網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對接視角下探討國醫(yī)大師張震疏調(diào)解郁湯核心藥對治療抑郁癥的作用機(jī)制

卿越雷 王秋 余嬌 代瓊花 秦竹

摘要：目的 探討疏調(diào)解郁湯核心藥對治療MMD可能的機(jī)制。方法 利用TCMSP平臺(tái)對藥物的活性成分及作用靶點(diǎn)進(jìn)行篩選，利用GeneCard、OMIM、PharmGkb、TTD、DurgBank數(shù)據(jù)庫對MMD疾病靶點(diǎn)進(jìn)行篩選。將藥物成分與疾病靶點(diǎn)取交集，采用string數(shù)據(jù)庫、及Cytoscape3.8.2軟件繪制蛋白質(zhì)交互網(wǎng)絡(luò)，篩選核心靶點(diǎn)。利用R（V4.1.2）軟件引用Bioconducter數(shù)據(jù)庫對交集基因進(jìn)行GO分析和KEGG分析，并對篩選出的核心靶點(diǎn)和排名靠前的藥物關(guān)鍵成分進(jìn)行分子對接驗(yàn)證。結(jié)果 共篩選獲得藥物有效化合物成分 88個(gè)，作用靶點(diǎn)233個(gè)。MMD相關(guān)基因靶點(diǎn)1744個(gè)。將藥物作用靶點(diǎn)與疾病基因靶點(diǎn)取交集后，得到105個(gè)靶點(diǎn)。構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，經(jīng)拓?fù)浞治龊蟮玫組APK1、FOS、JUN、AKT1、ESR1、STAT3共6個(gè)核心靶點(diǎn)。GO分析顯示疏調(diào)解郁湯核心藥對作用于MMD涉及了多個(gè)生物過程及分子功能，其中生物過程主要涉及對異物刺激的反應(yīng)、對金屬離子的反應(yīng)、對脂多糖的反應(yīng)等。細(xì)胞成分主要涉及膜筏、膜微域、突觸膜、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等。分子功能主要涉及DNA的結(jié)合轉(zhuǎn)錄、RNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄等。KEGG分析顯示MMD的發(fā)病與多個(gè)通路，多種疾病均有關(guān)系。除與MMD相關(guān)通路外還與糖尿病并發(fā)癥相關(guān)的AGE-RAGE信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染通路、化學(xué)致癌受體激活通路、人巨細(xì)胞病毒感染、內(nèi)分泌抵抗相關(guān)通路等有關(guān)。分子驗(yàn)證顯示其中MAPK1、FOS、JUN、AKT1、ESR1、STAT3共6個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)與藥物關(guān)鍵成分槲皮素、木樨草素進(jìn)行分子對接驗(yàn)證，結(jié)合能均≤-5.0 kJ/mol，表明關(guān)節(jié)化合物與核心靶點(diǎn)結(jié)合較好。結(jié)論 疏調(diào)解郁湯核心藥對MMD的治療作用可能與MAPK1、FOS、JUN、AKT1、ESR1、STAT3共6個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)及PI3K-AKT信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路、Rap1信號(hào)通路、血管平滑肌收縮、膽堿能突觸、MTOR信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、多巴胺神經(jīng)能突觸、甲狀腺激素信號(hào)通路、AMPK信號(hào)通路有關(guān)。

關(guān)鍵詞：抑郁癥；疏調(diào)解郁湯；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；分子對接；信號(hào)通路

中圖分類號(hào)：R749.4+1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-2349（2023）03-0054-10

抑郁癥（major depressive disorder，MDD）是以顯著而持久的心境低落、思維遲鈍、認(rèn)知功能障礙、興趣活動(dòng)減退為主要表現(xiàn)的心境障礙類疾病^［1］。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球約3.5億人患有抑郁癥，每年自殺行為的發(fā)生率約為28.5%～63.7%。我國抑郁癥患者占總?cè)丝诘?%～8%，目前其患病人數(shù)已超過2600萬，已成為危害人類健康的第四大疾患^［2］。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)顯示抑郁癥在近些年的發(fā)病中表現(xiàn)出了患病及復(fù)發(fā)率高、同時(shí)致殘率高的特點(diǎn)^［3］，預(yù)計(jì)到2030年我國抑郁癥的疾病造成的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)將位于首位^［4］。抑郁癥是一個(gè)由多種機(jī)制及多種因素共同參與而導(dǎo)致的疾病，被認(rèn)為與遺傳、神經(jīng)生物學(xué)、社會(huì)文化心理因素及單胺遞質(zhì)等作用機(jī)制均相關(guān)^［5-9］。抑郁癥屬中醫(yī)“郁證、臟躁癥、百合病”范疇，相關(guān)研究顯示中醫(yī)學(xué)對郁證具有較為系統(tǒng)的理論認(rèn)識(shí)和豐富的診治經(jīng)驗(yàn)，在抑郁癥防治中發(fā)揮積極作用，尤其是對輕中度抑郁及抑郁癥鞏固治療、維持治療階段可發(fā)揮重要作用^［10］。疏調(diào)解郁湯由云南首位國醫(yī)大師張震研究員創(chuàng)立，張老強(qiáng)調(diào)在疾病的治療過程中，須注意氣機(jī)的疏達(dá)和調(diào)暢，方可取得較好的臨床療效，同時(shí)疏調(diào)人體氣機(jī)需將疏利肝氣與調(diào)護(hù)脾腎相結(jié)合。疏調(diào)解郁湯由疏調(diào)氣機(jī)湯加刺蒺藜、佛手、石菖蒲、玫瑰花、素馨花、厚樸花化裁而來。張老認(rèn)為疏調(diào)解郁湯中之核心成份柴胡、白芍、枳實(shí)具有四逆散之意可助氣機(jī)之條暢與敷布，有緩解抑郁之作用；刺蒺藜可疏肝氣之郁積，平抑肝陽之上亢，解心經(jīng)之郁火；石菖蒲能開宣心竅腎竅，寧神益智；佛手疏調(diào)肝氣，甘松解郁暢中；玫瑰花氣味甘香，芳香襲人，能柔肝散郁，行氣活血^［11］。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討疏調(diào)解郁湯中核心藥對（柴胡、白芍、枳實(shí)、刺蒺藜、石菖蒲、甘松、佛手、玫瑰花）治療MMD的生物學(xué)機(jī)制，并利用分子對接技術(shù)對其進(jìn)行驗(yàn)證。擬為闡明疏調(diào)解郁湯核心藥對治療MMD的作用機(jī)制和后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 藥物成分篩選與靶點(diǎn)預(yù)測 疏調(diào)解郁湯核心藥對，主要由柴胡、白芍、枳實(shí)、刺蒺藜、石菖蒲、甘松、佛手、玫瑰花8味藥物組成。利用TCMSP數(shù)據(jù)庫（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）^［12］，以藥物名稱“柴胡”、“白芍”、“枳實(shí)”、“刺蒺藜”、“石菖蒲”、“甘松”、“佛手”、“玫瑰花”作為關(guān)鍵詞，對藥物主要化學(xué)成分進(jìn)行檢索。設(shè)置口服生物利用度（OB）≥30%，類藥性（DL）≥0.18作為篩選條件，將篩選出的有效成分利用TCMSP的有數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶點(diǎn)蛋白預(yù)測。并將預(yù)測的有效靶點(diǎn)蛋白利用Uniport（https：//www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫查詢對應(yīng)基因名，將靶點(diǎn)蛋白與基因信息對應(yīng)。

1.2 MMD疾病靶點(diǎn)篩選 以“major depressive disorder”作為關(guān)鍵詞，在GeneCard數(shù)據(jù)庫（https：//www.genecards.org/）^［13］、OMIM數(shù)據(jù)庫（https：//omim.org/）^［14］、PharmGkb數(shù)據(jù)庫（https：//www.pharmgkb.org/）^［15］、TTD數(shù)據(jù)庫（http：//db.idrblab.net/ttd/）^［16］、DurgBank數(shù)據(jù)庫（https：//www.drugbank.ca/）^［17］檢索，物種條件設(shè)置為智人（homo sapiens）其中將GeneCard數(shù)據(jù)庫中的Relevance score設(shè)定為≥10分，以篩選出與疾病相關(guān)度更高的基因。將篩選出的基因取并集，并去除重復(fù)基因，獲得與MMD疾病相關(guān)基因。

1.3 疏調(diào)解郁湯核心藥對治療MMD靶點(diǎn)預(yù)測 利用venny（V2.1）軟件對篩選出的藥物作用基因與疾病相關(guān)基因取交集，并繪制韋恩圖，將交集中的基因作為疏調(diào)解郁湯核心藥對作用于MMD的預(yù)測基因靶點(diǎn)。

1.4 構(gòu)建藥材-化合物-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)、蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)及篩選關(guān)鍵靶點(diǎn) （1）將藥物名稱、藥物成分、與疾病基因靶點(diǎn)名稱對應(yīng)，利用Excel輸出為network（網(wǎng)絡(luò)）文件。并將藥物名稱、藥物成分、疾病基因靶點(diǎn)利用Excel輸出為type（類型）文件。將兩個(gè)文件導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2軟件中作圖。（2）將篩選出的藥物及疾病共有的基因，寫入Excel文件中，并導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org）構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。將作圖條件設(shè)定如下：物種為智人（“homo sapiens”），可信度≥0.9。如有游離節(jié)點(diǎn)，可設(shè)置為隱藏。（3）將圖導(dǎo)出為tsv文件，并用Cytoscape 3.8.2軟件打開進(jìn)，利用軟件中的Network Analyzer工具進(jìn)行拓?fù)浞治觯訡loseness、degree、LAC、Eigenvector 4個(gè)參數(shù)作為參考標(biāo)準(zhǔn)，按degree值排序，重復(fù)2次，篩選關(guān)鍵基因靶點(diǎn)。

1.5 GO富集分析與KEGG富集分析及可視化處理 將1.3中篩選出的疾病和藥物作用的共有基因，做生物學(xué)過程GO分析和KEGG通路分析。利用R（V4.1.2）軟件，引用colorspace、stringi、ggplot2、BiocManager數(shù)據(jù)包、并導(dǎo)入DOSE、clusterProfiler、enrichplot插件。對共有基因的生物過程、分子功能、細(xì)胞組分進(jìn)行富集分析，篩選矯正P值<0.05的項(xiàng)目。對共有基因進(jìn)行KEGG通路富集分析，設(shè)定P值<0.05，并對相關(guān)通路進(jìn)行排序。最后利用R軟件對GO分析及KEGG分析的結(jié)果作圖對其進(jìn)行可視化處理。

1.6 成分和靶點(diǎn)分子對接驗(yàn)證 利用RSCB PDB數(shù)據(jù)庫（https：//www.rcsb.org/），下載關(guān)鍵基因靶點(diǎn)的3D結(jié)構(gòu)的PDB文件，并使用PyMol（V2.4.0）軟件刪除文件中的水分子和小分子配體。利用PubChem 數(shù)據(jù)庫（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載有效成分2D 結(jié)構(gòu)的SDF 格式文件，并用ChemOffice轉(zhuǎn)換為3D結(jié)構(gòu)，并用Mgitools（V1.5.6）軟件使其能量最小化保存為pdbqt格式文件。最后用AutoDockVina（V1.1.2）軟件進(jìn)行分子對接驗(yàn)證。

2 結(jié)果

2.1 藥物成分篩選與靶點(diǎn)預(yù)測結(jié)果 使用TCMSP數(shù)據(jù)庫搜索藥物有效成分，共獲得有效化合物成分 88個(gè)。其中柴胡17個(gè)，枳實(shí)22個(gè)，白芍13個(gè)，刺蒺藜12個(gè)，石菖蒲4個(gè)，佛手5個(gè)，甘松5個(gè)，玫瑰花10個(gè)。運(yùn)用Uniport數(shù)據(jù)庫對TCMSP數(shù)據(jù)庫中篩選出的基因名稱進(jìn)行規(guī)范化處理，經(jīng)匯總后共得到1344個(gè)基因靶點(diǎn)，其中柴胡342個(gè)，枳實(shí)305個(gè)，白芍123個(gè)，刺蒺藜122個(gè)，石菖蒲103個(gè)，佛手48個(gè)，甘松68個(gè)，玫瑰花233個(gè)。經(jīng)去重后共有233個(gè)靶點(diǎn)。

2.2 MMD疾病靶點(diǎn)篩選結(jié)果 在GeneCards數(shù)據(jù)庫中檢索共獲得1038個(gè)基因，Durgbank數(shù)據(jù)庫中共獲得109個(gè)基因，OMIM數(shù)據(jù)庫中共獲得4個(gè)基因，PharmGkb數(shù)據(jù)庫中共獲得701個(gè)基因，TTD數(shù)據(jù)庫中共獲得67個(gè)基因。經(jīng)去重并取并集后，獲得與MMD相關(guān)基因靶點(diǎn)共1744個(gè)。（如圖1所示）

2.3 疏調(diào)解郁湯核心藥對治療MMD靶點(diǎn)預(yù)測結(jié)果 利用venny（V2.1）軟件，對篩選出的藥物作用靶點(diǎn)和疾病基因靶點(diǎn)取交集。共得到105個(gè)靶點(diǎn)，作為疏調(diào)解郁湯作用于MMD的預(yù)測靶點(diǎn)。（如圖2所示）

2.4 藥材-化合物-疾病靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)、蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)及篩選關(guān)鍵靶點(diǎn)結(jié)果 （1）圖3為得到的藥材-化合物-疾病靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)圖。圓圈為藥物成分，其大小以degree值排列與圓圈越大疾病相關(guān)性越大。其中圓形中的不同顏色代表不同藥物的有效成分。綠色為佛手，淡黃色為柴胡，紫色為刺蒺藜，紅色為玫瑰花，淡藍(lán)色為白芍，橘黃色為枳實(shí)，粉紅色為甘松，深藍(lán)色為石菖蒲。一個(gè)圓形有多種顏色代表該成分為多個(gè)藥物共有。圓圈的大小按degree值排列，藥物作用的靶點(diǎn)越多，則圓圈越大。中間的方形圖標(biāo)為藥物作用于疾病相關(guān)靶點(diǎn)，相關(guān)性degree值排列，與疾病相關(guān)性越高，作用于該靶點(diǎn)的藥物越多，圖形越大，顏色越深。

（2）圖4為得到的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。其中蛋白質(zhì)之間作用相互度越高，基因越處于圖中間，且基因之間的連線越多。將由string數(shù)據(jù)庫得到的PPI網(wǎng)絡(luò)圖，保存為tsv文件，用Cytoscape 3.8.2軟件打開，使用Analyzer軟件進(jìn)行拓?fù)浞治龊?，選取degree值超過中位數(shù)的基因，作為核心靶點(diǎn)。第一次degree值為5，黃色圖標(biāo)為首次篩選的核心靶點(diǎn)（圖5所示）。將上述過程重復(fù)一次，第二次degree值為11，得，最終篩選出的核心靶點(diǎn)分別為MAPK1、FOS、JUN、AKT1、ESR1、STAT3。（圖6所示）

2.5 關(guān)鍵成分篩選結(jié)果 根據(jù)藥材-化合物-疾病靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)中，藥物成分的degree值篩選出關(guān)鍵藥物成分。選取degree大于平均值的成分作為關(guān)鍵成分。前20味的成分信息見表1。

2.6 生物學(xué)過程GO分析結(jié)果 共富集到2052條生物過程相關(guān)條目，113條分子功能相關(guān)條目，155條細(xì)胞成分相關(guān)條目。使用R用R（V4.1.2）軟件，引用colorspace、stringi、ggplot2、BiocManager數(shù)據(jù)包、并導(dǎo)入DOSE、clusterProfiler、enrichplot插件。選取分子數(shù)量參與程度高的前10位繪制生物過程，細(xì)胞成分，分子功能的氣泡圖（如圖7、8、9所示）。由圖可見，生物過程主要涉及對異物刺激的反應(yīng)、對金屬離子的反應(yīng)、對脂多糖的反應(yīng)、對氧氣水平的反應(yīng)、對細(xì)菌的反應(yīng)等。細(xì)胞成分主要涉及膜筏、膜微域、突觸膜、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子、RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等。分子功能主要涉及DNA的結(jié)合轉(zhuǎn)錄、RNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄、G蛋白偶聯(lián)受體激酶活動(dòng)、神經(jīng)遞質(zhì)受體活動(dòng)、蛋白酶結(jié)合等。

2.7 KEGG通路富集分析結(jié)果 利用R用R（V4.1.2）軟件，安裝Bioconductor數(shù)據(jù)庫并引用“clusterProfiler”、“org.Hs.eg.db”、“enrichplot”、“ggplot2”、“pathview”對篩選出的基因進(jìn)行KEGG通路富集分析。設(shè)定篩選條件為校正P值≤0.05，共富集到168條通路。由此可見，疏調(diào)解郁湯治療MMD可能是通過多條通路，多個(gè)靶點(diǎn)起到治療作用，這也體現(xiàn)了中藥復(fù)方對疾病多靶點(diǎn)治療的特點(diǎn)。同時(shí)篩選排名前20名的通路做通路圖（圖10）。其中涉及多條通路，如與糖尿病并發(fā)癥相關(guān)的AGE-RAGE信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路、卡波西肉瘤相關(guān)。

皰疹病毒感染通路、化學(xué)致癌受體激活通路、人巨細(xì)胞病毒感染、內(nèi)分泌抵抗相關(guān)通路等。在168條通路中與MMD相關(guān)的主要通路為PI3K-AKT信號(hào)通路（基因占比21%）、MAPK 信號(hào)通路（基因占比17%）、Ras信號(hào)通路（基因占比10%）、Rap1信號(hào)通路（基因占比7%））、血管平滑肌收縮（基因占比8%）、膽堿能突觸（基因占比12%）、MTOR信號(hào)通路（基因占比6%）、MAPK信號(hào)通路（基因占比17%）、多巴胺神經(jīng)能突觸（基因占比11%）、甲狀腺激素信號(hào)通路（基因占比13%）、AMPK信號(hào)通路（基因占比5%）。

2.8 分子對接驗(yàn)證 使用篩選出的6個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)（MAPK1、FOS、JUN、AKT1、ESR1、STAT3）與化合物中篩選出的排名前2的關(guān)鍵成分（槲皮素、木樨草素）進(jìn)行分子對接驗(yàn)證。一般來說，結(jié)合能<0 kJ/mol，則說明受體和配體可以自由結(jié)合。目前對于結(jié)合能尚無統(tǒng)一篩選標(biāo)準(zhǔn)，通過閱讀相關(guān)文獻(xiàn)，采用結(jié)合能≤-5.0 kJ/mol，作為標(biāo)準(zhǔn)^［18］。（結(jié)果如表2所示）所有成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子結(jié)合能均小于上述標(biāo)準(zhǔn)，表明成分與靶點(diǎn)結(jié)合較好。

3 討論

據(jù)相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查顯示，隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的不斷發(fā)展，人們面臨的壓力也日益增大，MMD發(fā)病率在我國呈現(xiàn)逐年上升趨勢。MMD自發(fā)現(xiàn)以來就被認(rèn)為是多因素導(dǎo)致的疾病。西醫(yī)認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制主要與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其受體表達(dá)異常、神經(jīng)細(xì)胞可塑性及相關(guān)信號(hào)通路改變、下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸持續(xù)激化引發(fā)功能紊亂、細(xì)胞因子的異常分泌引發(fā)抑郁等因素相關(guān)^［19］。較西藥治療MMD而言，中藥治療MMD的優(yōu)勢有心神同治的整體觀及豐富的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。張老認(rèn)為在抑郁癥的發(fā)病過程中，核心原因主要為氣血不和。正如《丹溪心法》云：“氣血沖和，萬病不生。一有拂郁，諸病生焉”。因此在治療的過程中不僅要注重疏利調(diào)暢肝的氣機(jī)升降，更應(yīng)注重補(bǔ)益氣血，顧護(hù)脾胃功能。疏調(diào)解郁湯核心藥對中，柴胡主結(jié)氣積聚、疏通肝木、推陳致新。白芍入肝家而清風(fēng)，走膽腑而瀉熱，善調(diào)心中煩悸。枳實(shí)瀉痞滿而去濕，消陳腐而還清。刺蒺藜利血，宜入肝經(jīng)，平肝疏肝。石菖蒲開心孔，補(bǔ)五臟，通九竅，明耳目。佛手疏肝理氣，和胃止痛。甘松理脾胃，開氣郁。玫瑰花柔肝醒胃，行氣活血?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，柴胡、白芍、刺蒺藜、石菖蒲可通過單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其離子通道（5羥色胺3受體）對抑郁癥起治療作用^［20-24］。枳實(shí)可通過提高海馬GRmRNA表達(dá)，抑制下丘腦—垂體—腎上腺皮質(zhì)軸亢進(jìn)、提高海馬及皮質(zhì)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA表達(dá)、參與提高神經(jīng)遞質(zhì)類表達(dá)和釋放及調(diào)節(jié)胃腸激素對MMD起到治療作用^［25］。佛手可通過調(diào)控HPT軸及HPA軸起到抗抑郁作用^［26］。甘松可通過促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞增殖及調(diào)控cAMP、MAPK通路對抑郁癥起治療作用^［27］。玫瑰花能顯著增加抑郁小鼠中血清5-HT含量^［28］。諸藥合用，共同起到疏肝解郁，行氣和血，健運(yùn)脾胃之功。

疏調(diào)解郁湯為張老長期臨床過程中，總結(jié)出的行之有效的處方和藥味的綜合體。體現(xiàn)了張老“調(diào)和氣血”的主要思想。臨床中對于緩解抑郁癥患者的心理和生理癥狀，療效較好。據(jù)前期臨床觀察顯示。服用疏調(diào)解郁湯治療的患者癥狀緩解明顯，抑郁評分量表較服藥前有所改善。本研究通過篩選疏調(diào)解郁湯核心藥對中的藥物活性成分及作用靶點(diǎn)與MMD相關(guān)疾病靶點(diǎn)，結(jié)果顯示疏調(diào)解郁湯治療MMD的作用與MAPK1、CTNNB1、FOS、AR、GSK3B、RUNX2、MYC、NR3C1、JUN、TP53、AKT1、HIF1A、CASP3、NCOA2、RB1等多個(gè)靶點(diǎn)相關(guān)。選取其中MAPK1、FOS、JUN、AKT1、ESR1、STAT36個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)與藥物關(guān)鍵成分槲皮素、木樨草素進(jìn)行分子對接驗(yàn)證，結(jié)合能均≤-5.0 kJ/mol，表明關(guān)節(jié)化合物與核心靶點(diǎn)結(jié)合較好。

本研究的GO分析顯示疏調(diào)解郁湯核心藥對作用于MMD涉及了多個(gè)生物過程及分子功能，其中生物過程主要涉及對異物刺激的反應(yīng)、對金屬離子的反應(yīng)、對脂多糖的反應(yīng)、對氧氣水平的反應(yīng)、對細(xì)菌的反應(yīng)等。細(xì)胞成分主要涉及膜筏、膜微域、突觸膜、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子、RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等。分子功能主要涉及DNA的結(jié)合轉(zhuǎn)錄、RNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄、G蛋白偶聯(lián)受體激酶活動(dòng)、神經(jīng)遞質(zhì)受體活動(dòng)、蛋白酶結(jié)合等。有研究顯示MMD的發(fā)病與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、線粒體能量代謝有明顯關(guān)系，如cAMP-PKA傳導(dǎo)、NDMA傳導(dǎo)等^［29-30］。KEGG通路分析顯示，MMD的發(fā)病與多個(gè)通路，多種疾病均有關(guān)系。如與糖尿病并發(fā)癥相關(guān)的AGE-RAGE信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染通路、化學(xué)致癌受體激活通路、人巨細(xì)胞病毒感染、內(nèi)分泌抵抗相關(guān)通路等。近年來的研究表明，抑郁癥可與腫瘤、心血管疾病、內(nèi)分泌疾病等同時(shí)發(fā)生或誘發(fā)其他疾病。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)顯示惡性腫瘤和抑郁障礙普遍存在共病關(guān)系，癌癥可能導(dǎo)致產(chǎn)生抑郁同時(shí)抑郁癥導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)加劇^［31］。同時(shí)與免疫相關(guān)的白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子也與抑郁癥發(fā)生相關(guān)，TNF-α IL-6、IL-10通過MAPK、JAK/STAT信號(hào)通路參與RA發(fā)病的同時(shí)可導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生^［32］。

綜上所述，疏調(diào)解郁湯核心藥對MMD的治療作用可能與MAPK1、CTNNB1、FOS、AR、GSK3B、RUNX2、MYC、NR3C1、JUN、TP53、AKT1、HIF1A、CASP3、NCOA2、RB1等多個(gè)靶點(diǎn)相關(guān)?？赡軐μ悄虿〔l(fā)癥相關(guān)的AGE-RAGE信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染通路、化學(xué)致癌受體激活通路、人巨細(xì)胞病毒感染、內(nèi)分泌抵抗相關(guān)通路有調(diào)控作用。同時(shí)對與MMD 相關(guān)的PI3K-AKT信號(hào)通路、MAPK 信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路、Rap1信號(hào)通路、血管平滑肌收縮、膽堿能突觸、MTOR信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、多巴胺神經(jīng)能突觸、甲狀腺激素信號(hào)通路、AMPK信號(hào)通路也具有治療作用。因此，疏調(diào)解郁湯核心藥對對MMD的治療和干預(yù)是通過多靶點(diǎn)，多通路實(shí)現(xiàn)的。其具體機(jī)制和通路還需通過進(jìn)一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究和驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)：

［1］范儉雄，張寧.精神病學(xué)［M］.3版.南京：東南大學(xué)出版社，2017：782.

［2］江愛國.抑郁癥患者自殺行為危.機(jī)干預(yù)觀察［J］.臨床心身疾病雜志，2011，17（2）：169-170.

［3］Askelund AD，Schweizer S，Goodyer IM，et al.Positive memory specificity is associated with reduced vulnerability to depression［J］.Nat Hum Behav，2019，3（3）：265-273.

［4］Ng M，F(xiàn)leming T，Robinson M，Global，regional，and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013：a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013［J］.Lancet，2014，384（9945）：766-781.

［5］Ménard C，Hodes GE，Russo SJ.Pathogenesis of depression：Insights from human and rodent studies［J］.Neuroscience，2016，321（3）：138-162.

［6］Ogodek E，Szota A，Just M，et al.The role of the neuroendocrine and immune systems in the pathogenesis of depression［J］.Pharmacol Rep，2014，66（5）：776-81.

［7］Jokela M，García-Velázquez R，Airaksinen J，et al.Chronic diseases and social risk factors in relation to specific symptoms of depression：Evidence from the U.S.national health and nutrition examination surveys［J］.J Affect Disord，2019，15（50）：242-247.

［8］Hayley S，Litteljohn D.Neuroplasticity and the next wave of antidepressant strategies［J］.Front Cell Neurosci，2013，7（20）：218.

［9］Bambico FR，Belzung C.Novel insights into depression and antidepressants： a synergy between synaptogenesis and neurogenesis［J］. Curr Top Behav Neurosci，2013（15）：243-291.

［10］過偉峰，曹曉嵐，盛蕾，等.抑郁癥中西醫(yī)結(jié)合診療專家共識(shí)［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2020，40（2）：141-148.

［11］張震，田春洪.國醫(yī)大師張震氣機(jī)疏調(diào)論治［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2018：63.

［12］Jinlong Ru，Peng Li，Jinan Wang，et al.TCMSP：a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines［J］.Cheminformatics，2014，16，6（1）：13.

［13］Rebhan M，Chalifa-Caspi V，Prilusky J，et al.GeneCards：integrating information about genes，proteins and diseases［J］.Trends Genet，1997，13（4）：163.

［14］Hamosh A，Scott AF，Amberger JS，et al.Online Mendelian Inheritance in Man（OMIM），a knowledgebase of human genes and genetic disorders［J］.Nucleic Acids Res，2005，1，33（Database issue）：D514-517.

［15］Whirl-Carrillo M，McDonagh EM，Hebert JM，et al.Pharmacogenomics knowledge for personalized medicine［J］.Clin Pharmacol Ther，2012，92（4）：414-417.

［16］Zhu F，Shi Z，Qin C，et al.Therapeutic target database update 2012：a resource for facilitating target-oriented drug discovery［J］.Nucleic Acids Res，2012 Jan，40（Database issue）：1128-1136.

［17］Liang X，Li H，Li S.A novel network pharmacology approach to analyse traditional herbal formulae：the Liu-Wei-Di-Huang pill as a case study［J］.Mol Biosyst，2014，10（5）：1014-1022.

［18］鄧燕君，劉博文，賀楨翔，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接法探索藿香正氣口服液預(yù)防新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）活性化合物研究［J］.中草藥，2020，51（5）：1113-1122.

［19］許鵬，章程鵬.基于抑郁癥發(fā)病機(jī)制的中藥防治規(guī)律［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2020，26（7）：232-238.

［20］李芳，王杰瓊，宋春紅，等.柴胡提取物對大鼠海馬原代培養(yǎng)神經(jīng)元5-HT_3受體介導(dǎo)離子通道的影響［J］.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2015，17（11）：2224-2228.

［21］馬海娟，李芳，宋春紅，等.白芍提取物對大鼠海馬原代培養(yǎng)神經(jīng)元5-羥色胺3受體介導(dǎo)離子通道的影響［J］.中草藥，2017，48（6）：1167-1171.

［23］沈雙宏，沈曉東，胡隨遇，等.刺蒺藜苷對抑郁模型大鼠海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2008（3）：13-83.

［24］王聯(lián)生，潘菊華.石菖蒲治療抑郁癥的研究進(jìn)展［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2017，10（4）：509-512.

［25］張曉南，黃世敬.枳實(shí)、枳殼的抗抑郁作用［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2014，7（1）：77-80.

［26］宋美卿，馬瀾，賈力莉，等.對藥香櫞佛手對抑郁大鼠HPT軸和HPA軸功能的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2017，32（10）：4633-4636.

［27］李琴.甘松新酮抗抑郁作用及作用機(jī)制初探［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

［28］梁明坤，韋宇婷，梁杏秋，等.玫瑰花顆粒對抑郁小鼠行為學(xué)及血清5-HT的影響［J］.陜西科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，39（1）：70-74.

［29］徐向青，唐啟盛.抑郁癥與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（36）：49-50.

［30］劉少博，令狐婷，高耀，等.線粒體能量代謝障礙在抑郁癥發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵作用［J］.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2019，33（10）：865.

［31］王苗苗，吳密璐.惡性腫瘤抑郁癥的臨床研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2016，24（8）：1315-1317.

［32］陳慧芳，王曉霞，何佳莉，等.腫瘤壞死因子α與白細(xì)胞介素6和白細(xì)胞介素10及相關(guān)信號(hào)通路在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎合并抑郁癥中的研究進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥，2019，14（4）：629-632.

（收稿日期：2022-05-06）