程巧林，王丹虹，盧田甜，劉敏

?？谑腥嗣襻t(yī)院(中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬?？卺t(yī)院)兒科，海南 ?？?570208

早產(chǎn)是新生兒感染和生長障礙的主要危險因素之一[1]。出生后感染是新生兒最常見的嚴(yán)重并發(fā)癥，由于其組織器官發(fā)育尚不成熟，免疫功能不完善，防御功能差，極易受到病原體的侵襲，從而發(fā)生感染性疾病，具有較高的發(fā)病率和死亡率。臨床上通過血液樣本查找早產(chǎn)兒感染的原因一般需要培養(yǎng)24～48 h，時間較長，給臨床診斷和治療造成困難，易增加其死亡的風(fēng)險[2]。因此需要尋找可以預(yù)測感染性疾病早產(chǎn)兒的生物標(biāo)志物，以便盡早干預(yù)。25-羥基維生素D3[25-(OH)D3]是維生素D 的活性成分，參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)，通過分泌抗病毒肽增加先天免疫，從而改善黏膜防御。研究發(fā)現(xiàn)低水平血清25-(OH)D3與急性呼吸道感染等疾病有關(guān)[3]。白介素(IL)-12 是一種固有的免疫炎癥細(xì)胞因子，在控制細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染中起著重要作用[4]；中性粒細(xì)胞載脂蛋白(HNL)是一種儲存在中性粒細(xì)胞次級顆粒中并由其釋放的蛋白質(zhì)，當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌感染時，水平明顯上升[5]。目前關(guān)于三者與感染性疾病早產(chǎn)兒的研究尚少。本研究通過探討血清25-(OH)D3、IL-12 和HNL 水平對感染性疾病早產(chǎn)兒的預(yù)測價值，以期為臨床診治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015 年1 月至2020 年12月?？谑腥嗣襻t(yī)院診治的226例感染性疾病早產(chǎn)兒作為感染組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患兒出生胎齡＜37周，且符合中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會產(chǎn)科學(xué)組制定的《早產(chǎn)臨床診斷與治療指南(2014)》[6]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；出生3 d 內(nèi)發(fā)生感染性疾病，且符合《實用新生兒學(xué)》[7]中診斷標(biāo)準(zhǔn)；單胎妊娠；CRP＞8 mg/L；白細(xì)胞異常升高；血培養(yǎng)陽性；患兒和產(chǎn)婦的臨床資料均完整無誤。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有嚴(yán)重先天性畸形的患兒；伴有先天性或代謝性疾病的患兒；伴有嚴(yán)重疾病，出生72 h內(nèi)死亡者；產(chǎn)婦所患疾病或孕期服用藥物影響早產(chǎn)兒維生素D 水平者；產(chǎn)婦服用藥物影響炎性因子水平者。根據(jù)新生兒感染情況將早產(chǎn)兒分為重度感染組(敗血癥、感染性休克)117例和輕度感染組(其他感染)109例。選取同期80 例未發(fā)生感染的早產(chǎn)兒作為對照組。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 收集所有早產(chǎn)兒和產(chǎn)婦的基本資料，包括性別、胎齡、出生體質(zhì)量、身長、產(chǎn)婦年齡、分娩方式、妊娠次數(shù)、妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓等情況。

1.2.2 實驗室檢測 采集早產(chǎn)兒出生24 h內(nèi)空腹靜脈血2 mL，以3 500 r/min 速度離心10 min，吸取血清，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清25-(OH)D3、IL-12和HNL水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS23.0 統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；非正態(tài)分布計量資料采用四分位間距[M(P25，P75)]表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗；計數(shù)資料組間比較采用χ2表示；應(yīng)用受試者工作特征曲線(ROC)分析血清25-(OH)D3、IL-12 和HNL 水平對感染性疾病早產(chǎn)兒的預(yù)測價值。檢驗水準(zhǔn)a=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組早產(chǎn)兒和產(chǎn)婦的基本資料比較 兩組早產(chǎn)兒的性別、胎齡、出生體質(zhì)量、出生體長和產(chǎn)婦年齡、妊娠糖尿病、妊娠高血壓、妊娠次數(shù)、分娩方式等資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 兩組早產(chǎn)兒和產(chǎn)婦的基本資料比較(±s，例)Table 1 Comparison of basic data of preterm infants and delivery woman(±s,n)

表1 兩組早產(chǎn)兒和產(chǎn)婦的基本資料比較(±s，例)Table 1 Comparison of basic data of preterm infants and delivery woman(±s,n)

指標(biāo)感染組(n=226)對照組(n=80)t/χ2值P值男/女(例)胎齡(周)出生體質(zhì)量(g)出生體長(cm)產(chǎn)婦年齡(歲)妊娠糖尿病妊娠高血壓妊娠次數(shù)分娩方式自然分娩剖宮產(chǎn)107/119 33.58±2.08 1 730.51±333.97 41.84±4.18 30.39±6.01 13(5.75)10(4.42)2.00±0.84 35/45 33.49±2.13 1 743.34±340.75 42.39±4.34 30.60±6.28 5(6.25)3(3.75)1.98±0.81 0.307 0.322 0.294 1.015 0.266 0.026 0.066 0.272 0.084 0.579 0.748 0.769 0.311 0.790 0.871 0.797 0.786 0.772 160(70.80)66(29.20)58(72.50)22(27.50)

2.2 感染組和對照組早產(chǎn)兒的血清25-(OH)D3、IL-12 和HNL 水平比較 感染組早產(chǎn)兒的血清25-(OH)D3水平明顯低于對照組，而血清IL-12 和HNL 水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 感染組和對照組早產(chǎn)兒的血清25-(OH)-D3、IL-12和HNL水平比較[±s，M(P25，P75)]Table 2 Comparison on serum 25-(OH)-D3，IL-12,and HNLlevels between infection group and control group[±s,M(P25，P75)]

表2 感染組和對照組早產(chǎn)兒的血清25-(OH)-D3、IL-12和HNL水平比較[±s，M(P25，P75)]Table 2 Comparison on serum 25-(OH)-D3，IL-12,and HNLlevels between infection group and control group[±s,M(P25，P75)]

組別感染組對照組t/Z值P值例數(shù)226 80 25-(OH)D3(nmol/L)11.74±2.56 17.78±5.65 9.240 0.001 IL-12(ng/L)197.95(123.18，254.83)66.18(40.76，93.34)10.029 0.001 HNL(ng/mL)160.17(111.06，194.35)54.75(38.39，72.17)9.666 0.001

2.3 不同病情程度患者的血清25-(OH)D3、IL-12和HNL 水平比較 輕度感染組血清25-(OH)D3水平明顯高于重度感染組，而血清IL-12 和HNL水平明顯低于重度感染組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，見表3。

表3 不同病情程度患者的血清25-(OH)D3、IL-12和HNL水平比較[±s，M(P25，P75)]Table 3 Comparison of serum 25-(OH)D3,IL-12,and HNL levels among patients with different disease degrees[±s,M(P25，P75)]

組別輕度感染組重度感染組t/Z值P值例數(shù)109 117 25-(OH)D3(nmol/L)10.53±2.38 13.04±2.08 8.387 0.001 IL-12(ng/L)230.15(167.45，283.29)172.83(104.59，230.17)5.156 0.001 HNL(ng/mL)175.85(135.83，225.73)130.43(84.37，174.66)5.969 0.001

2.4 血清25-(OH)D3、IL-12 和HNL 對感染性疾病早產(chǎn)兒的預(yù)測價值 經(jīng)ROC 分析結(jié)果顯示，血清25-(OH)-D3、IL-12 和HNL 水平預(yù)測感染性疾病早產(chǎn)兒曲線下面積分別為0.839、0.877、0.864，當(dāng)截斷值為14.76 nmol/L、112.81 ng/L、89.56 ng/mL 時，具有較高的靈敏度和特異度；三者聯(lián)合應(yīng)用價值優(yōu)于單獨應(yīng)用(P＜0.01)，見表4和圖1。

圖1 血清25-(OH)D3、IL-12 和HNL 對感染性疾病早產(chǎn)兒的預(yù)測價值ROC曲線Figure 1 Predictive value of serum 25-(OH)D3, IL-12, and HNL for premature infants with infections diseases

表4 血清25-(OH)D3、IL-12和HNL對感染性疾病早產(chǎn)兒的預(yù)測價值Table 4 Predictive value of serum 25-(OH)D3,IL-12,HNL in premature infants with infectious diseases

3 討論

早產(chǎn)兒由于其獨特的免疫功能，易發(fā)生感染風(fēng)險，是死亡的重要原因。早產(chǎn)兒發(fā)生感染性疾病后，通常會伴有終身神經(jīng)發(fā)育功能障礙，易給患兒造成嚴(yán)重的身體傷害，同時增加醫(yī)療經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[8]。雖然醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展，但感染性疾病早產(chǎn)兒的發(fā)病率仍呈逐年上升的趨勢，而且目前尚無有效的手段降低感染性疾病早產(chǎn)兒的發(fā)生率。因此需盡早發(fā)現(xiàn)感染性疾病早產(chǎn)兒，以便及時干預(yù)，改善不良后果。

25-(OH)D3是人體必須的維生素，參與機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)，能夠與單核-巨噬細(xì)胞中的維生素D受體結(jié)合，具有破壞病原體、預(yù)防感染的作用；另外25-(OH)D3還能通過下調(diào)單核細(xì)胞表面TOLL 樣受體(TLR)的表達(dá)，抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生，減緩感染后的炎癥反應(yīng)[9-10]。研究表明，血清25-(OHD3水平與感染性疾病發(fā)生風(fēng)險密切相關(guān)，25-(OH)D3水平越低，感染的風(fēng)險越高[11]。Hong 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，新生兒通過補充維生素D，呼吸道感染的發(fā)生率呈下降趨勢，提示25-(OH)D3具有預(yù)防呼吸道感染的作用。李淑妮等[13]選取120例新生兒醫(yī)院感染研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)新生兒醫(yī)院感染血清25-(OH)D3水平低于健康新生兒，而且其水平與病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，表明25-(OH)D3水平越低，病情越嚴(yán)重。本研究發(fā)現(xiàn)感染組早產(chǎn)兒的血清25-(OH)D3水平較對照組明顯降低，輕度感染早產(chǎn)兒的血清25-(OH)D3水平明顯高于重度感染者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，表明早產(chǎn)兒維生素D 水平與感染性疾病發(fā)生和病情密切相關(guān)。究其原因，可能是由于機(jī)體25-(OH)D3水平降低，T 淋巴細(xì)胞水平和巨噬細(xì)胞吞噬能力降低，致使機(jī)體防御病原體感染的能力減弱，增加感染風(fēng)險，而且隨著水平降低炎性因子合成釋放增加，從而加重病情[14]。

IL-12 作為促炎細(xì)胞因子，可促進(jìn)T 輔助細(xì)胞1(Th1)和T濾泡輔助細(xì)胞分化，在機(jī)體抗感染和免疫細(xì)胞增殖分化中發(fā)揮重要作用[15]。IL-12 能夠產(chǎn)生干擾素γ，刺激Th1 反應(yīng)并激活巨噬細(xì)胞，活化的巨噬細(xì)胞能夠殺死細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌從而消除感染[16]。徐露璐[17]等回顧性分析82 例新生兒感染性疾病，發(fā)現(xiàn)患兒血清IL-12 水平較健康新生兒明顯上升，提示機(jī)體感染后IL-12 水平可能升高。本研究發(fā)現(xiàn)，感染組早產(chǎn)兒的血清IL-12 水平較對照組明顯上升，輕度感染早產(chǎn)兒血清IL-12 水平明顯低于重度感染者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示血清IL-12 水平與早產(chǎn)兒感染性疾病發(fā)生及病情密切相關(guān)。究其原因，可能是由于機(jī)體受到感染后，通過激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子(NF)-κB 信號通路刺激樹突狀細(xì)胞發(fā)揮免疫反應(yīng)，促使IL-12 水平高表達(dá)；同時IL-12 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞，激活氧化應(yīng)激反應(yīng)，加重炎癥反應(yīng)，加重病情進(jìn)展[18]。

HNL屬于載脂蛋白超家族成員，主要由上皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞分泌[19]。研究發(fā)現(xiàn)，健康新生兒出生時HNL水平與其出生后3～5 d和健康成年人水平基本一致，且不易受其他因素影響波動，可作為新生兒細(xì)菌感染的標(biāo)志物[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，感染組早產(chǎn)兒血清HNL水平較對照組明顯上升，輕度感染早產(chǎn)兒的血清HNL水平明顯低于重度感染者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示血清HNL 水平與早產(chǎn)兒感染性疾病發(fā)生和病情密切相關(guān)。究其原因，可能是由于當(dāng)機(jī)體受到感染后，機(jī)體免疫反應(yīng)被激活，釋放大量中性粒細(xì)胞包裹、吞噬病原體，進(jìn)而釋放HNL，使其水平顯著升高，增加病情[21]。經(jīng)ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清25-(OH)D3、IL-12 和HNL 水平分別為14.76 nmol/L、112.81 ng/L、89.56 ng/mL 時，其預(yù)測感染性疾病早產(chǎn)兒具有較高的靈敏度和特異度，但三者聯(lián)合應(yīng)用的價值高于單獨應(yīng)用。

綜上所述，感染性疾病早產(chǎn)兒血清25-(OH)D3水平下降、IL-12 和HNL水平升高，與病情密切相關(guān)，可作為預(yù)測感染性疾病早產(chǎn)兒的生物標(biāo)志物。但是本研究由于樣本量小，尚未對感染性疾病早產(chǎn)兒感染類型進(jìn)一步分析，存在一定的不足，需要日后加大樣本量，深入分析血清25-(OH)D3、IL-12 和HNL水平對感染性疾病早產(chǎn)兒的應(yīng)用價值。