 的藥動學(xué)參數(shù)無顯著差異，但AD 組的遠(yuǎn)志酮III、細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6、人參皂苷Re 和人參皂苷Rb1的吸收明顯優(yōu)于正常組。上述研究結(jié)果為闡明開心散治療AD 的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了有力證據(jù)。

3 開心散治療AD 的作用機制

3.1 抑制炎癥反應(yīng)

AD 患者腦內(nèi)炎癥因子大量釋放，調(diào)控炎癥相關(guān)通路是防治AD 的關(guān)鍵[69]，圖2 為開心散調(diào)控相關(guān)炎癥通路發(fā)揮抗AD 作用的分析總結(jié)。

圖2 開心散調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)通路治療AD 的作用機制Fig. 2 Mechanism of Kaixin Powder in treatment of AD by regulating inflammation-related pathways

3.1.1 MAPK/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信號通路 促MAPK 是一類對應(yīng)激刺激（如炎癥細(xì)胞因子和活性氧物種）作出反應(yīng)的蛋白激酶，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、分化、對環(huán)境的應(yīng)激適應(yīng)、炎癥反應(yīng)等多種重要的生理/病理過程[70]。王盼盼[71]通過構(gòu)建成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)和成分-靶點-通路網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)MAPK 通路屬于節(jié)點度較高的通路。在AD 發(fā)病進程中，通過調(diào)節(jié)神經(jīng)元凋亡、β-分泌酶活性及APP和tau 的磷酸化，MAPK 級聯(lián)通路的激活可促進AD疾病的發(fā)展[72]。據(jù)報道，p38 MAPK 在AD 病理學(xué)中具有獨特的作用，因為在AD 患者和動物模型的死后大腦中均觀察到p38 MAPK 通路被激活[73]。因此，抑制p38 MAPK 通路可能是治療AD 的一種治療策略[74]。徐飛[75]研究發(fā)現(xiàn)開心散可以抑制AD 大鼠p38 MAPK 通路產(chǎn)生治療AD 的作用。NF-κB 廣泛參與細(xì)胞炎癥反應(yīng)，已成為炎癥疾病研究的關(guān)鍵靶點。Toll 樣受體（Toll-like receptors，TLR）在AD患者小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元上過度表達(dá)，激活NF-κB信號通路，導(dǎo)致促炎因子的過表達(dá)[76-77]。有研究表明，NF-κB 是AD 神經(jīng)變性惡性循環(huán)的核心[78]。Qu等[79]研究發(fā)現(xiàn)在小鼠BV2 小膠質(zhì)細(xì)胞中，開心散提取物可抑制TLR4/NF-κB 通路，降低脂多糖誘導(dǎo)的BV2 細(xì)胞中炎癥因子的表達(dá)。韓麗君等[80]給C57BL/6J 小鼠連續(xù)ig 開心散后取其含藥血清，并以此對APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠給藥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)給予開心散組AD 小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯改善，血腦屏障通透性降低，IL-1β、IL-6 炎癥因子較模型組減少，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增實驗顯示海馬區(qū)NF-κB p65mRNA 相對表達(dá)下調(diào)，故推測NF-κB p65 可作為治療AD 的靶點。

3.1.2 磷脂酰肌磷脂酰肌醇 3- 激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）/糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthasekinase-3β，GSK-3β）信號通路Guo 等[81]分別應(yīng)用Aβ25-35和D-半乳糖誘導(dǎo)AD 大鼠模型和Aβ25-35誘導(dǎo)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞建立AD 細(xì)胞模型，證實開心散可減少神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺的損失和提高PI3K/Akt 信號通路的蛋白表達(dá)。同時，PI3K/Akt 可進一步抑制tau 蛋白過度磷酸化及氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡。AD 模型小鼠腦內(nèi)神經(jīng)再生可通過調(diào)控PI3K/Akt/GSK-3β 信號通路產(chǎn)生作用[82-83]。李妍等[84]探討了開心散12、24、48 g/kg 對三氯化鋁聯(lián)合D-半乳糖誘導(dǎo)的AD 小鼠模型的治療作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)連續(xù)ig 開心散90 d 后，給藥組小鼠相比于模型組小鼠腦內(nèi)PI3K、磷酸化Akt、磷酸化GSK-3β 蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)，細(xì)胞形態(tài)明顯改善，新生神經(jīng)元數(shù)目增多。表明激活此通路可以保護神經(jīng)元免受損傷，并改善AD 的臨床癥狀[85]。開心散中活性成分人參皂苷Rb1、Rd、Rg1可以調(diào)節(jié)GSK-3β/tau 通路以改善認(rèn)知功能，可作為有關(guān)神經(jīng)退行性疾病的候選組分[86-87]。裴海鸞等[88]通過在大鼠雙側(cè)海馬CA1 區(qū)注射Aβ1-42寡聚肽段建立了AD 大鼠模型，連續(xù)ig 開心散5 d，發(fā)現(xiàn)開心散干預(yù)組大鼠的tau 蛋白及GSK-3β 的表達(dá)量下調(diào)，同時TNF-α、IL-6、IL-1β、APP、Aβ1-40及Aβ1-42的含量均顯著下降，表明開心散可通過調(diào)控GSK-3β 通路發(fā)揮治療AD 的藥理作用。

3.1.3 Kelch 樣 ECH 關(guān)聯(lián)蛋白 1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap-1）/核因子E2 相關(guān)因子2（nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）/錳超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase，Mn SOD）信號通路 劉江華等[89]通過側(cè)腦室注射Aβ1-42建立了AD 大鼠模型，ig 開心散水煎液10、20、40 g/kg 4 周后發(fā)現(xiàn)，開心散各給藥組相較于模型組大鼠海馬組織中Keap-1 和Mn SOD 的蛋白表達(dá)量顯著升高，同時Nrf2 蛋白表達(dá)水平降低，且高、低劑量組有顯著差別，表明開心散可通過調(diào)節(jié)Keap-1/Nrf2/Mn SOD 信號通路改善AD 大鼠的認(rèn)知障礙。

3.2 抗氧化應(yīng)激

氧化應(yīng)激是自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種負(fù)面作用，并被認(rèn)為是導(dǎo)致衰老和疾病的重要因素，丙二醛、活性氧、SOD 及谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）是常用的考察指標(biāo)。Zhang 等[90]通過ip 東莨菪堿氫溴酸鹽溶液構(gòu)建了AD 小鼠模型，對比AD 模型組發(fā)現(xiàn)開心散給藥后小鼠血清中SOD、GSH-Px 活性較模型組升高，活性氧、丙二醛氧化指標(biāo)顯著降低，表明開心散可減輕AD 小鼠的氧化應(yīng)激損傷。Yan 等[91]發(fā)現(xiàn)開心散可以顯著降低衰老模型小鼠的腦、肝臟內(nèi)晚期糖基化終末產(chǎn)物和丙二醛的含量，增加SOD 的活性。盧志園等[92]探究開心散加減方對于野生型AD 小鼠的影響，發(fā)現(xiàn)給藥組小鼠海馬中磷酸化tau 蛋白表達(dá)水平降低，開心散可降低小鼠體內(nèi)環(huán)氧化酶-2、誘導(dǎo)性一氧化氮合酶、TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA的表達(dá)而改善AD 癥狀。綜上，開心散可增強機體抗氧化能力以提高記憶能力和治療AD。

3.3 抑制tau 蛋白過度磷酸化

Tau 蛋白是一種微管相關(guān)神經(jīng)元蛋白，調(diào)節(jié)所有神經(jīng)元的細(xì)胞骨架，tau 蛋白過度磷酸化是AD 等神經(jīng)退行性疾病的標(biāo)志[93]。Jiao 等[94]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析預(yù)測開心散對AD 的潛在作用機制，并選用SAMP8 小鼠作為AD 小鼠模型進行驗證，結(jié)果表明開心散給藥3 個月后，小鼠腦內(nèi)Akt 的磷酸化水平升高，抑制GSK-3β 和細(xì)胞周期素依賴蛋白激酶5的激活，并抑制TLR4/髓分化因子88/NF-κB 信號通路，減輕tau 蛋白高度磷酸化和神經(jīng)炎癥，從而抑制神經(jīng)元凋亡并改善SAMP8小鼠的認(rèn)知功能障礙。

3.4 抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡是神經(jīng)元死亡的最主要方式之一，同時也是導(dǎo)致AD 的根本原因[95]。張景泉等[96]對AD大鼠ig 開心散7 d 后取血，將含藥血清與Aβ25-35造模后的人神經(jīng)SH-SY5Y 細(xì)胞共同孵育。采用噻唑藍(lán)法檢測細(xì)胞活力，并檢測細(xì)胞凋亡、活性氧表達(dá)及線粒體膜電位水平，結(jié)果表明開心散含藥血清可以顯著抑制細(xì)胞凋亡，提高細(xì)胞存活率，降低活性氧表達(dá)及提高線粒體膜電位。徐飛[75]在相關(guān)實驗研究中發(fā)現(xiàn)開心散給藥組大鼠的細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白如B 淋巴細(xì)胞瘤2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X 蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 數(shù)量顯著減少，大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯提高，且開心散10.1 g/kg 較開心散6.8、4.5 g/kg 療效佳，可見開心散對AD 的治療效果呈劑量相關(guān)性。

3.5 調(diào)節(jié)膽堿能系統(tǒng)

膽堿能夠促進腦部的發(fā)育和提高記憶力，確保信息在神經(jīng)通路中的正常傳遞，ChAT 和ACh 是膽堿能系統(tǒng)的標(biāo)志物[97]。目前，臨床上治療AD 常用藥物多奈哌齊屬于AchE 抑制劑類，是通過減少ACh 酶解，增加突觸間隙ACh 濃度以改善學(xué)習(xí)記憶水平[98]。時悅等[99]利用中藥藥理學(xué)分析平臺和療效藥靶數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)庫，建立了AD 相關(guān)的成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)圖，篩選治療AD 的靶標(biāo)蛋白，結(jié)果發(fā)現(xiàn)開心散中各藥效成分可能通過降低AchE 活性而發(fā)揮抗AD 作用。黃玉芳等[100]在探究開心散對于記憶障礙小鼠腦內(nèi)的一氧化氮和AchE 的影響時發(fā)現(xiàn)，開心散0.3、0.1 g/kg 可抑制小鼠腦內(nèi)AchE 的活性，且高劑量組較低劑量組明顯，證實開心散可調(diào)節(jié)膽堿能系統(tǒng)而發(fā)揮抗AD 的作用。

開心散治療AD 的作用機制總結(jié)見圖3。

圖3 開心散治療AD 的作用機制Fig. 3 Mechanism of Kaixin Powder in treatment of AD

4 結(jié)語與展望

在國家大力推動中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新發(fā)展的歷史背景下，經(jīng)典名方的守正創(chuàng)新顯得尤為重要。結(jié)合現(xiàn)代生物學(xué)相關(guān)研究，中藥復(fù)方開心散以其多靶點、多成分、多通路的特點在治療AD 方面具有優(yōu)良的臨床應(yīng)用價值，可彌補化學(xué)藥作用機制單一的不足。2018 年國家中醫(yī)藥管理局公布的《古代經(jīng)典名方目錄（第1 批）》中收錄了開心散，大力推動了開心散的新藥研發(fā)和臨床應(yīng)用。目前，開心散的相關(guān)研究多停留于臨床應(yīng)用及單一靶點的探索，缺乏對藥物間相互聯(lián)系的深入探究，同時對其藥效基礎(chǔ)、作用機制及質(zhì)量控制體系研究尚有很多挖掘空間[101]。

為進一步推動開心散新藥開發(fā)及臨床轉(zhuǎn)化，應(yīng)從源頭對開心散組方藥材進行質(zhì)量把控，在保證制劑品質(zhì)的同時，利用現(xiàn)有中藥分析技術(shù)明確其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，特別是開心散體內(nèi)外化學(xué)成分分析及量效關(guān)系研究。同時在藥理作用研究方面，應(yīng)重點關(guān)注開心散多途徑、多靶點作用機制的探索，通過基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、微生物組學(xué)等多層次生命組學(xué)與臨床藥效相結(jié)合闡明其配伍規(guī)律，為開心散從傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)向現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究提供有力證據(jù)。本研究基于AD 的發(fā)病機制和開心散的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，全面闡述了開心散在防治AD方面的作用機制，為安全、有效、質(zhì)量可控的開心散復(fù)方成藥開發(fā)奠定了廣泛的理論基礎(chǔ)和實驗參考依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突