生物等效性研究的統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)核查及敏感性分析

李林鶴 （北京大學臨床研究所生物統(tǒng)計部, 北京 100091）

臨床藥物研究需要嚴格、標準、規(guī)范的數(shù)據(jù)管理[1]，眾多文獻闡述了統(tǒng)計分析前臨床試驗數(shù)據(jù)核查的相關問題及改進措施[1-4]，然而，對于統(tǒng)計分析所得數(shù)據(jù)的核查卻鮮有報道。本文以生物等效性（BE）研究為例，介紹統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)核查的要點，包括：試驗分組的隨機數(shù)字表、藥代動力學（PK）主要參數(shù)以及BE 的分析計算數(shù)據(jù)和結果在相應的軟件中是否能夠重現(xiàn)、與原統(tǒng)計分析報告是否一致。同時，統(tǒng)計專業(yè)人員對核查提出的問題進行敏感性分析，并出具相關報告。

1 資料與方法

1.1 資料來源

本文所使用的數(shù)據(jù)來自我部于2019－2021 年間所接受的18 項BE 研究統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)核查的結果，所測試的藥物分別為抗病毒、抗菌藥物以及治療心腦血管疾病、糖尿病等疾病的藥物。

1.2 統(tǒng)計學方法

1.2.1 采用SAS 軟件運行得出隨機數(shù)字表

隨機指利用SAS 軟件中的隨機化功能，事先給出種子數(shù)，進行隨機化分組。該方法簡便易行、可重復、符合隨機化要求[5]。通過SAS 系統(tǒng)的“PROC PLAN SEED=種子數(shù)”過程實現(xiàn)兩組等比例隨機化。例如，將001～010 這10 個數(shù)隨機分配為A、B 兩組，種子數(shù)設定為20 200 506，則生成的結果A 組為002、003、006、008 和009，B 組為001、004、005、007 和010。核查時，只要采用試驗時設定的種子數(shù)，則通過SAS 運行得到的A 組和B 組的數(shù)據(jù)不變。用同樣的隨機種子，通過SAS程序運行，能夠得出相同的隨機表。由此證明研究對象進入試驗組和對照組機會均等。

1.2.2 采用WinNonlin 軟件計算主要PK 參數(shù)、SAS軟件進行BE 評價

BE 指藥學等效制劑或可替換藥物在相同的試驗條件下，給予相同的劑量，其活性成分吸收速度和程度的差異無統(tǒng)計學意義[6]。BE 研究給藥后，通過測量不同時間點的生物樣本（全血、血漿、血清等）藥物濃度，得出藥物濃度-時間曲線，經(jīng)過計算得出血藥濃度-時間曲線下面積（AUC）、藥物達峰濃度（cmax）、達峰時間（tmax）（圖1）等PK 參數(shù)后，再通過統(tǒng)計學分析比較，判斷兩種制劑是否生物等效。

圖1 血藥濃度與時間的關系

目前，BE 評價方法是置信區(qū)間法。當主要PK 參數(shù)AUC 和cmax的幾何均值比值的90%置信區(qū)間在80%～125%內(nèi)時，受試制劑吸收的速度和程度與參比制劑相當，視為生物等效[7]。

核查時，首先需要核對申辦方提供的統(tǒng)計分析前的原始數(shù)據(jù)。統(tǒng)計專業(yè)人員向核查人員展示數(shù)據(jù)傳輸協(xié)議（由申辦方提供）；然后，根據(jù)原始樣本濃度數(shù)據(jù)，現(xiàn)場使用WinNonlin 8.1 軟件處理各組血藥濃度測定數(shù)據(jù)，采用非房室模型計算出主要PK 參數(shù)，包括AUC0-t、AUC0-∞、cmax，其他數(shù)據(jù)則使用SAS 9.4 軟件分析。如果受試制劑與參比制劑的AUC0-t、AUC0-∞和cmax幾何均數(shù)比值的90%置信區(qū)間均落在80%～125%范圍內(nèi)，則兩種制劑生物等效；否則，兩種制劑不存在生物等效。將核查所得結果和結論與原統(tǒng)計分析報告核對，檢查一致性。

2 結果

2.1 一般情況

18 項BE 研究的分組隨機數(shù)字表均可重現(xiàn)；18 項研究均符合生物等效的判定標準，且BE 評價結果與原統(tǒng)計分析報告一致；其中有13 項研究的PK 參數(shù)與原統(tǒng)計分析報告相同，其余5 項研究的PK 參數(shù)則有差異，見“2.2”項。

2.2 問題及處理結果

有12 項研究存在個別樣本采樣時間偏差，其中，2 項研究被要求補充敏感性分析，3 項研究的分析數(shù)據(jù)集被要求進行受試者數(shù)據(jù)的重新納入或剔除后，也進行了敏感性分析。

上述5 項研究敏感性分析的結果顯示：PK 參數(shù)AUC0-t、AUC0-∞和cmax的幾何均值比值的90%置信區(qū)間雖在數(shù)值上有所變化，但仍然在80%～125%范圍內(nèi)，維持原統(tǒng)計分析報告的BE 評價。

3 討論

3.1 BE 研究中隨機化和等效性評價的意義

BE 試驗通常采用隨機交叉等試驗設計，隨機和盲法因其有效控制偏倚而成為BE 試驗注冊和核查的關鍵內(nèi)容[8]。由于隨機化即隨機分配的優(yōu)點，隨機對照試驗被廣泛認為是評價新的藥物、新的醫(yī)療器械或新的治療方法療效的最佳設計[9]，是評價醫(yī)學新療法的金標準[10]。

在過去的二十年里，許多第一代專利藥品的專利和上市許可的到期，導致了仿制藥的興起。進行BE 研究被認為是確定仿制藥與專利藥具有相同的有效性和安全性的關鍵[7]。BE 研究在化學藥物仿制藥的申請、新藥評價以及已上市藥物的變更申請中，具有不可替代的作用[6,8,11]。

3.2 核查發(fā)現(xiàn)的問題

3.2.1 采樣時間偏差

在藥物臨床試驗方案中，試驗期間各個樣本采集的時間點有嚴格規(guī)定。由于操作技術、環(huán)境及其它因素的影響，可能導致樣本采集的時間與計劃采樣時間有所偏差、且超過了方案允許的偏差范圍，這種情況視為超窗[12]。超窗會否影響統(tǒng)計分析的結果，需要通過敏感性分析予以證明。

敏感性分析指通過改變方法、模型、未測量的變量值等考查結果的改變程度，以確定評估方法的穩(wěn)健性。敏感性分析結果與主要分析結果一致，表明主要分析的結果穩(wěn)健，反之亦然[13]。對BE 研究而言，考查的關鍵便是生物等效這一評估結果對PK 參數(shù)的變化是否敏感。

核查發(fā)現(xiàn)，有2 項BE 研究分別存在個別受試者采血時間超窗問題。例如，在某研究中，某受試者計劃采血時間為給藥后5 min，方案規(guī)定的允許偏差范圍為30s 之內(nèi)，但實際采血時間為5min32s，即超窗2s。在原統(tǒng)計分析報告中，PK 參數(shù)按照計劃采血時間加2s，即5min2s 計算。核查人員要求按照實際采血時間重新計算主要PK 參數(shù)，即按照5min32s 計算，并做敏感性分析，與原統(tǒng)計分析結果進行比較，考查所得結論的一致性。

由此可見，對樣本采集的環(huán)節(jié)進行嚴格、科學的管理非常重要。另外，無論采樣時間是否存在偏差甚至超窗，應盡可能獲取所有數(shù)據(jù)，真實記錄采樣時間，并做出敏感性分析報告。

3.2.2 受試者數(shù)據(jù)重新剔除或納入

臨床試驗有效性分析應涵蓋隨機化分組后的所有受試者，而不僅限于實際完成的受試者數(shù)據(jù)。按照這種意向性治療原則所做的分析是最好的分析。

BE 研究的統(tǒng)計分析集除全分析集（FAS）和安全數(shù)據(jù)集（SS）外，最主要的數(shù)據(jù)集為PK 參數(shù)集（PKPS）和BE 集（BES）[14]，BES 是推斷受試制劑和參比制劑是否生物等效的數(shù)據(jù)集。

在撰寫統(tǒng)計報告時，如果剔除了某受試者數(shù)據(jù)，或者有受試者出現(xiàn)種種事故但沒有被剔除，核查時可能被要求重新納入或剔除受試者的數(shù)據(jù)，并進行敏感性分析，以考查是否對最終結果造成影響。例如，某BE 試驗對照組某受試者第二周期無給藥后3.50 h、3.75 h、4.00 h、4.25 h、4.50 h 及以后共13 個時間段的血藥濃度數(shù)據(jù)，原報告將該受試者納入PKPS 與BES，在核查時，將該受試者第二周期剔除PKPS 與BES；或者，原報告將類似受試者剔除PKPS 與BES，核查時又將該受試者重新納入PKPS 與BES。

需要注意的是，BE 研究通常樣本量相對較小，受各種原因數(shù)據(jù)剔除造成數(shù)據(jù)缺失的影響相對較大，可能對BE 統(tǒng)計分析結果的穩(wěn)健性帶來挑戰(zhàn)。因此，BE 研究須嚴格質量管理，事先沒有規(guī)定的不做剔除處理[11]。

4 結論

統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)是臨床研究結果的呈現(xiàn)，是撰寫統(tǒng)計分析報告和臨床研究報告的依據(jù)。為確保臨床研究最終結果和結論沒有爭議，國家藥品監(jiān)督管理局核查中心對藥物臨床研究的統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)進行核查非常必要。

本文從統(tǒng)計學角度介紹了BE 研究統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)現(xiàn)場核查的主要內(nèi)容，并對相關統(tǒng)計方法、核查發(fā)現(xiàn)的問題、原因和對策進行逐一分析和討論?？紤]到BE 研究通常樣本量較小，采樣時間出現(xiàn)偏差、剔除或納入數(shù)據(jù)可能影響統(tǒng)計結果的穩(wěn)健性，因此，敏感性分析在BE 研究中尤為重要，用于評估主要分析結果和結論的穩(wěn)健性。敏感性分析和主要分析結果一致，則補充、鞏固和加強研究結論，進一步證實試驗藥物的有效性和安全性[15-17]。本文建議，BE 研究在統(tǒng)計分析計劃的制定與統(tǒng)計分析報告的撰寫中，對核查的內(nèi)容、可能涉及敏感性分析的相關問題，特別是敏感性數(shù)據(jù)集PKPS 和BES 的調整，應予以充分考慮，以便在數(shù)據(jù)分析階段采用多種敏感性分析方法，綜合考慮結果的穩(wěn)健性，為評估不同制劑臨床治療的可替換性提供扎實的研究數(shù)據(jù)。