嗎替麥考酚酯片與原研制劑溶出行為一致性評價

伊磊,劉慶曉,鄭華,盧紅華,張貴民

(魯南制藥集團股份有限公司 國家手性制藥工程技術(shù)研究中心,山東 臨沂 273400)

嗎替麥考酚酯是麥考酚酸(MPA)的2-乙基酯類衍生物。MPA是高效、選擇性、非競爭性、可逆性的次黃嘌呤單核苷酸脫氫酶(IMPDH)抑制劑,可抑制鳥嘌呤核苷酸的經(jīng)典合成途徑,抑制有絲分裂和同種特異性刺激物引起的T和B淋巴細(xì)胞增殖,還可抑制B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體,抑制淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞糖蛋白的糖基化,因此可抑制白細(xì)胞進入炎癥和移植物排斥反應(yīng)部位[1]。嗎替麥考酚酯片由羅氏(Roche)研發(fā),與皮質(zhì)類固醇以及環(huán)孢素或他克莫司同時應(yīng)用,適用于治療接受同種異體腎臟、肝臟移植的患者中預(yù)防器官的排斥反應(yīng),以及適用于III-V型成人狼瘡性腎炎患者的誘導(dǎo)期治療和維持期治療[2-4]。嗎替麥考酚酯片先后在美國、歐盟、日本和中國等國家上市,商品名為Cellcept?,規(guī)格為0.5 g。之后,原研地產(chǎn)化也在中國獲批上市,商品名為驍悉?,規(guī)格為0.5 g。

固體藥物的溶出對吸收具有重要影響,因此藥物在體外的溶出行為有可能預(yù)測其體內(nèi)行為,同時藥物體外溶出行為能夠在一定程度上反映出制劑的質(zhì)量[5]。本研究對自研制劑和原研制劑在模擬人體消化道內(nèi)體液的四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線進行研究,并對其進行體外溶出行為的一致性評價。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UDT-812A-12型智能溶出儀(祿亙儀器設(shè)備有限公司);FADT-1200RC型智能溶出儀(上海富科思分析儀器有限公司);MDS-600PL型真空脫氣機(祿亙儀器設(shè)備有限公司);Evolution 300型紫外可見分光光度計(型號:,賽默飛世爾科技有限公司);XS205型電子天平(梅特勒托利多科技有限公司);MS 204 TS型電子天平(梅特勒托利多科技有限公司);Sevencompact 型pH計(梅特勒托利多科技(中國)有限公司)。

1.2 試藥與試劑

嗎替麥考酚酯對照品(含量:99.8%,中檢院);嗎替麥考酚酯片原研制劑(商品名:驍悉?,規(guī)格:0.5 g,批號:M3567B01,上海羅氏制藥有限公司);嗎替麥考酚酯片(規(guī)格:0.5 g,批號:ZY01,ZY02,ZY03,魯南制藥集團股份有限公司)。

乙腈為色譜純(Merk);鹽酸,氫氧化鈉,乙酸鈉,冰醋酸,磷酸二氫鉀等均為分析純;水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出測定方法的建立

參考FDA和PMDA公布的原研制劑信息,經(jīng)一系列研究,初步建立了體外溶出測定方法。具體方法如下。

取本品,照溶出度與釋放度測定法(中國藥典2020年版第四部通則0931第二法),分別以pH值1.0鹽酸溶液、pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)各900 mL為溶出介質(zhì),轉(zhuǎn)速為50 r/min,依法操作,取溶液適量,棄去初濾液2 mL,精密量取續(xù)濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,用溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,照紫外-可見分光光度法(中國藥典2020年版第四部通則0401),在250 nm的波長處測定吸光度;另取嗎替麥考酚酯對照品適量,精密稱定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀釋制成每1 mL中約含2.7 mg的溶液,搖勻,精密量取1 mL,置100 mL容量瓶中,用溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,同法測定,計算每片的溶出量。

2.2 方法學(xué)驗證

2.2.1 專屬性

取本品空白輔料適量(相當(dāng)于本品1片)置1 000 mL容量瓶中,加900 mL溶出介質(zhì)稀釋,超聲溶解。精密量取續(xù)濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,依法測定。結(jié)果表明,空白輔料不干擾本品溶出度的檢測。

2.2.2 線性與范圍

取嗎替麥考酚酯對照品適量,精密稱定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀釋制成每1 mL中約含2.7 mg的溶液,作為對照品溶液。精密量取1 mL,置10 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,作為線性溶液。再分別精密量取0.1,0.2,0.4,0.8,1.0,1.2 mL,各置10 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,依法測定。結(jié)果見表1。

表1 線性與范圍試驗結(jié)果

結(jié)果表明,r≥0.990截距≤2.0%,四種溶出介質(zhì)中嗎替麥考酚酯質(zhì)量濃度在2.77～32.86 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3 中間精密度試驗

取本品,由不同試驗人員,在不同時間采用不同實驗儀器依法測定,計算12份供試品溶出度的RSD值,結(jié)果見表2。結(jié)果表明本方法中間精密度良好。

表2 中間精密度結(jié)果(n=12)

2.2.4 準(zhǔn)確度試驗

精密量取“2.2.2線性與范圍”項下對照品溶液1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

稱取空白輔料適量(相當(dāng)于0.5 g嗎替麥考酚酯),置100 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)超聲溶解并稀釋至刻度,搖勻,濾過,作為空白輔料溶液。

供試品溶液配制:精密量取“2.2.2線性與范圍”項下對照品溶液和空白輔料溶液各1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,作為100%濃度供試品溶液,同法分別配制10%,40%,80%,120%濃度的供試品溶液,每個濃度配制3份。

分別取對照品溶液和供試品溶液,依法測定。結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗結(jié)果

結(jié)果表明,本法測定溶出度的回收率均值在95%～105%,RSD均小于2.0%,準(zhǔn)確度好。

2.2.5 濾膜吸附性試驗

取本品1片,置1 000 mL容量瓶中,分別加溶出介質(zhì)900 mL,超聲使溶解;分別取離心(轉(zhuǎn)速:8 000 r/min)的上清液及用濾膜(材料:水系PES;規(guī)格:0.45 μm;廠家:津隆?)棄去1,2,3,4,5,6 mL初濾液后的續(xù)濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,用溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,依法測定。將經(jīng)過離心處理的樣品吸光度作為100%,過濾處理的樣品吸光度與之進行對比。結(jié)果見表4。

表4 濾膜吸附性試驗結(jié)果

結(jié)果表明,嗎替麥考酚酯在四種溶出介質(zhì)中棄去2 mL時,變化值小于2%,說明嗎替麥考酚酯在四種溶出介質(zhì)中棄去2 mL 即可達到飽和。

2.2.6 溶液穩(wěn)定性

取嗎替麥考酚酯對照品適量,精密稱定,加乙腈-水(V乙腈∶V水=50∶50)溶解并稀釋制成每1 mL中約含2.7 mg的溶液,精密量取1 mL,置100 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液,室溫放置。

取本品1片,置1 000 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)900 mL超聲使溶解,濾過,取續(xù)濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,作為供試品溶液,室溫放置。

對照品溶液和供試品溶液分別于0,2,4,12,24 h測定,記錄吸光度,計算RSD值。結(jié)果表明:室溫條件下,對照品溶液和供試品溶液24 h內(nèi)吸光度的RSD均小于2%,溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 溶出儀耐用性

按照“2.1溶出測定方法的建立”項下方法,通過改變?nèi)艹鰞x的轉(zhuǎn)速及水溫,考察溶出儀的耐用性,具體試驗條件為:A、改變波長:245,255 nm;B、改變轉(zhuǎn)速:48,52 r/min;C、改變水溫:36,38 ℃。結(jié)果顯示,改變轉(zhuǎn)速和水溫時,于各溶出介質(zhì)溶出終點取樣,精密量取續(xù)濾液1 mL,置20 mL容量瓶中,加溶出介質(zhì)稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。實驗結(jié)果表明,與標(biāo)準(zhǔn)條件相比,改變?nèi)艹鰞x的轉(zhuǎn)速及水溫,溶出度無明顯差異。說明本品的溶出度受溶出儀參數(shù)波動影響較小,耐用性良好。

2.3 自研制劑與原研制劑溶出曲線比較

取自研制劑(批號:ZY01、ZY02、ZY03)及原研制劑(批號:M3567B01)每批樣品各12片,照“2.1溶出測定方法的建立”項下方法測定四種溶出介質(zhì)中的溶出度,繪制溶出曲線,如圖1～4所示,并比較自研制劑與原研制劑溶出行為的相似性。

圖1 自研制劑與原研制劑溶出曲線(pH值1.0鹽酸溶液)

圖2 自研制劑與原研制劑溶出曲線(pH值4.5醋酸鹽緩沖液)

圖3 自研制劑與原研制劑溶出曲線(pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS))

圖4 自研制劑與原研制劑溶出曲線(水(含0.8%SDS))

自研制劑與原研制劑對應(yīng)介質(zhì)的溶出曲線采用f2因子計算相似性。自研制劑和原研制劑在pH值1.0鹽酸溶液中15 min溶出度大于85%,無需比較f2,對自研制劑和原研制劑在pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)溶出結(jié)果比較f2,結(jié)果見表5。結(jié)果顯示,三批自研制劑和原研制劑在pH值1.0鹽酸溶液中15 min溶出度大于85%,相似。三批自研制劑在pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)四種溶出介質(zhì)中相似因子均大于50(f2≥50),說明自研制劑與原研制劑在四種溶出介質(zhì)中的溶出行為均相似。

表5 相似性(f2)結(jié)果

3 討論

藥物體外溶出試驗是評價口服固體制劑質(zhì)量的一種重要手段,藥物體外溶出程度對人體吸收有著重要的影響[6]。本研究建立了可靠的體外溶出測定方法,對自研制劑與原研制劑體外溶出行為進行了一致性評價。經(jīng)研究,自研制劑與原研制劑在pH值1.0鹽酸溶液、pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.8%SDS)和水(含0.8%SDS)中溶出曲線均相似。通過評價自研制劑與原研制劑體外溶出的一致性,可以更好地控制其質(zhì)量,保證與原研制劑的安全性及有效性[7]。