頂空氣相色譜法測定鹽酸尼卡地平原料藥的殘留溶劑

高睿 于明 黃海

【摘要】目的：建立鹽酸尼卡地平中多種有機溶劑殘留量的測定方法。方法：采用頂空氣相色譜內(nèi)標法，色譜柱為DB-624毛細管柱（30 m×0.53 mm，3.0μm），載氣為氮氣，氫火焰離子化檢測器，柱溫程序升溫（初始柱溫40℃維持11 min，以40℃·min-1的速率升溫至200℃，維持5 min。結果：7種組分甲醇、乙醚、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和苯，在此條件下能有效分離，線性范圍分別為149.82～898.92μg·mL1（r=0.9997）、264.50～1587.00μg·mL-1（r=0.9994）、252.90～1770.30μg·mL-1（r=0.9979）、250.00～ 1500.00μg·mL-1（r=0.9997）、251.56～1509.36μg·mL-1（r=0.9997）、6.534～22.869μg·mL-1（r=0.9995）、0.242～0.847μg·mL-1（r= 0.9998），平均回收率分別為90.48%（RSD%=3.38%），105.64%（RSD%=3.42%），103.55%（RSD%=3.95%），95.66%（RSD%= 3.83%），104.70%（RSD%=2.85%），94.61%（RSD%=3.59%），99.09%（RSD%=6.21%），（n=9），檢測限（LOD）分別為：0.15，0.026，0.015，0.25，0.25，3.27，0.12μg·mL-1。結論：該方法簡單、準確、靈敏度高、重復性好，適合于鹽酸尼卡地平中殘留溶劑的檢測。

【關鍵詞】鹽酸尼卡地平；頂空氣相色譜法；殘留溶劑

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.01.035

【基金項目】遼寧省自然基金資助計劃（2019-MS-185）。

Determination of Residual Organic Solvents in Nicardipine Hydrochloride by Headspace GC

GAO Rui，YU Ming，HUANG Hai

（Liaoning Institute for Drug Control，Shenyang 110036，China）

Abstract：Objective：To establish a headspace gas chromatography method for the determination of residual solvents in decitabi

ne.Methods：A headspace gas chromatography with an internal standard was used with a capillary column DB-624（30 m×0.53 mm，3.0μm），and with nitrogen as the carrier and an FID as the detector.The column temperature was programmed raising （ the initial temperature was 40℃，maintaining for 11 min，and rose to 200℃at the rate of 40℃·min-1，maintaining for 5 min.Results：The linear range for methanol，methyl formate，acetonitrile and methyl p-toluate was 149.82～898.92μg·mL-1（r=0.9997）、264.50～1587.00μg·mL-1（r=0.9994）、252.90～1770.30μg·mL-1（r=0.9979）、250.00～1500.00μg·mL-1（r=0.9997）、251.56～1509.36μg·mL-1（r=0.9997）、6.534～ 22.869μg·mL-1（r=0.9995）、0.242～0.847μg·mL-1（r=0.9998），respectively.The average recovery was 90.48%（RSD%=3.38%），105.64%（RSD%=3.42%），103.55%（RSD%=3.95%），95.66%（RSD%=3.83%），104.70%（RSD%=2.85%），94.61%（RSD%=3.59%），99.09%（RSD%=6.21%），（n=9），and the LOD were 0.15，0.026，0.015，0.25，0.25，3.27，0.12μg·mL-1，respectively.Conclusion：The method is simple，accurate，sensitive and reproducible.It can be used for the determination of various residual solvents in decitabine.

Key words：Nicardipine hydrochloride；headspace gas chromatography；residual solvents

鹽酸尼卡地平是日本山之內(nèi)制藥株式會社開發(fā)的動脈血管擴張劑，用于缺血性腦血管疾病和原發(fā)性高血壓患者。鹽酸尼卡地平在制備工藝中使用有機溶劑有異丙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、苯、三氯甲烷、甲醇[1～2]，根據(jù)國際人用藥品注冊技術要求國際協(xié)會（ICH）對有機溶劑殘留量測定的指導原則，應對此7種有機組分的殘留進行控制，以確保人體的用藥安全。本試驗根據(jù)文獻[3～7]建立了鹽酸尼卡地平原料藥中殘留有機溶劑的頂空氣相色譜測定方法。

1儀器與試藥

島津GC-2010Plus氣相色譜儀、Satorius分析天平（0.0001 g）BSA224S-CW、7697A頂空進樣器（美國安捷倫科技有限公司）。

無水甲醇（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20170306，含量：≥99.5%）；乙醚（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20170418，含量：≥99.5%）；丙酮（國藥集團化學試劑有限公司，批號：T20090630，含量：≥99.5%）；異丙醇（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20170724，含量：≥99.7%）；乙酸乙酯（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20160902，含量：≥99.5%）；三氯甲烷（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20170215，含量：≥99.0%）；苯（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20061108，含量：≥99.5%）；3批測試樣品（Y201802002、Y201803001、Y201803002）。

2方法與結果

2.1色譜條件

DB-624毛細管柱（30 m×0.53 mm，3.0μm），F(xiàn)ID離子化檢測器，檢測器溫度250℃，進樣器溫度220℃，載氣為氮氣，分流比1，柱流速3.0 mL·mL-1，氫氣流速40 mL·mL-1，空氣流速400 mL·mL-1，柱溫采用程序升溫：初始柱溫40℃維持11 min，以40℃·min-1的速度升溫至200℃，維持5 min。頂空瓶的平衡溫度70℃，平衡時間30 min。

2.2溶液的制備

1）空白溶液，精密量取DMF2 mL，置10 mL頂空瓶中，密封。

2）對照品貯備液，分別精密稱取甲醇0.7491 g、乙醚1.3225 g、丙酮1.2645 g、異丙醇1.2500 g、乙酸乙酯1.2578 g，置50 mL量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻，分別制成上述各對照品貯備液。

精密稱取三氯甲烷0.6534 g，置20 mL量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻，制成三氯甲烷對照品貯備液。

精密稱取苯0.1209 g，置100 mL量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻，制成苯對照品貯備液。

3）對照品溶液，取對照品貯備液各1.0 mL置100 mL量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密量取 2 mL，置10 mL頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。

4）供試品溶液，精密稱取鹽酸尼卡地平樣品0.4 g，置于10 mL頂空瓶中，精密加入DMF2 mL，振搖溶解，密封，作為供試品溶液。

2.3專屬性與系統(tǒng)適用性試驗

在上述色譜條件下，將對照品溶液和空白溶液分別進樣。

結果表明：空白溶劑（見圖1）對甲醇、乙醚、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和苯的檢測均無干擾，方法專屬性符合要求；各組分均能完全分離（見圖2）。

2.4線性關系考察

分別精密量取各對照品貯備液1 mL，2 mL，3 mL，5 mL，6 mL，7 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻；再分別精密量取線性對照溶液2 mL，置10 mL頂空瓶中，密封，測定：以濃度為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸。

結果表明：在濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關系（見表1及圖3）。

2.5重復性試驗

分別精密量取各對照品貯備液4 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液。精密量取2 mL，置10 mL頂空瓶中，密封按“2.2，步驟4）”項下方法平行制備6份對照品溶液，測定峰面積。

試驗結果：甲醇、丙酮的RSD%分別為5.0%，2.86%（n=6），見表2，符合《中華人民共和國藥典（2020年版）》殘留溶劑重復性要求（RSD%≤5%）。

2.6檢測限和定量限的測定

取對照品溶液用稀釋劑逐級稀釋，置頂空瓶中進樣，重復測試3次，按信噪比（S/N）10和3，測得甲醇、乙醚、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、苯的檢測限結果見表3。

2.7回收率試驗

分別精密量取“2.2，步驟2）”項下的對照品貯備液2 mL、4 mL、5 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀釋至刻度，制成50%、100%、125%三個濃度的混合對照品溶液。精密稱取已知殘留溶劑量的鹽酸尼卡地平（批號為130902）0.4 g，共9份，分別置10 mL頂空瓶中，密封，作為供試品溶液。檢測并記錄色譜圖，計算回收率。甲醇、乙醚、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、苯的平均回收率分別為：90.48%（RSD%=3.4%），105.64%（RSD% =3.4%），103.55%（RSD% =4.0%），95.66%（RSD% =3.8%），104.70%（RSD% =2.8%），94.61%（RSD% = 3.6%），99.09%（RSD%=6.2%），（n=9），均在80%～120%之間，符合殘留溶劑準確度測定的要求。

2.8樣品測定

按“2.2，步驟4）”項下方法制備供試品溶液，分別取每一份供試品溶液置頂空瓶中進樣，各平行測試2次，計算樣品中的有機溶劑殘留量，含量均在規(guī)定限度范圍之內(nèi)。結果見表4。

3討論

1）溶劑的選擇。鹽酸尼卡地平在水中幾乎不溶，故以DMF為溶劑。

2）根據(jù)文獻報道，經(jīng)試驗確定在中等極性色譜柱系統(tǒng)條件下，采用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或極性相近）為固定液的毛細管色譜柱，起始溫度為40℃時，甲醇、乙醚、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和苯能夠有效分離。為保證混合對照品溶液中限度和檢測靈敏度較低的苯和三氯甲烷能夠有效檢出，分流比設定為1，丙酮和異丙醇則因濃度較大不能達到基線分離，故將二者分離度定為不小于1.4；其他色譜峰的分離度均能滿足ICH和《中國藥典》中的規(guī)定[8～9]。試驗證明，此條件下，分離效果較好，靈敏度高，重現(xiàn)性好。

3）鹽酸尼卡地平分子結構中還有甲氧基，在較高頂空溫度下有可能發(fā)生熱裂解產(chǎn)生甲醇，進而影響樣品中甲醇殘留量的測定，故選擇70℃平衡30分鐘的頂空條件。

4小結

本試驗采用頂空色譜法，對3批次鹽酸尼卡地平原料藥中有機溶劑殘留物進行了檢測，工藝中使用的有機溶劑檢出甲醇和丙酮，其他有機溶劑均小于藥典規(guī)定限度[8]，其他有機溶劑未檢出。該方法簡單、準確、靈敏度高、重復性好，適合于鹽酸尼卡地平中殘留溶劑的檢測。

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【作者簡介】

高睿，男，1983年出生，主管藥師，研究方向為化學藥品質(zhì)量分析及標準起草工作。

（本稿審讀：龐燕軍）