蘇瓊 江丹娜 鐘釗 周開 龔文波

[摘要]?目的?探究降濁合劑濃縮液對肥胖大鼠體質(zhì)量、糖脂指標(biāo)的影響。方法?將30只SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和給藥組，每組各10只。正常組大鼠給予普通飼料足量喂養(yǎng)+生理鹽水灌胃，模型組大鼠給予高脂飼料足量喂養(yǎng)+生理鹽水灌胃，給藥組大鼠給予高脂飼料足量喂養(yǎng)+降濁合劑濃縮液灌胃。干預(yù)8周后，觀察各組大鼠的大體情況和體質(zhì)量變化，采用蘇木精–伊紅染色（hematoxylin?and?eosin?staining，HE染色）觀察脂肪細(xì)胞的病理變化，比較血糖（glucose，GLU）、總膽固醇（total?cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low?density?lipoprotein-cholesterol，LDL-C）水平。結(jié)果?干預(yù)后，給藥組大鼠的精神狀態(tài)、皮毛光澤度顯著改善，且干預(yù)7～8周的體質(zhì)量顯著低于模型組（P<0.05）；HE染色觀察顯示，給藥組大鼠的白色、棕色脂肪細(xì)胞體積接近正常組；給藥組大鼠的TG顯著低于模型組（P<0.05），GLU、TC、LDL-C水平略低于模型組，但比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論?降濁合劑濃縮液能夠改善肥胖大鼠的體質(zhì)量和皮毛光澤度，緩解脂肪組織變性，降低糖脂指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]?降濁合劑濃縮液；高脂飼養(yǎng)；肥胖；病理變化

[中圖分類號]?R723.14??????[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2023.16.015

Effect?of?concentrated?solution?of?Jiangzhuo?mixture?on?body?weight，?glucose?and?lipid?index?of?obese?rats

SU?Qiong1，?JIANG?Danna2，?ZHONG?Zhao3，?ZHOU?Kai1，?GONG?Wenbo1

1.Department?of?Endocrinology，?Ningbo?Hospital?of?Chinese?Medicine?Affiliated?Zhejiang?Chinese?Medical?University，?Ningbo?315010，?Zhejiang，?China;?2.Department?of?Cardiology，?Ningbo?Hospital?of?Chinese?Medicine?Affiliated?Zhejiang?Chinese?Medical?University，?Ningbo?315010，?Zhejiang，?China;?3.Department?of?Rheumatology，?Ningbo?Hospital?of?Chinese?Medicine?Affiliated?Zhejiang?Chinese?Medical?University，?Ningbo?315010，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?explore?the?effect?of?concentrated?solution?of?Jiangzhuo?mixture?on?body?weight，?glucose?and?lipid?index?of?obese?rats.?Methods?30?SD?rats?were?randomly?divided?into?normal?group，?model?group?and?drug?group，?with?10?rats?in?each?group.?The?rats?in?normal?group?were?given?regular?feed?and?normal?saline?intragastric?administration，?the?rats?in?model?group?were?given?high-fat?feed?and?normal?saline?intragastric?administration，?and?the?rats?in?drug?group?were?given?high-fat?feed?and?Jiangzhuo?mixture?intragastric?administration.?After?8?weeks?of?intervention，?the?general?condition?and?weight?changes?of?each?group?of?rats?were?observed，?hematoxylin?and?eosin?（HE）?staining?was?used?to?observe?the?pathological?changes?of?adipocytes，?and?glucose?（GLU），?total?cholesterol?（TC），?triglyceride?（TG），?low?density?lipoprotein-cholesterol?（LDL-C）?levels?were?compared.?Results?After?intervention，?the?mental?state?and?coat?gloss?of?the?rats?in?drug?group?were?significantly?improved，?and?the?body?weight?at?7-8?weeks?was?significantly?lower?than?that?of?model?group?（P<0.05）.?HE?staining?observation?showed?that?the?white?and?brown?adipocyte?volumes?in?drug?group?were?close?to?those?in?normal?group.?The?TG?of?rats?in?drug?group?was?significantly?lower?than?that?in?model?group?（P<0.05），?the?levels?of?GLU，?TC?and?LDL-C?were?slightly?lower?than?those?of?model?group，?but?there?were?no?statistical?significance?（P>0.05）.?Conclusion?The?concentrated?solution?of?Jiangzhuo?mixture?can?improve?the?weight?and?coat?gloss?of?obese?rats，?relieve?adipose?tissue?degeneration，?and?lower?glucose?and?lipid?index.

[Key?words]?Concentrated?solution?of?Jiangzhuo?mixture;?High?fat?feeding;?Obesity;?Pathological?changes

肥胖癥是一種常見的代謝綜合征，由熱量攝入超過機(jī)體需求，使過量脂肪堆積于體內(nèi)所致。該疾病是多種因素共同作用的結(jié)果，其影響因素包括缺乏鍛煉、高熱量飲食、基因、生活方式等[1]。肥胖是人類健康的主要風(fēng)險因素之一，可引發(fā)糖尿病、胰島素抵抗、心血管疾病等多種慢性疾病，同時還可導(dǎo)致患者自尊心及個人外表滿意度下降，進(jìn)而產(chǎn)生消極心理，甚至引起不良的社會后果[2-5]。由此可見，尋找防治肥胖的有效手段具有重要意義?！吨袊?肥胖醫(yī)學(xué)營養(yǎng)治療專家共識（2016年版）》[6]建議體質(zhì)量指數(shù)>28kg/m2的肥胖者，在飲食管理、行為干預(yù)的基礎(chǔ)上應(yīng)用藥物進(jìn)行減重治療。與合成藥物相比，中藥制劑通常是多藥合用，毒性較小，可對高膽固醇血癥進(jìn)行安全有效的治療，且藥物不良反應(yīng)較少[7]。本研究根據(jù)中藥配伍原則制作降濁合劑濃縮液，采用高脂飼養(yǎng)大鼠建立肥胖模型，探究該中藥湯劑在肥胖大鼠中的治療作用，以期為肥胖癥治療提供可行方案，現(xiàn)報道如下。

1??材料與方法

1.1??實驗動物

本實驗開展于2020年7月至2021年4月，30只SPF雄性SD大鼠，平均體質(zhì)量（120±10）g，由杭州醫(yī)學(xué)院提供并在浙江省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心進(jìn)行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度（22±2）℃，濕度50%～60%，保持光照周期12h/12h晝夜節(jié)律。實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（浙）2019-0002，實驗動物使用許可證號：SYXK（浙）2019-0010。

1.2??主要試劑、材料和儀器

Trizol試劑（Ambion公司，批號：119704）；異丙醇（成都市科龍化工試劑廠，批號：2015122801）；無水乙醇（成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號：2018051801）；二甲苯（北京偶合科技有限公司，批號：01001437-100ml）；蘇木精–伊紅染色（hematoxylin?and?eosin?staining，HE染色）試劑盒（碧云天生物，批號：C0105S）。普通飼料為實驗動物標(biāo)準(zhǔn)飼料，由浙江省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供；造模飼料含食用化豬油15%、蔗糖20%、膽固醇1.2%、膽鹽0.2%，其余63.6%為普通飼料加工而成。降濁合劑組方：生黃芪30g、丹參30g、生蒼術(shù)15g、生薏苡仁30g、生麥芽30g、生扁豆30g、絞股藍(lán)30g、生雞內(nèi)金15g、生葛根30g、生山楂30g、荷葉15g。加水煎制成生藥濃度5g/ml的濃縮液，由寧波市中醫(yī)院提供。

Centrifuge?5810R型離心機(jī)（Eppendorf公司）；AU5831型全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特有限公司）；TP1020-1型組織脫水機(jī)、EG1150型石蠟包埋機(jī)、RM2235型石蠟切片機(jī)（德國萊卡公司）。

1.3??模型制備及動物分組

將大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和給藥組，每組各10只。正常組大鼠予普通飼料喂養(yǎng)。模型組和給藥組大鼠用于構(gòu)建肥胖模型，以高脂飼料足量喂養(yǎng)，自由飲食飲水。肥胖大鼠建模成功的標(biāo)準(zhǔn)為空腹條件下體質(zhì)量超過正常組大鼠平均體質(zhì)量的20%。待模型建立后，模型組大鼠給予蒸餾水10ml/kg灌胃，給藥組大鼠給予降濁合劑濃縮液50g/kg灌胃，正常組大鼠給予蒸餾水10ml/kg灌胃，每日上午灌胃1次。均連續(xù)飼養(yǎng)8周。觀察各組大鼠的一般情況、體質(zhì)量變化，檢測糖脂指標(biāo)，HE染色觀察白色、棕色脂肪細(xì)胞的病理變化。

1.4??觀察指標(biāo)

干預(yù)8周后，觀察大鼠的一般情況，包括體質(zhì)量、體長（大鼠鼻尖至肛門的長度）、精神狀態(tài)、皮毛光澤度等。禁食24h，采用3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，將血液置于離心管4000轉(zhuǎn)/min離心20min，分離血清，采用全自動生化分析儀檢測各組大鼠的血糖（glucose，GLU）、總膽固醇（total?cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low?density?lipoprotein-cholesterol，LDL-C）水平。將大鼠脂肪組織固定于10%中性福爾馬林溶液24h，酒精脫水后，置于二甲苯溶液中透明，然后將組織置于石蠟液中包埋24h，制成4μm的切片，進(jìn)行常規(guī)HE染色，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察脂肪細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。

1.5??統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS?17.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1??三組大鼠的大體形態(tài)比較

干預(yù)8周后，正常組大鼠形體適中、自主活動正常，食欲佳，皮毛光澤、蓬松，大便質(zhì)地硬，對外界反應(yīng)敏捷，飲水量正常；模型組大鼠形體肥胖、活動度下降，食欲下降，皮毛無光澤、蓬松度差，便溏，對外界反應(yīng)能力下降，飲水量減少；與模型組相比，給藥組大鼠活動度較強(qiáng)，食欲可，皮毛光澤及蓬松度好，大便質(zhì)地硬，對外界反應(yīng)能力增強(qiáng)，飲水量較多。干預(yù)后，模型組大鼠的體質(zhì)量均顯著高于正常組（P<0.05）；干預(yù)0～6周，給藥組大鼠的體質(zhì)量均顯著高于正常組（P<0.05），干預(yù)7～8周，給藥組大鼠的體質(zhì)量顯著低于模型組（P<0.05），見圖1。

2.2??三組大鼠的脂肪細(xì)胞病理變化

正常組大鼠的白色脂肪細(xì)胞、棕色脂肪細(xì)胞均呈空泡狀，近似圓形；模型組大鼠的白色、棕色脂肪細(xì)胞體積明顯大于正常組；干預(yù)8周后給藥組大鼠的脂肪細(xì)胞體積與正常組相似，見圖2。

2.3??三組大鼠的生化指標(biāo)比較

干預(yù)8周后，給藥組大鼠的TG顯著低于模型組（P<0.05），GLU、TC、LDL-C水平略低于模型組，但比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表1。

3??討論

肥胖現(xiàn)已成為嚴(yán)重的社會健康問題。研究表明，肥胖不僅影響形體美觀，還可誘發(fā)糖尿病、胰島素抵抗等多種并發(fā)癥，對人民健康造成消極影響[8-9]。中醫(yī)湯藥不良反應(yīng)小，是現(xiàn)階段肥胖治療的較佳方案。中醫(yī)認(rèn)為肥胖是由多種原因?qū)е麦w內(nèi)膏脂堆積過多，《景岳全書·非風(fēng)諸證治法》指出“肥人多有氣虛”，因其“陰盛于陽”，故又“多濕多滯”，以氣虛為本，痰濕氣滯為標(biāo)。治療上以補(bǔ)氣虛為原則。此外，《脾胃論·脾胃盛衰論》中提到肥胖者常見脾胃虛弱，而脾胃虛弱則不能化生氣血精微以養(yǎng)五臟，五臟不興則諸證起，其多見痰濕、水腫。因此在治療肥胖時可采用健脾祛濕之藥物，本研究根據(jù)中藥配伍原則配制降濁合劑濃縮液，試圖為肥胖治療提供一個可行方案。

降濁合劑濃縮液由黃芪、丹參、生蒼術(shù)、生薏苡仁、生麥芽、生扁豆、絞股藍(lán)、生雞內(nèi)金、生葛根、生山楂、荷葉組成。研究表明，黃芪可降低糖尿病大鼠血糖水平[10]；丹參可防止脂肪堆積，提高胰島素敏感性，控制血糖[11]；生蒼術(shù)可健脾燥濕、祛風(fēng)散寒、消腫祛瘀[12]；生薏苡仁長于健脾，利于消腫，對虛胖的療效較好[13]；絞股藍(lán)可降血脂、防治血栓、調(diào)節(jié)血糖，適用于糖尿病肥胖的治療[14]；生扁豆可增強(qiáng)免疫、降血脂，且富含膳食纖維。此外生雞內(nèi)金消食、消積；生葛根生津、止渴；生山楂生津、消食；荷葉升發(fā)清陽、涼血止血。諸藥合用，具有消脂平肝、補(bǔ)腎健脾的功效，可針對性治療由多因素導(dǎo)致的肥胖。為進(jìn)一步確認(rèn)降濁合劑濃縮液對肥胖的作用，本研究進(jìn)行了體內(nèi)驗證。

體質(zhì)量增加是判斷肥胖最直觀的外在特征，同時，肥胖者的脂肪持續(xù)堆積將增加血黏稠度，使動物出現(xiàn)精神狀態(tài)萎靡、皮膚光澤暗淡等不良外在表現(xiàn)。本研究通過對高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠的外在特征觀察發(fā)現(xiàn)，干預(yù)8周后，正常組大鼠形體適中、自主活動正常，食欲佳，皮毛光澤、蓬松，大便質(zhì)地硬，對外界反應(yīng)敏捷，飲水量正常；模型組大鼠出現(xiàn)形體肥胖、活動度下降，食欲下降，皮毛無光澤、蓬松度差，便溏，對外界反應(yīng)能力下降，飲水量減少等表現(xiàn)；與模型組相比，給藥組大鼠活動度較強(qiáng)，食欲可，皮毛光澤且蓬松度好，大便質(zhì)地硬，對外界反應(yīng)能力增強(qiáng)，飲水量較多。降濁合劑濃縮液可顯著改善肥胖大鼠的體質(zhì)量、精神狀態(tài)及皮毛光澤度?；诖耍瑥暮暧^角度可初步判斷，降濁合劑濃縮液對治療肥胖具有一定效果。研究顯示，肥胖大鼠的肝臟細(xì)胞內(nèi)明顯可見氣球樣空泡的單個大脂滴擠向細(xì)胞膜，可見明顯的脂肪細(xì)胞[15-16]。本研究通過對肥胖大鼠脂肪細(xì)胞病理變化觀察發(fā)現(xiàn)，高脂飼養(yǎng)的大鼠的白色、棕色脂肪細(xì)胞體積均明顯變大，而降濁合劑濃縮液可顯著抑制高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞體積增大，提示降濁合劑濃縮液可緩解高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪組織變性。

GLU、TC、TG、LDL-C等升高是冠心病的危險因素，其水平可作為預(yù)測冠心病病情的常規(guī)指標(biāo)，且與肥胖程度呈正相關(guān)[17]。在本研究中，通過檢測GLU、TC、TG、LDL-C水平探究降濁合劑濃縮液對高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠的糖脂影響，結(jié)果顯示，降濁合劑濃縮液可抑制高脂飲食導(dǎo)致的大鼠的GLU、TC、TG、LDL-C水平升高。提示降濁合劑可降低糖脂指標(biāo)，側(cè)面降低冠心病的發(fā)病風(fēng)險。

綜上所述，降濁合劑濃縮液可改善肥胖大鼠的體質(zhì)量和皮毛光澤度，緩解脂肪組織變性，降低糖脂指標(biāo)。

[參考文獻(xiàn)][1] 宮祎慧，?閆彩鳳.?肥胖患者脂肪分布和代謝與骨質(zhì)疏松癥關(guān)系的研究進(jìn)展[J].?中華肥胖與代謝病電子雜志，?2020，?6（1）：?55–57.

[5] 李俊晴，?雷夢媛，?楊艷艷，?等.?人體測量學(xué)指標(biāo)預(yù)測心血管疾病危險因素的研究進(jìn)展[J].?中國全科醫(yī)學(xué)，?2020，?23（35）：?4524–4529.