但英　陳若　何德　李翠新

摘要用4種不同濃度（0.020、0.025、0.050、0.100 g/L）旱柳浸提物對(duì)金線蓮組培苗生根情況進(jìn)行研究，以期改善金線蓮組培苗不易生根的現(xiàn)狀。結(jié)果表明，旱柳浸提物對(duì)金線蓮生根呈低濃度（0.020、0.025 g/L）促進(jìn)、高濃度（0.100 g/L）抑制的趨勢(shì)；相比于對(duì)照組，旱柳浸提物培養(yǎng)組的生根率、根長(zhǎng)和根量均顯著提高，并易對(duì)金線蓮培養(yǎng)基表面下的莖節(jié)上分化出根。

關(guān)鍵詞金線蓮；旱柳浸提物；組織培養(yǎng)；生根

中圖分類號(hào)S682.31文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611（2023）11-0025-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.11.007開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Effect of Salix mandshurica Extract on Rooting of Anoectochilus roxburghii Tissue? Culture? Seedlings

DAN? Ying， CHEN? Ruo， HE? De? et al（College of Life Sciences， Southwest Forestry University / Key Laboratory of Forest Biotechnology in Yunnan， Kunming， Yunnan? 650224）

AbstractThe rooting of tissue cultured seedlings of Anoectochilus roxburghii was studied by using four different concentrations （0.020， 0.025， 0.050 and 0.100 g/L） of Salix mandshurica extracts in order to improve the current situation of difficult rooting of A. roxburghii tissue culture seedlings. The results showed that the extract of S. mandshurica promoted the rooting of A. roxburghii with low concentration （0.020， 0.025 g/L） and inhibited with high concentration （0.100 g/L） and could significantly shorten the culture time of tissue culture rooting. Compared with the control group， the rooting rate， root length and root quantity of S. mandshurica extract culture group were significantly improved. And it was easy to differentiate roots on the stem nodes under the surface of A. roxburghii culture medium.

Key wordsAnoectochilus roxburghii;Salix mandshurica extract;Tissue culture;Rooting

金線蓮（Anoectochilus roxburghii（Wall.）Lind1.），又名金線蘭、烏人參，屬蘭科開(kāi)唇蘭屬單子葉植物［1］，株型小巧，葉脈網(wǎng)狀排列并呈金紅色光澤，觀賞價(jià)值極高［2］，是我國(guó)國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物，素有“金草”“神藥”“藥王”等美稱［3］，其味甘性平，有清涼解毒、滋陰降火、消炎止痛之功效，降血糖，降血壓，利尿，保肝［4］，能祛風(fēng)利濕、平衡陰陽(yáng)、生津養(yǎng)顏、調(diào)和氣血，能全面提高人體免疫力和增強(qiáng)抵抗力。金線蓮對(duì)生境依賴較高，自然界蘊(yùn)含量少，野外繁殖不易，其種子種胚小，需借助真菌共生才能萌發(fā)［5］。隨著人們對(duì)金線蓮藥用價(jià)值的廣泛認(rèn)識(shí)，導(dǎo)致野生金線蓮遭過(guò)度采挖，其生境也受到嚴(yán)重破壞［6-7］。為推進(jìn)金線蓮資源保護(hù)與利用，我國(guó)近些年對(duì)金線蓮組織培養(yǎng)開(kāi)展了廣泛研究，各研究頗有成效，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模人工種植指日可待，但金線蓮組培苗面臨生根較不易、根系弱、根量少、培養(yǎng)周期長(zhǎng)等問(wèn)題［8］。

旱柳（Salix matsudana Koidz）枝條含有水楊酸、水楊苷、水楊醇、鄰苯二酚、對(duì)羥基苯甲酸等多種糖苷類化合物和酚類化合物［9］，對(duì)植物具促進(jìn)生根、發(fā)芽和光合作用等作用。原紅娟等［10］研究發(fā)現(xiàn)，柳枝水浸提液的化感作用對(duì)長(zhǎng)葉梅花鹿水泡（Adromischus marianiae cv.）幼苗主根數(shù)量增加總體上呈促進(jìn)作用，且作用強(qiáng)度和水浸提液的濃度有關(guān)，整體表現(xiàn)出低促高抑的效應(yīng)，旱柳枝條浸提物對(duì)植物根量增加有促進(jìn)作用。筆者以金線蓮組培擴(kuò)繁苗為材料，添加不同濃度旱柳枝條浸提物，研究其對(duì)金線蓮生根的影響，以期改善金線蓮組培苗不易生根的現(xiàn)狀。

1材料與方法

1.1材料試驗(yàn)材料為福建金線蓮組培無(wú)菌苗。

1.2方法

1.2.1金線蓮組培苗培養(yǎng)條件。調(diào)節(jié)金線蓮組培苗培養(yǎng)基pH在5.6～5.8，培養(yǎng)室溫度控制在24～26 ℃，光照強(qiáng)度為1 500～2 000 lx，光照培養(yǎng)時(shí)間控制在12 h/d。

1.2.2金線蓮的繼代增殖。選取分化程度高、叢生芽多的金線蓮無(wú)菌苗作接種材料，將叢生芽適當(dāng)分割，接種至增殖培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+25 g/L蔗糖+6 g/L卡拉膠）中培養(yǎng)。30 d后計(jì)算增殖率，增殖率=m/n，m為增殖后的總苗數(shù)，n為接種的外植體數(shù)。

1.2.3金線蓮的壯苗。黃勇［11］研究表明添加花寶一號(hào)、蛋白胨有利于金線蓮的生根壯苗，添加活性炭有助于節(jié)省培養(yǎng)時(shí)間，獲得較高的質(zhì)量。選取2～3 cm長(zhǎng)的金線蓮叢生芽，其莖節(jié)無(wú)分化幼芽且葉片稍舒展的組培苗接種到壯苗培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基+3 g/L花寶一號(hào)+6 g/L卡拉膠+25 g/L蔗糖+3 g/L蛋白胨+5 g/L活性炭）中，培養(yǎng)30 d后觀察并記錄壯苗情況。

1.2.4旱柳浸提母液的制備。取一年生旱柳枝條，剪成約5 cm小段，自來(lái)水沖洗晾干后放入中藥材粉碎機(jī)中粉碎。稱取100 g旱柳粉碎，加蒸餾水恒溫25 ℃振蕩處理24 h后，用8層紗布過(guò)濾去除雜質(zhì)，定容至500 mL，得到200 g/L旱柳浸提物母液，4 ℃冷藏備用。

1.2.5金線蓮的生根。對(duì)照組培養(yǎng)基：1/2MS+0.5 mg/L NAA+4.0 mg/L IBA+0.1 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+5.5 g/L卡拉膠［11］；4個(gè)試驗(yàn)組為1/2MS培養(yǎng)基分別添加0.020、0.025、0.050、0.100 g/L的旱柳浸提物，對(duì)照組和試驗(yàn)組各接入80瓶壯苗后的金線蓮。40 d記錄根長(zhǎng)、生根率和根增殖率。生根率=（P-L）/P×100%（P為總株數(shù)，L為未生根株數(shù)），根的增殖倍數(shù)=S/T（S為增殖后的總根數(shù)，T為接種的外植體數(shù)）。

2結(jié)果與分析

2.1金線蓮的繼代增殖培養(yǎng)30 d后金線蓮分化出大量的叢生芽，有的叢生芽已變長(zhǎng)、變壯，且莖干尖端分化的葉片多，葉片稍舒展可用于壯苗生根（圖1A）。有的叢生芽處于持續(xù)分化狀態(tài)，且尖端分化葉片不舒展（圖1B）。金線蓮分化誘導(dǎo)出叢生芽效果顯著，30 d的增殖率為3.25。

2.2金線蓮的壯苗通過(guò)觀察并記錄30 d后400瓶苗的壯苗情況，金線蓮的壯苗率達(dá)99.4%。金線蓮植株生長(zhǎng)良好、較為健壯，葉片均舒展，莖干普遍增長(zhǎng)2 cm左右，均可用于生根培養(yǎng)?？梢?jiàn)壯苗后金線蓮葉片舒展、葉面增大、莖干變粗增高（圖2）。

2.3旱柳浸提物對(duì)金線蓮生根的影響添加旱柳浸提物后，金線蓮的生根率與平均根長(zhǎng)均高于對(duì)照組（表1），生根率總體上呈低濃度促進(jìn)、高濃度抑制的作用，旱柳浸提物濃度0.100 g/L時(shí)對(duì)金線蓮組培苗生根率抑制明顯；旱柳浸提物濃度為0.020 g/L時(shí)根的增殖倍數(shù)最高為4.28；平均根長(zhǎng)呈先增加后降低趨勢(shì)，旱柳浸提物的濃度為0.050 g/L時(shí)平均根長(zhǎng)最大為1.67 cm。0.020和0.025 g/L時(shí)生根數(shù)較多（圖3B、C）。對(duì)金線蓮而言，生根的數(shù)目越多，在進(jìn)行移栽時(shí)存活率越高，因此在該試驗(yàn)中，旱柳浸提物濃度為0.020 g/L時(shí)生根效果最好。

添加旱柳浸提物的處理和對(duì)照組的處理金線蓮單個(gè)莖節(jié)均僅生1條根（圖3），具體原因有待進(jìn)一步研究。對(duì)照組不易在培養(yǎng)基表面下的莖節(jié)上分化出根（圖3A），而添加旱柳浸提物后均易在金線蓮培養(yǎng)基表面下的莖節(jié)分化出根（圖3B～F）。

3討論

韓曉紅等［12］發(fā)現(xiàn)添加0.5 mg/L NAA、4.0 mg/L IBA、0.1 mg/L 6-BA激素處理對(duì)金線蓮的根長(zhǎng)、生根率、出根時(shí)間有顯著促進(jìn)作用，但根量影響不顯著，且多以氣生根為主，根呈墨綠色且表面帶有一層小絨毛。而該試驗(yàn)以0.5 mg/L NAA、4.0 mg/L IBA、0.1 mg/L 6-BA作為對(duì)照組，未取得與韓曉紅等［11］一致的研究結(jié)果，而在培養(yǎng)基中添加旱柳浸提物后，金線蓮的根多以培養(yǎng)基表面下的不定根為主，且生根率、根長(zhǎng)、出根時(shí)間和根量均有顯著提高，根細(xì)長(zhǎng)，以翠綠色為主，根尖為白色。

靳松等［13］研究發(fā)現(xiàn)采用0.5 mg/L IBA和0.5 mg/L NAA進(jìn)行生根誘導(dǎo)，在30 d時(shí)取得最好效果，其生根率為84.62%，平均根數(shù)為2.45。該試驗(yàn)與之相比，添加了旱柳提取物后金線蓮的生根率最高為92.9%，平均根數(shù)為4.28，平均根數(shù)約為其2倍，明顯提高了金線蓮生根數(shù)量。

生根是金線蓮快速組培繁殖過(guò)程中較難的一步，生根誘導(dǎo)在根數(shù)上不容易突破，很難突破1個(gè)莖節(jié)上出現(xiàn)2條或以上數(shù)量的根［12］，該試驗(yàn)也未能突破這個(gè)限制，因此如何突破1莖節(jié)上長(zhǎng)2條或者以上的根有待進(jìn)一步研究。

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