高效液相色譜法測定化妝品中7種防腐劑

程紅新 王福鑫

【摘要】為擴(kuò)大檢驗(yàn)范圍，優(yōu)化化妝品檢驗(yàn)?zāi)芰?，本研究建立了高效液相色譜法同時測定化妝品中己脒定二鹽等7種防腐劑的含量。對不同基質(zhì)類型的化妝品樣品加入提取溶劑超聲提取，提取液經(jīng)高速離心處理，上清液以正己烷脫脂，經(jīng)0.45微孔濾膜過濾后取續(xù)濾液測定。色譜柱為C18（4.6 mm×250 mm，5μm），以0.1%三氟乙酸水溶液和乙腈為流動相梯度洗脫，檢測器為二極管陣列檢測器（DAD），采用外標(biāo)法定量。在該條件下，7種防腐劑均在其線性范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)≥0.997。三種不同劑型空白基質(zhì)在低、中、高3個質(zhì)量濃度加標(biāo)水平下，方法的平均回收率為99.6%～111.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）≤2.9%。該測定方法具有特異性顯著，靈敏度、準(zhǔn)確度高，適用于化妝品中該類防腐劑的檢測。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；化妝品；防腐劑；己脒定二鹽；氯己定；苯扎氯銨；芐索氯銨

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.03.032

Determination of 7 Kinds of Preservatives in Cosmetics by HPLC

CHENG Hongxin，WANG Fuxin

（Liaoning Institute for Drug Control，Shenyang 110036，China）

Abstract：To expand detection range and modify the needs of inspection in cosmetics，the determination of hexamidine and other 6 kinds of preservatives was established by performance liquid chromatography .Different forms of cosmetic samples were treated by ultrasonic extration，the extration solution was obtained by high-speed centrifugation，the supernatant was degreased by hexane and then filtered by 0.45μm millipore filter. Chromatographic operation was conducted on C18 column（4.6 mm×250 mm，5μm）by a gradient elution of 0.1% aqueous trifluoroacetic acid solution and acetonitrile. The detection was completed using a diode array detector（DAD）. The external standard method was used for quantitation. Under the optimum conditions，good linearity was observed over a certain range of concentration，the results showed that their linear ranges were above 0.997，the mean recoveries were 99.6% to 111.1%，relative standard deviation was below 2.9%（n=6）at three mass concentration gradients of low，medium and high for three different types of matrixes. The method was proved to be high specified，sensitive and accurate，it could be used in the practical determination of commercial cosmetics.

Key words：HPLC；preservatives；cosmetics；hexamidine；chlorhexidine；benzalkonium chloride；benzethonium chloride

己脒定二（羥乙基磺酸）鹽是一種針對細(xì)菌、霉菌和酵母的廣譜水溶性陽離子抗微生物劑，可被用作多效防腐劑、皮膚滅菌劑等，在化妝品工業(yè)中應(yīng)用廣泛。其具有很好的抗痘、控油、抗刺激、抗頭皮屑作用。氯己定及其鹽是一類常用的皮膚黏膜消毒劑，其具有腐蝕低、殺菌效果好、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于化妝品配方中。苯扎氯銨主要由十二烷基二甲基芐基氯化銨（勞拉氯銨）、十四烷基二甲基芐基氯化銨十六烷基二甲基芐基氯化銨（西他氯銨）3種同系物組成。苯扎氯銨、十二烷基三甲基溴化銨及芐索氯銨均為季銨鹽型陽離子表面活性劑。該類產(chǎn)品具有高效、低毒的特點(diǎn)，對人體器官、皮膚無腐蝕、無刺激。作為陽離子表面活性劑，季銨鹽除具有殺菌作用外，還兼有防腐作用，已廣泛應(yīng)用于日化領(lǐng)域。

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）以下簡稱《規(guī)范》，將己脒定二（羥乙基磺酸）鹽、氯己定、十二烷基三甲基溴化銨、十二烷基二甲基芐基氯化銨、十四烷基二甲基芐基氯化銨、芐索氯銨、十六烷基二甲基芐基氯化銨均列為化妝品限用物質(zhì)。為了防止生產(chǎn)廠家在化妝品中違規(guī)超量添加此類限用物質(zhì)，有必要建立對此類限用物質(zhì)的檢驗(yàn)方法。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器、材料與試劑

1.1.1儀器

L-2000高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器（日本Hitachi公司）、高速離心機(jī)（美國BECKMAN COULTER公司）、XS105型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、VORTEX3渦旋混合器（德國IKA公司）；As3120超聲清洗儀（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；Milli-Q超純水機(jī)（美國Millipore公司）；0.45μm濾膜。

1.1.2材料與試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：己脒定二（羥乙基磺酸）鹽、氯己定、十二烷基三甲基溴化銨、十四烷基二甲基芐基氯化銨購于BePure公司；十二烷基二甲基、芐基氯化銨、芐索氯銨、十六烷基二甲基芐基氯化銨購于Otric公司，標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于97%。試劑：甲醇、乙腈、甲酸、正己烷、三氟乙酸（色譜純）購于美國Merk公司；乙二胺四乙酸二鈉（分析純）購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。樣品：膏霜、爽身粉和唇膏3種不同劑型的化妝品樣品共20批，均購于商場和化妝品專賣店。

1.1.3試液配制

0.1%三氟乙酸溶液：準(zhǔn)確稱取乙二胺四乙酸二鈉0.0067 g，溶解于水，加入1.00 mL三氟乙酸，用水稀釋至1000 mL，混勻。提取溶劑：準(zhǔn)確量取甲酸溶液5 mL，用水稀釋至500 mL，再準(zhǔn)確加入500 mL甲醇，混勻。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制

準(zhǔn)確稱取己脒定二（羥乙基磺酸）鹽等7種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量至同一10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容，配制成標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液；再分別精密移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于10 mL容量瓶中，用提取溶劑稀釋并定容，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（見表1）。

1.2.2樣品前處理

稱取樣品1.0 g（精確到0.001 g）于15 mL具塞離心管中，加入提取溶劑8 mL，渦旋振蕩30 s，使試樣與提取劑充分混勻，超聲提取30 min，用提取溶劑定容至10 mL，再加正己烷2 mL，渦旋振蕩60 s，以10000 rpm離心5 min，取下層溶液，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，濾液作為待測溶液。

化妝水、膏霜、乳液可以直接加入提取溶劑；粉類基質(zhì)樣品先加1 mL水，蠟基樣品先加入1 mL～2 mL四氫呋喃，使樣品均勻分散，再加入提取溶劑超聲提取。

1.3液相色譜分離條件

色譜柱：C18，4.6 mm×250 mm 5μm；流動相：溶液A為0.1%三氟乙酸水溶液；溶液B為乙腈；梯度洗脫程序：（0～2 min：10%B；2～2.1 min：10%～30%B；2.1～45 min：30%～ 59.6%B；45～45.1 min：59.6%～10%B；45.1～52 min：10%B）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。在該色譜條件下，取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別進(jìn)樣，進(jìn)行色譜分析。混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。

2結(jié)果與討論

2.1不同基質(zhì)化妝品前處理方法的選擇

不同基質(zhì)的化妝品基質(zhì)差異很大?；瘖y水、膏霜、乳液等屬于水包油劑型，易溶于水，可以直接加入提取溶劑；粉類基質(zhì)樣品主要成分為滑石粉、膨潤土等，先加1 mL水可以避免粉塵外溢被人體吸入；蠟基樣品屬于油溶性物質(zhì)，先加1～2 mL四氫呋喃，使樣品處于均勻的液態(tài)，利于待測物質(zhì)提取。

2.2檢測波長的選擇

實(shí)驗(yàn)表明，7種防腐劑在210 nm處都有較大的紫外吸收。選擇此波長作為檢測波長，即能夠滿足檢出限需求，又能簡化實(shí)驗(yàn)操作步驟。

2.3流動相比例的調(diào)整

由于十二烷基二甲基芐基氯化銨和芐索氯銨出峰時間非常接近，故采用梯度洗脫程序，流動相溶液A配制應(yīng)盡可能保持一致，避免因重復(fù)調(diào)整流動相比例而導(dǎo)致工作量增加。

2.4線性范圍、檢出限（LOD）與定量限（LQD）

取標(biāo)準(zhǔn)溶液按濃度從低到高順序經(jīng)液相色譜測定，以標(biāo)準(zhǔn)使用液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析。同時，試驗(yàn)采用膏霜空白樣品中添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級稀釋，測定方法的檢出限和定量限，以S/N=3和S/N=10質(zhì)量濃度作為方法檢出限（LOD）和定量限（LQD），結(jié)果見表2。由表2可知，7種防腐劑在質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，各化合物線性相關(guān)系數(shù)均≥0.997，線性關(guān)系良好，LOD和LQD滿足方法要求。

2.5方法回收率與精密度

稱取膏霜、爽身粉及唇膏空白化妝品樣品1 g（精確至0.001 g），分別添加低、中、高濃度3個水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，低、高濃度各取3份，中濃度各取6份，按照本方法進(jìn)行分析測定，以隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，得到3種劑型低、中、高濃度的回收率及精密度，測得結(jié)果均具有良好的回收率及重現(xiàn)性，測定結(jié)果見表3、表4、表5。

2.6樣品測定

用本研究建立的方法對市售膏霜、爽身粉和唇膏3種不同基質(zhì)20批化妝品樣品進(jìn)行測定，結(jié)果均未檢出上述7種防腐劑。

3結(jié)論

本研究建立和優(yōu)化了以高效液相色譜法測定化妝品中己脒定二鹽等7種防腐劑的檢測方法。該方法可有效去除化妝品中的復(fù)雜基質(zhì)，具有靈敏度高，定量準(zhǔn)確，適用于膏霜類、粉類和蠟基類化妝品中此7種防腐劑的檢驗(yàn)需求。

【參考文獻(xiàn)】

[1]蘇強(qiáng)，郭建維，鄭生華.新型殺菌劑——己脒定二羥乙基磺酸鹽的特性及其應(yīng)用[J].日用化學(xué)品科學(xué)，2011，34（8）：35-37.

[2]孟憲雙，馬強(qiáng)，白樺，等.化妝品中己脒定與氯己定及其鹽類的超高效液相色譜法測定及質(zhì)譜確證[J].分析測試學(xué)報(bào)，2016，35（5）：574-578.

[3]張朝武.應(yīng)用廣泛的季銨鹽類消毒劑[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006（5）：855-857.

[4]薛文青，薛廣波.季銨鹽類陽離子表面活性消毒劑研究進(jìn)展[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2002，12（8）：634-636.

[5]原國家食品藥品監(jiān)督管理總局.化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015版）[S].

[6]謝瑜，張昌輝，徐旋.聚合季銨鹽陽離子表面活性劑的合成和性能研究[J].日用化學(xué)品科學(xué)，2008（2）：21-24.

【作者簡介】

程紅新，女，1966年出生，高級工程師，研究方向?yàn)槭称?、化妝品檢驗(yàn)。

王福鑫，男，1984年出生，副主任藥師，博士，研究方向?yàn)榛瘖y品安全及功效評價(jià)。

（編輯：侯睿琪）