茶葉和土壤中cis-聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯手性對(duì)映體殘留分析

寧亞婷 王新茹 羅逢健 李建勛 張新忠，

（1中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，浙江 杭州 310008；2中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，北京 100193）

茶葉是我國出口競(jìng)爭(zhēng)力較強(qiáng)的傳統(tǒng)特色農(nóng)產(chǎn)品。目前我國茶樹種植面積和產(chǎn)量都居全球之首，茶葉出口居世界第二。茶樹在生長過程中常遭遇茶尺蠖、茶假眼小綠葉蟬、粉虱和象甲等多種害蟲危害，嚴(yán)重影響品質(zhì)和產(chǎn)量。目前，占世界殺蟲劑市場(chǎng)30%～40%的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是防治茶園害蟲的主要農(nóng)藥。例如，cis-聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯等是我國無公害茶園防治假眼小綠葉蟬、茶尺蠖等的推薦首選品種，為保障茶葉產(chǎn)量和茶農(nóng)創(chuàng)收做出了巨大貢獻(xiàn)。但其在茶葉和環(huán)境土壤中的殘留，也帶來了茶葉質(zhì)量安全和環(huán)境污染隱患。

1999 年，Lewis 等［1］在《Nature》上發(fā)表了環(huán)境因素對(duì)手性農(nóng)藥甲基-2，4-D丙酸降解的影響，提出環(huán)境中手性農(nóng)藥潛在生物效應(yīng)如毒性、致癌性、致突變性、內(nèi)分泌干擾性以及環(huán)境中的持久性等大都具有對(duì)映體選擇性差異，引起了各國科學(xué)家的廣泛關(guān)注。國內(nèi)外在手性農(nóng)藥拆分［2-5］，水生生物急性毒性［6-7］，土壤［8-9］、水［10-11］及動(dòng)物［12-14］、植物［15-17］體內(nèi)選擇性降解環(huán)境行為等方面的研究較多。目前市場(chǎng)上大多數(shù)擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多以外消旋體銷售［18-19］，其中無活性功能的對(duì)映體存在，不僅增加了農(nóng)藥的使用量，導(dǎo)致作物和食品中殘留量加大，而且會(huì)對(duì)非靶標(biāo)生物產(chǎn)生負(fù)面影響［20］。近年來，大量手性擬除蟲菊酯類農(nóng)藥對(duì)映體在水生生物毒性選擇性研究［21-23］表明，cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯均存在對(duì)映體毒性選擇性差異。人體是由左旋氨基酸組成的生命體，不能很好地代謝右旋分子，因此攝入含有右旋分子的食品或藥物會(huì)成為人體代謝的負(fù)擔(dān)，甚至對(duì)生命造成危害。目前世界主要茶葉生產(chǎn)、消費(fèi)國或地區(qū)對(duì)茶葉中cis-聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯的殘留量均設(shè)定了最大殘留限量值（maximum residue limit，MRL），介于0.01～25 mg·kg-1之間［24］，但僅對(duì)外消旋體的總量進(jìn)行了限制，并未考慮不同對(duì)映體之間的差別。降解規(guī)律的研究往往也很少考慮對(duì)映體間的差異，如鮮葉上兩種手性農(nóng)藥對(duì)映體之間的降解速度是否一致？歸趨是否相同？截至目前，針對(duì)茶葉和土壤中cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯兩種菊酯類手性農(nóng)藥對(duì)映體的同時(shí)檢測(cè)方法及其在茶鮮葉中選擇性降解行為研究仍鮮見報(bào)道。

本研究通過對(duì)色譜柱和提取條件進(jìn)行優(yōu)化，建立起不同茶葉、土壤中cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯農(nóng)藥手性對(duì)映體的殘留分析方法，并對(duì)方法學(xué)進(jìn)行全面評(píng)價(jià)，旨在為進(jìn)一步研究?jī)煞N農(nóng)藥對(duì)映體在茶葉生長—加工—飲用過程中的選擇性降解行為提供精準(zhǔn)可靠的技術(shù)手段。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Varian 3800 GC 氣相色譜儀（配備電子捕獲檢測(cè)器、1077 進(jìn)樣口、8410 自動(dòng)進(jìn)樣器和Version 6.9.1 Saturn工作站），美國Bruker公司；Sigma 3k-5高速離心機(jī)，德國Sigma 公司；DFT-200 手提式高速萬能粉碎機(jī)，浙江溫嶺市林大機(jī)械有限公司；T18 高速均質(zhì)勻漿儀，德國IKA公司；電子分析天平（0.000 1 g和0.01 g），瑞士梅特勒-托利多公司；R-210 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士BUCHI公司；KQ-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；玻璃柱管（18 mm I.D.×200 mm L.），杭州常盛科教器具廠；0.22 μm Filter Unit 濾膜，天津博納艾杰爾科技有限公司。

正己烷、丙酮（色譜純），美國Honeywell 公司；NaCl、無水Na2SO4（分析純），上海試四赫維化工有限公司；硅鎂型吸附劑（Florlisil 填料，60～100 目，使用前650 ℃烘4 h，冷卻后按10%比例加入純凈水密封振蕩混勻4 h，放置干燥器中備用），溫州市化學(xué)用料廠；Florisil 與GCB 混合柱：取5.0 g Florlisil 與0.10 g GCB混合均勻得混合物，按照1 g Na2SO4、Florisil+GCB 混合物、1 g Na2SO4，從下往上先后裝入玻璃柱管中，10 mL正己烷+丙酮（95∶5，V/V）預(yù)淋洗。

cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品（R體∶S體=1∶1，98%），德國Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：Daicel ChiralPak?AS-H手性色譜柱（4.6 mm ID×250 mm×5 μm，日本Daicel 公司），Phenomenex?Cellulose-1 手性色譜柱和Phenomenex?Cellulose-3 手性色譜柱（4.6 mm ID ×250 mm×5 μm，美國Phenomenex公司），BGB-172 手性氣相色譜柱（30 m×0.25 mm ID×0.25 μm，瑞士BGB Analytik AG 公司），Cyclosil-B 手性氣相色譜柱（30 m×0.32 mm ID ×0.25 μm，美國安捷倫科技有限公司）；載氣為N2，流量2.0 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：260 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；ECD 檢測(cè)器溫度：300 ℃，CAP 模式；尾吹氣N2，流量50 mL·min-1；色譜柱升溫程序：初始180 ℃，保持5 min；以5 ℃·min-1升至230 ℃，保持80 min。

1.3 樣品處理

分別取粉碎后的茶葉（綠茶、紅茶、普洱茶、茶鮮葉）和土壤樣品，稱取5.00 g，加入正己烷+丙酮（4+1，V/V）混合溶液50 mL浸泡過夜，15 000 r·min-1均質(zhì)勻漿提取1 min，加入2.0 g NaCl，混勻超聲10 min，過濾提取液轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶，并用30 mL 提取溶劑重復(fù)提取殘?jiān)? 次，合并2 次提取液，濃縮近干，5 mL 正己烷+丙酮（95+5，V/V）溶解上樣至Florlisil+GCB 混合柱，繼續(xù)用30 mL 正己烷+丙酮（95+5，V/V）洗脫接收，濃縮近干，環(huán)己烷+丙酮（70+30，V/V）超聲溶解定容1.5 mL，進(jìn)樣1 μL，氣相色譜-電子俘獲檢測(cè)器（gas chromatographyelectron capture detector，GC-ECD）測(cè)定，外標(biāo)法定量。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

分別稱取0.010 0 gcis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品至燒杯中，正己烷溶解并轉(zhuǎn)移到50 mL 容量瓶定容，配制成200 mg·L-1（對(duì)映單體濃度為100 mg·L-1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-18 ℃下避光保存。將儲(chǔ)備液用正己烷稀釋成對(duì)映單體濃度為800、400、200、100、50、25、12.5、5.0、2.5 μg·L-1系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，GC-ECD 進(jìn)樣1 μL，以濃度為橫坐標(biāo)x，對(duì)映體重復(fù)測(cè)定3 次色譜峰面積平均值為縱坐標(biāo)Y，獲得cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯兩對(duì)對(duì)映體溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性相關(guān)系數(shù)及儀器檢出限。

1.5 添加回收率、精密度與方法定量限

分別稱取經(jīng)測(cè)定不含cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯殘留的空白綠茶（綠茶、紅茶、普洱茶、茶鮮葉）和土壤樣品5.00 g，分別添加外消旋體濃度為0.050、0.50 和5.00 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 mL，相當(dāng)于對(duì)映單體0.005、0.05 和0.50 mg·kg-1的3 個(gè)添加濃度水平，每個(gè)添加濃度平行試驗(yàn)6 份，渦旋混勻后放置過夜以達(dá)到更接近于實(shí)際樣品，另外各自進(jìn)行4 份空白試驗(yàn)，按照1.3節(jié)進(jìn)行提取凈化，其中3份空白用于配制對(duì)應(yīng)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算添加回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差及方法定量限，并通過基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液與溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液響應(yīng)對(duì)比基質(zhì)效應(yīng)（matrix effect，ME），計(jì)算公式如下：

式中，A代表在純?nèi)軇┲袑?duì)映單體的響應(yīng)值；B代表基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)映單體的響應(yīng)值。

2 結(jié)果與分析

2.1 手性色譜分離條件的選擇優(yōu)化

為了實(shí)現(xiàn)cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯兩對(duì)對(duì)映體一次進(jìn)樣拆分并獲得對(duì)映單體，本研究首先對(duì)比了正相液相色譜條件下，20 ℃時(shí)不同類型色譜柱（Daicel ChiralPak?AS-H、Phenomenex?Lux 5 μm Cellulose-1和Phenomenex?Lux 5 μm Cellulose-3 柱）、不同流量（0.20～1.00 mL·min-1）及不同比例正己烷和異丙醇（99∶1～80∶20，V/V）對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體的拆分效果。結(jié)果表明，Cellulose-1柱對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯沒有拆分效果，對(duì)高效氯氟氰菊酯有一定的拆分效果，在1%異丙醇條件下即可拆分高效氯氟氰菊酯為兩個(gè)峰。增加異丙醇的比例可以改善峰型、減小峰寬、縮短保留時(shí)間，但會(huì)降低分離度，在20%異丙醇時(shí)僅能夠基本拆分高效氯氟氰菊酯。AS-H能拆分高效氯氟氰菊酯對(duì)映體，但對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯無拆分效果。Cellulose-3 對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯對(duì)映體均有一定拆分效果，在20%異丙醇時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯對(duì)映體的拆分，但無法拆分高效氯氟氰菊酯對(duì)映體；隨著異丙醇比例和流動(dòng)相流量的降低，高效氯氟氰菊酯對(duì)映體逐漸實(shí)現(xiàn)分離，cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體保留時(shí)間（retention time，tR）延長、分離度（resolution，Rs）增加、色譜峰變寬（表1）。在一定流動(dòng)相條件下，干擾峰（tR=4.92 min）會(huì)對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯-1（tR=5.32 min）造成干擾（圖1）。最終選取Phenomenex?Lux 5 μm Cellulose-3柱作為分析柱，正己烷+異丙醇（95∶5，V/V）在0.80 mL·min-1流量下進(jìn)行拆分，0.25 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液拆分效果見圖1，cis-聯(lián)苯菊酯兩個(gè)對(duì)映體tR分別為5.32和5.98 min，高效氯氟氰菊酯兩個(gè)對(duì)映體tR分別為11.22 和12.39 min，對(duì)映體分?jǐn)?shù)（enantiomer fractions，EFs）分別為0.513和0.493。但本試驗(yàn)對(duì)5 g茶葉樣品進(jìn)行凈化后分析發(fā)現(xiàn)（圖1），正相液相色譜紫外檢測(cè)器法（normal high performance liquid chromatographyultra-violet，NHPLC-UV）雖然可以滿足對(duì)映體拆分的需要，但是茶葉基質(zhì)富含咖啡堿等在紫外下強(qiáng)響應(yīng)的雜質(zhì)，前處理無法完全除去，導(dǎo)致背景響應(yīng)高，對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體掩蓋干擾嚴(yán)重，從而無法滿足殘留分析的需要。

表1 不同條件下Cellulose-3柱對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯對(duì)映體的拆分結(jié)果Table 1 The separation results for the enantiomers of cis-bifenthrin and lambda-cyhalothrin on Cellulose-3 column under different conditions

圖1 凈化后茶葉基質(zhì)溶液與0.25 mg·L-1 cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)比HPLC-UV色譜圖Fig.1 The HPLC-UV chromatograms of purified tea matrix solution and 0.25 mg·L-1 solvent standard solution for enantiomers of cis-bifenthrin and lambda-cyhalothrin

ECD為破壞性檢測(cè)器，無法獲得對(duì)映體單體，但擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在GC-ECD 上有高靈敏度的響應(yīng)，適合殘留分析。有研究表明，BGB-172 GC柱能很好地分離cis-聯(lián)苯菊酯手性對(duì)映體，并利用GC-ECD進(jìn)行了環(huán)境水［25］、生物樣本［22］中的對(duì)映體殘留分析。在此基礎(chǔ)上，本研究對(duì)比了BGB-172 GC 柱和Cyclosil-B GC 柱對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯兩組手性對(duì)映體拆分的效果，優(yōu)化了色譜升溫程序，對(duì)茶葉和土壤中cis-聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯手性對(duì)映體進(jìn)行了殘留分析研究。結(jié)果表明，同樣條件下，Cyclosil-B GC柱無法拆分對(duì)映體，BGB-172 GC柱在不同升溫程序下有不同的分離效果，改變載氣類型氦氣（He）或氮?dú)猓∟2），BGB-172 GC 柱下對(duì)兩組手性對(duì)映體分離效果無明顯差別，最終選擇1.2 節(jié)色譜條件中色譜升溫程序，能實(shí)現(xiàn)對(duì)映體的基本分離用于殘留分析，色譜圖見圖2，此時(shí)cis-聯(lián)苯菊酯對(duì)映體tR分別為42.88 和43.32 min，高效氯氟氰菊酯對(duì)映體tR分別為59.69 和60.45 min，既能實(shí)現(xiàn)cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯兩組手性對(duì)映體的同時(shí)拆分，又能滿足殘留分析的靈敏度需要，同時(shí)相對(duì)于文獻(xiàn)［26-27］縮短了對(duì)映體拆分時(shí)間。

圖2 空白紅茶樣品、0.005 mg·kg-1水平下紅茶添加樣品和0.016 7 mg·L-1紅茶基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液GC-ECD色譜圖Fig.2 The GC-ECD chromatograms of blank black tea，spiked black tea at 0.005 mg·kg-1，and black tea matrix standard solution sample at 0.016 7 mg·L-1 for cis-bifenthrin and lambda-cyhalothrin enantiomers

2.2 提取凈化方法的優(yōu)化

進(jìn)行手性農(nóng)藥對(duì)映體殘留分析時(shí)，既要盡量完全分離對(duì)映異構(gòu)體，又要避免雜質(zhì)干擾。當(dāng)采用GCECD 分析茶葉樣品時(shí)，由于ECD 是選擇性的高靈敏度檢測(cè)器，只對(duì)如含鹵素、硫、磷、氮的電負(fù)性物質(zhì)有信號(hào)，而對(duì)電中性（無電負(fù)性）的物質(zhì)，如烷烴等無信號(hào)，因此，茶葉和土壤中未凈化完全的大多數(shù)雜質(zhì)在ECD上無明顯信號(hào)或者能被分離開，從而不會(huì)像在液相紫外檢測(cè)中那樣造成背景干擾。

本試驗(yàn)用丙酮提取目標(biāo)物，提取液濃縮近干后，采用5.0 g Florisil與0.10 g GCB混合柱凈化，加入0.10 g的GCB 用來吸附除去部分色素，既能節(jié)省試驗(yàn)成本（相對(duì)于QuEChERs 等方法凈化），又能更多地去除咖啡堿、兒茶素等雜質(zhì)共提物，在保證凈化效果的同時(shí)降低了后期ECD儀器的維護(hù)。由圖3可知，正己烷+丙酮（95+5，V/V）洗脫時(shí)回收率和凈化效果最佳。最終選擇對(duì)5 g 茶葉或土壤樣品加入正己烷+丙酮（4+1，V/V）混合溶液提取后，再利用5.0 g Florisil+0.10 g GCB 混合柱凈化，30 mL 正己烷+丙酮（95+5，V/V）作為洗脫劑進(jìn)行洗脫接收，濃縮近干后，定容，GC-ECD檢測(cè)。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、添加回收率、精密度和定量限

在1.2節(jié)色譜條件下，2.5～800 μg·L-1（2.5、5、12.5、25、50、100、200、400和800 μg·L-1）濃度范圍內(nèi)，cis-聯(lián)苯菊酯對(duì)映體色譜峰面積（Y）與濃度（x）之間分別滿足線性方程Y=15 381.1x-279 657.5（r=0.996 7）和Y=17 387.6x-399 048.0（r=0.993 7），對(duì)映體分?jǐn)?shù)EFs=0.489±0.017；在2.5～200 μg·L-1（2.5、5、12.5、25、50、100和200 μg·L-1）濃度范圍內(nèi)，高效氯氟氰菊酯對(duì)映體色譜峰面積（Y）與濃度（x）之間分別滿足線性方程Y=22 083.8x-161 004.3（r=0.992 3）和Y=23 001.1x-167 694.8（r=0.992 2），對(duì)映體分?jǐn)?shù)EFs=0.492±0.008。

在0.005、0.050和0.50 mg·kg-1（低、中、高）3個(gè)添加濃度水平下，按照1.5 節(jié)進(jìn)行試驗(yàn)，不同空白茶葉、土壤樣品中添加回收率和精密度結(jié)果見表2。結(jié)果表明，cis-聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯兩對(duì)手性對(duì)映體在不同茶葉、土壤中的平均添加回收率（average spiked recovery，A.R.）為61.6%～123.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviations，RSDs）為2.5%～14.6%。其中綠茶中回收率為63.0%～88.3%，RSDs為5.7%～13.8%；紅茶中回收率為81.4%～121.7%，RSDs為2.5%～14.6%；普洱茶中回收率為61.6%～123.4%，RSDs為3.5%～11.7%；茶鮮葉中回收率為75.6%～102.6%，RSDs為4.6%～12.9%；土壤中回收率為68.3%～98.5%，RSDs為4.5%～14.2%。紅茶空白、低濃度添加和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖2，儀器檢測(cè)限均低于1 μg·L-1，方法定量限均低于0.005 mg·kg-1。說明該方法能夠滿足茶葉和土壤中cis-聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯殘留檢測(cè)的需要。通過3 個(gè)濃度下基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)與溶劑標(biāo)準(zhǔn)響應(yīng)對(duì)比，未見到明顯的基質(zhì)增強(qiáng)或減弱效應(yīng)。因此，在實(shí)際測(cè)定時(shí)，可直接用溶劑標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量，亦能確保定量準(zhǔn)確度。

表2 GC-ECD測(cè)定不同茶葉和土壤樣品中cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體的平均添加回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和定量限Table 2 The average spiked recoveries，relative standard deviations （RSDs） and limits of quantifications （LOQs） of cis-bifenthrin and lambda-cyhalothrin enantiomers in different tea，and soil samples by GC-ECD determination

2.4 兩組對(duì)映體在茶鮮葉中的降解實(shí)際樣品測(cè)定

利用建立的不同茶葉中手性農(nóng)藥cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體殘留GC-ECD 分析方法，研究了茶園鮮葉噴藥cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯農(nóng)藥后，噴藥后分別間隔2 h 和1、2、3、5、7、10、14、21 d 后采樣，測(cè)定茶葉鮮葉中cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯兩組手性對(duì)映異構(gòu)體的殘留量，獲得其降解規(guī)律，結(jié)果表明，茶鮮葉中cis-聯(lián)苯菊酯兩個(gè)對(duì)映體殘留量（Y，mg·kg-1）與時(shí)間（X，d）之間的關(guān)系分別符合曲線Y=4.857 3e-0.2048X，R2=0.911 9，半衰期t1/2=3.38 d和Y=5.153 5e-0.2012X，R2=0.897 4，半衰期t1/2=3.44 d；高效氯氟氰菊酯兩個(gè)對(duì)映體殘留量（Y，mg·kg-1）與時(shí)間（X，d）之間的關(guān)系分別符合曲線Y=0.409 8e-0.2166X，R2=0.964 2，半衰期t1/2=3.20 d 和Y=0.401 7e-0.2164X，R2=0.963 6，半衰期t1/2=3.20 d，見圖4，通過半衰期可知，兩種菊酯類農(nóng)藥對(duì)映體在茶鮮葉生長過程中的降解無明顯的選擇性差異。

圖4 茶鮮葉中cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體降解曲線Fig.4 The enantioselective degradation curve of cis-bifenthrin and lambda-cyhalothrin in fresh tea leaves

3 討論

目前針對(duì)擬除蟲菊酯類農(nóng)藥對(duì)映異構(gòu)體的分析通常是采用不同的色譜條件。Ye 等［3］系統(tǒng)總結(jié)了正相液相色譜條件下，單手性中心擬除蟲菊酯類農(nóng)藥采用Chiralcel OD 柱和多手性中心擬除蟲菊酯類農(nóng)藥采用串聯(lián)Chirex 00G-3019-OD 柱拆分的效果；劉一平等［28］采用Chiralcel?OD-H 色譜柱拆分了高效氯氟氰菊酯對(duì)映體；陸嫻婷等［26］采用Chiralcel OJ-H 柱拆分了cis-聯(lián)苯菊酯對(duì)映體；文獻(xiàn)［27，29］報(bào)道了采用手性氣相色譜柱BGB-172 分離氯氰菊酯對(duì)映體，但目前還未見采用一根色譜柱同時(shí)對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體拆分的報(bào)道。本研究通過對(duì)比液相和氣相色譜條件下不同色譜柱分離測(cè)定效果，優(yōu)化分析條件，最終實(shí)現(xiàn)了cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體的同時(shí)拆分。

茶葉基質(zhì)復(fù)雜，富含咖啡堿、色素等雜質(zhì)，因此，在對(duì)殘留農(nóng)藥分析前進(jìn)行提取、濃縮和凈化十分重要。目前，茶葉中cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯殘留測(cè)定中前處理技術(shù)主要是固相萃取法和QuEChERS 方法，如王艷麗等［30］采用固相萃取結(jié)合氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中45 種農(nóng)藥殘留；許芮菡等［31］采用QuEChERS 方法，即乙腈提取后多壁碳納米管凈化，最后采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析了茶葉中的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留；國標(biāo)GB 23200.113—2018［32］中也規(guī)定了茶葉中cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯殘留分析的固相萃取法和QuEChERS前處理方法。相比固相萃取法，QuEChERS 方法較為簡(jiǎn)單，應(yīng)用性也更廣泛。本研究方法和許芮菡等［31］方法中測(cè)定cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯的定量限（均為0.005 mg·kg-1）均低于國標(biāo)GB 23200.113—2018（0.005 mg·kg-1），表現(xiàn)出良好的檢測(cè)靈敏度。而許芮菡等［31］采用改進(jìn)的QuEChERS 方法提取凈化，采用乙腈提取茶葉樣品，乙腈會(huì)溶解并提取出各種極性與非極性目標(biāo)物及雜質(zhì)，雜質(zhì)過多容易污染ECD 檢測(cè)器，同時(shí)乙腈還會(huì)損壞氣相色譜柱，需要轉(zhuǎn)換進(jìn)樣溶劑為正己烷。而cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯是弱極性農(nóng)藥，本研究根據(jù)茶葉基質(zhì)和待測(cè)成分理化特性，采用正己烷和丙酮混合溶劑作為提取溶劑，能夠有效減少極性雜質(zhì)的提取量，利用正己烷與待測(cè)成分之間的相似相溶原理及丙酮的強(qiáng)浸潤性，從而保證了目標(biāo)物的提取回收率和平行性，同時(shí)也降低了對(duì)ECD 檢測(cè)器的污染。此外，本研究方法可以明確分析兩種菊酯類農(nóng)藥對(duì)映單體的含量，而許芮菡等［31］的方法和國標(biāo)GB 23200.113—2018 均無法實(shí)現(xiàn)。

cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體在茶鮮葉生長過程中的降解無明顯的選擇性差異，主要是因?yàn)轷r葉基體作用下的對(duì)映體降解差異不顯著。鮮葉采摘后的加工過程復(fù)雜，溫度、濕度、pH、微生物等作用都可能導(dǎo)致對(duì)映體的選擇性降解，這將是后續(xù)研究的重點(diǎn)，即通過系統(tǒng)研究?jī)煞N菊酯類農(nóng)藥對(duì)映體在茶葉生長-加工-飲用過程中的選擇性降解行為，為其更精準(zhǔn)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和技術(shù)支撐。

4 結(jié)論

本研究首次對(duì)比分析了正相液相色譜條件下，Daicel ChiralPak?AS-H、Phenomenex?Cellulose-1 和Cellulose-3 柱對(duì)cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯兩組手性對(duì)映體的拆分效果，以及利用氣相色譜BGB-172柱同時(shí)分離測(cè)定效果，建立了茶葉和土壤中手性農(nóng)藥cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對(duì)映體殘留同時(shí)分析的GC-ECD檢測(cè)方法，并應(yīng)用于田間實(shí)際樣品檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本方法靈敏度高、穩(wěn)定性好，能夠滿足茶葉和土壤中cis-聯(lián)苯菊酯和高效氯氟氰菊酯手性對(duì)映體殘留檢測(cè)的需要。