李建平

中圖分類號：S858.32 文獻標識碼：C 文章編號：1673-1085（2023）08-0065-04

禽致病性大腸桿菌是養(yǎng)殖業(yè)常見的一種病原，可以感染雞、鴨和鵝等多種禽類，使發(fā)病禽產生敗血癥、腹膜炎、氣囊炎、輸卵管炎、腫頭綜合征等癥狀。各種日齡的禽均可感染，對雛禽的致病力較強，每年給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重經(jīng)濟損失。該病流行沒有明顯的季節(jié)性，一年四季均可發(fā)生，主要發(fā)生在以冬春氣溫較低及氣溫變化較頻繁和空氣濕度較大的季節(jié)。大腸桿菌的主要傳播途徑為呼吸道傳播，還可通過垂直傳播、消化道傳播等。鴨疫里默氏桿菌（RA）主要侵害雛鴨，急性發(fā)病引起食欲和飲水明顯減少、精神萎靡、排黃綠色糞便、死前呈現(xiàn)角弓反張等神經(jīng)癥狀；慢性發(fā)病鴨耐過后會出現(xiàn)生長緩慢、體積小、淘汰率較高。臨床上常與大腸桿菌混合感染，而且在臨床癥狀和病理變化和流行病學等方面，二者容易混淆，增加了診斷和防控的難度。

2023年2月，江西黎川社平鄉(xiāng)某鴨場10日齡雛番鴨發(fā)生包心、包肝和歪脖、轉頭等明顯癥狀，綜合臨床診斷、病理變化以及細菌分離和PCR分子技術等手段，最終確診為大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌感染?，F(xiàn)將這起混合感染診治情況報告如下：

1 發(fā)病情況

2023年2月一場主從安徽某種鴨場引進5 000羽肉番鴨苗，已在3 d內注射過鴨肝+大舌二聯(lián)抗體，進苗后7 d養(yǎng)殖戶接種了鴨黃病毒+禽流感H9亞型二聯(lián)滅活苗。第10天，發(fā)現(xiàn)鴨苗精神沉郁，部分出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，并死亡50羽左右。養(yǎng)鴨場主緊急使用鴨細小病毒抗體注射1 mL/羽，并用氟苯尼考+某中藥拌料4 d，病情沒有好轉，死鴨數(shù)量持續(xù)上升，第15天死鴨數(shù)增加到一天100羽左右。

2 臨床癥狀

發(fā)病鴨精神沉郁，有明顯歪脖、轉頭神經(jīng)癥狀（圖1），網(wǎng)床下面白色糞便偏多，糞便稀薄，增料不明顯。

3 病理變化

現(xiàn)場解剖病死鴨，典型病變集中在心臟和肝臟上。肝臟出血、腫大，心包膜增厚、外覆一層纖維素性膜，見圖2；有的心臟、肝臟均被一層白色纖維素膜包裹，呈典型的包心、包肝（圖3）；腹膜炎，小腦內膜出血等病癥。

4 實驗室診斷

4.1 細菌分離與鏡檢

細菌分離：將無菌采集的病鴨肝臟劃線接種于麥康凱平板，在37 ℃培養(yǎng)24～48 h，在平板上生長出表面光滑的圓形粉紅色菌落（圖4）。

4.2 革蘭氏染色鏡檢

按上述操作，挑取單個菌落在麥康凱培養(yǎng)基進行劃線培養(yǎng)，然后挑出純培的單個菌落進行涂片、干燥、固定。滴加結晶紫染色約1 min，水洗；用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1 min；滴加95%酒精，脫色約30 s，立即水洗；最后，用番紅液復染約1 min，水洗；干燥后，用油鏡觀察。鏡檢結果為革蘭氏陰性、兩端鈍圓的小桿菌，單個或成對存在（圖5）。符合大腸桿菌形態(tài)特征。4.3 PCR診斷

將無菌采集的4個鴨頭送往南京農業(yè)大學動物醫(yī)學院進行PCR檢測。

4.3.1 樣品處理 將鴨頭接種于血-麥康凱平板上，放置 CO2 培養(yǎng)箱37 ℃培養(yǎng)24～48 h，培養(yǎng)基上長出許多菌落，見圖6。

4.3.2 PCR檢測 引物設計與合成：以鴨疫里默氏桿菌ompA基因為模板設計種屬特異性引物，引物序列：F： TTAACTAAGAACTTTG，R： CAGATGCAGCTCTTT，預期擴增片段大小684 bp，引物由北京擎科生物有限公司合成。

PCR反應條件：預變性95 ℃ 5 min，變性95 ℃ 30 s，退火55 ℃ 30 s，延伸72 ℃ 15 s，循環(huán)30次，最后72 ℃再延伸7 min。取PCR產物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，以Marker 2000作為標準DNA分子量，觀察擴增片段大小。

PCR檢測結果：結果顯示在2-4和4所在的684 bp處有一特異性條帶，與預期片段大小一致。結果見圖7。

根據(jù)血-麥分離培養(yǎng)結果和PCR鑒定結果，判斷4個送檢的鴨頭樣品中有2個存在鴨疫里默氏桿菌。

4.4 診斷結果

根據(jù)臨床癥狀、病理變化以及實驗室診斷結果，最終確認此次番鴨場發(fā)病是大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌混感引起。

5 藥敏試驗

將經(jīng)過分離純培養(yǎng)的菌株使用K-B紙片法進行藥敏試驗，37 ℃培養(yǎng) 24 h，測量氨芐西林、鏈霉素、氟苯尼考、磷霉素、利福平等15種藥物藥敏紙片的抑菌圈直徑大小，結果按美國臨床和實驗室標準協(xié)會 （ CLSI） 的標準判斷。藥敏試驗結果顯示，該菌對環(huán)丙沙星、氧氟沙星和磷霉素比較敏感。藥敏試驗結果見表1。

6 小結與討論

6.1 經(jīng)調查發(fā)現(xiàn)，此次鴨場發(fā)病主要是因為養(yǎng)殖戶盲目保溫致使棚內出現(xiàn)高溫高濕，以及未及時清除網(wǎng)床下面糞便，導致舍內環(huán)境惡劣而誘發(fā)。

6.2 大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌屬于條件性致病菌，在自然界和動物體內廣泛存在，當飼養(yǎng)管理不當、環(huán)境衛(wèi)生差以及氣候突變、免疫接種等應激都會增加番鴨對這兩種菌的易感性。因此，加強飼養(yǎng)管理、防應激、改善環(huán)境衛(wèi)生是預防大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌病的重要措施。

6.3 在臨床上，大腸桿菌對多種藥物耐藥，給防治帶來很大困難，因此用藥治療前應先進行細菌分離和藥敏試驗篩選高敏藥物。本試驗藥敏結果顯示，大腸桿菌對環(huán)丙沙星、氧氟沙星和磷霉素比較敏感，由于氧氟沙星已被禁止在所有動物中使用，可以選擇環(huán)丙沙星或磷霉素治療大腸桿菌。

7 治療

本次治療選用10%乳酸環(huán)丙沙星（1 L水加0.8 g）與硫酸粘菌素（1 L水添加0.6 g）集中混飲，每日1次，當餐用完，連用藥3 d；治療同時額外給病鴨補充優(yōu)質維生素、微生態(tài)制劑，提高機體抵抗力和修復腸道粘膜；及時清除糞便，加強環(huán)境消毒，用聚維酮碘、戊二醛按1：300比例兌水交替噴灑使用，每日1次。鴨群死亡數(shù)得到控制，病情好轉，采食量明顯增加。