改進的QuEChERS方法結合在線凝膠色譜-氣相色譜-串聯(lián)質譜技術測定植物油中74種農藥殘留

李潔 王艷麗 李芳芳 田其燕 鞠香 劉艷明

（山東省食品藥品檢驗研究院，國家市場監(jiān)管重點實驗室（肉及肉制品監(jiān)管技術），山東省特殊醫(yī)學用途配方食品質量控制工程技術研究中心，產業(yè)技術基礎公共服務平臺，濟南 250101）

植物油是人們日常生活中最基本的生活資料之一，也是食品加工行業(yè)和烹飪行業(yè)的重要原料[1]。油料作物在種植過程中通常會使用除草劑、殺蟲劑和殺菌劑等一系列農藥，其果實中殘存的農藥可能會轉移至植物油中，使植物油存在農藥殘留的風險，危害食用者的身體健康[2-3]。近年來，消費者對食品安全及農藥殘留檢測的關注度日益提高，國際食品法典委員會（CAC）、日本和美國分別規(guī)定了食用油及毛油中45 種、34 種和75 種農藥的最大殘留限量（MRL）標準[4-6]，MRL 范圍分別為0.01～200、0.01～80 和0.01～500 mg/kg。我國國標GB 2763-2021[7]規(guī)定了植物油中88 種農藥的MRL，限量范圍為0.01～1 mg/kg。隨著植物油產業(yè)進出口貿易量日益增多，對植物油中農藥殘留的檢測技術也提出了更高的要求。與蔬菜和水果等普通的植物源性食品不同，植物油成分復雜，主要包括脂肪、甾醇及甾醇酯、磷脂、色素和游離脂肪酸等，在提取殘留農藥的過程中，這些化合物容易被共萃取出來，如果凈化不徹底，檢測時易產生嚴重的基質干擾，假陽性結果出現(xiàn)頻率增大[8-9]；另外，脂肪等基質容易沉積在離子源表面，抑制目標物的離子化，降低儀器的靈敏度，也會對色譜柱產生不可逆轉的損壞，因此，選擇合適的前處理凈化技術尤為關鍵。

近年報道的凈化技術有冷凍除脂[10-12]、QuEChERS[13-15]、固相萃取（SPE）[16-17]、分散固相萃取[18]、基質固相分散萃取[19]、固相微萃取[20]、帶磁性的納米粒子或分子印跡聚合物的應用[17-18，21-22]、液液微萃取[23-24]、液液萃取[25]及凝膠色譜（GPC）凈化[26-27]等。其中，冷凍除脂時間較長（2～14 h），檢測效率低；干冰冷凍除脂時間為5 min，時間不易控制，如果時間過長，目標物易與脂肪共同沉淀，降低回收率[11]。目前，SPE 凈化方法較為成熟，利用EMR-lipd 除脂專用柱進行除脂，除脂效果良好，但操作繁瑣、成本較高。QuEChERS 方法操作簡便、快速，但對于植物油這類基質復雜的樣品，只能去除部分雜質，基質干擾物所導致的基質效應問題依然存在。GPC 是一種基于相對分子質量的大小對化合物進行分離的高效分析凈化技術，David 等[28]的研究表明，GPC 可有效去除動物油脂和植物油脂中的脂肪、色素和甾醇等雜質。現(xiàn)有GPC 餾分接收時間的確定均采用滅螨猛和氟胺氰菊酯這2 種農藥殘留進行定位，不能對不同的食品基質進行針對性的雜質去除，也無法保證目標物的回收率。

綜合考慮我國和其它國家及組織限量規(guī)定的農藥種類及化合物的性質等因素，本研究選擇適用于氣相色譜檢測技術的74 種農藥作為目標物，植物油樣品采用正己烷飽和的乙腈提取、乙腈飽和的正己烷除脂，采用改進的QuEChERS 方法凈化，在線凝膠色譜-氣相色譜-串聯(lián)質譜（On-line GPC-GC-MS/MS）檢測，建立了一種同時檢測植物油中74 種農藥殘留的方法。本研究結合QuEChERS 與On-line GPC 凈化兩種技術的優(yōu)點，彌補了單一凈化方式凈化能力差的缺點，提出了QuEChERS 與在線GPC 凈化效果的評價方法，建立了植物油中多農藥殘留的同時快速和準確檢測的方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

TQ8040 凝膠色譜-氣相色譜-串聯(lián)質譜儀（日本Shimadzu 公司）；3-18K 臺式高速冷凍離心機（德國Sigma 公司）。敵敵畏、滅線磷、氟樂靈、久效磷、樂果、甲拌磷、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、特丁硫磷、地蟲硫磷、二嗪磷、嘧霉胺、氯唑磷、甲基毒死蜱、七氯、甲霜靈、甲基嘧啶磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、甲拌磷砜、毒死蜱、倍硫磷、對硫磷、三唑酮、三氯殺螨醇、噻唑磷、甲基異柳磷、二甲戊靈、氟蟲腈、硫環(huán)磷、腐霉利、三唑醇、殺撲磷、反-氯丹、順-氯丹、丁草胺、α-硫丹、β-硫丹、丙溴磷、狄氏劑、腈菌唑、氟硅唑、噻嗪酮、三唑磷、丙環(huán)唑、戊唑醇、炔螨特、苯酰菌胺、亞胺硫磷、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、伏殺硫磷、氯氟氰菊酯、聯(lián)苯三唑醇、氯菊酯、噠螨靈、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲環(huán)唑、溴氰菊酯、嘧菌酯、甲草胺、p,p-滴滴滴、p,p-滴滴伊、o,p-滴滴涕、p,p-滴滴涕、乙草胺、醚菌酯、聯(lián)苯肼酯和吡唑嘧菌酯（用量均為1 mL，濃度為1000 mg/L）標準物質均購自北京振翔有限公司；乙腈、丙酮、正己烷和環(huán)己烷（色譜純，德國Merck 公司）；N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基鍵合硅膠（C18）填料（色譜純，美國Agilent 公司）；MgSO4（優(yōu)級純，國藥集團化學試劑有限公司）。橄欖油、花生油、大豆油和芝麻油購自當?shù)爻小?/p>

1.2 儀器條件

1.2.1 凝膠色譜條件

色譜柱為Shodex EV-200（150 mm×2 mm），柱溫箱40 ℃，進樣量10 μL，流動相為丙酮-環(huán)己烷（3∶7，V/V），流速為0.1 mL/min。

1.2.2 氣相色譜-質譜條件

采用程序升溫-大體積進樣口（PTV-LVI）升溫程序：起始溫度為120 ℃，保持5.0 min，再以100 ℃/min升溫至280 ℃，保持33.4 min；不分流進樣；柱流量1.75 mL/min。色譜柱：預柱為DB-5MS 石英毛細管柱（5 m×0.25 mm×0.25 μm，美國Agilent 公司），分析柱為DB-5MS（25 m×0.25 mm×0.25 μm，美國Agilent 公司）。色譜柱升溫程序：起始溫度為82 ℃，保持5 min，以8 ℃/min 速率程序升溫至300 ℃，保持7.75 min。載氣為氦氣。電子轟擊源（EI）：70 eV；離子源溫度：200 ℃；輔助加熱溫度：300 ℃；檢測方式：多反應監(jiān)測模式（MRM）。

1.3 標準溶液的配制

分別準確移取0.1 mL 濃度為1000 mg/L 的各農藥標準品及儲備溶液至同一個10 mL 容量瓶中，用丙酮定容，配制成74 種農藥的混合標準溶液，質量濃度為10 mg/L。

1.4 QuEChERS樣品前處理方法

稱取植物油樣品2.0 g，用20 mL 正己烷飽和的乙腈渦旋提取5 min，5000 r/min 離心2 min；將上清液轉入另一個離心管中，在提取液中加入10 mL 乙腈飽和的正己烷，渦旋1 min，5000 r/min 離心2 min；取乙腈層至QuEChERS 凈化管中（內含150 mg PSA、150 mg C18和150 mg MgSO4）凈化，5000 r/min 離心2 min；取10 mL 上清液至15 mL 離心管中，氮吹近干，加入1 mL 丙酮復溶，經(jīng)0.22 μm 有機相濾膜過濾后，進行GPC-GC-MS/MS 分析。

1.5 基質效應評價

樣品分析溶液在注入儀器后，由于存在共洗脫物，分析目標物的信號可能會增強或減弱，進而產生基質效應（Matrix effect，ME）。本研究通過測定基質空白提取液標準曲線的斜率與溶劑標準溶液標準曲線的斜率的比值評價基質效應：ME（%）=（A–B）/A×100，其中，A為基質匹配標準溶液標準曲線的斜率，B為溶劑標準溶液標準曲線的斜率。

2 結果與討論

2.1 質譜條件的確定

對74 種農藥的母離子、子離子和碰撞能量等系列質譜參數(shù)進行優(yōu)化。首先將74 種農藥殘留的混合標準溶液導入氣相色譜-串聯(lián)質譜儀中進行全掃描（Full scan），對照NIST 譜庫，得到74 種農藥的保留時間和碎片離子，選擇質量數(shù)較大、強度較高的碎片離子，利用儀器軟件的Auto SRM 功能，得到離子對和碰撞能量的優(yōu)化曲線，選擇出最優(yōu)的離子對及碰撞電壓，詳見電子版文后支持信息表S1。

2.2 提取溶劑的選擇

食品中農藥殘留檢測通常采用丙酮、乙酸乙酯、乙腈和正己烷飽和的乙腈作為提取溶劑。由于植物油與丙酮和乙酸乙酯可以互溶，因此，在提取目標物的同時，基質也被共提取出來，影響檢測，不適于作為提取溶劑?？疾炝艘译婧驼和轱柡偷囊译鎸?4 種農藥的提取效率，回收率結果見電子版文后支持信息表S2。結果表明，以正己烷飽和的乙腈為提取劑時，74 種農藥中除樂果回收率為66.8%外，其余農藥的回收率均在70%～110%之間，滿足檢測需求；乙腈作為提取劑時，三氯殺螨醇、硫環(huán)磷和二甲戊靈等17 種農藥的回收率低于70%，而對硫磷和氯氰菊酯的回收率僅為53.4%和57.6%，無法準確定量分析。推測正己烷飽和的乙腈提取效率較高的原因可能是其基于相似相溶原理，能夠將脂溶性的農藥高效地萃取出來。

2.3 除脂條件的優(yōu)化

2.3.1 除脂方式的選擇

植物油中主要成分為脂肪，在提取農藥殘留的過程中，為了提高非極性和弱極性等脂溶性農藥的回收率，選用正己烷飽和的乙腈作為提取溶劑，這也使得共提取的脂肪含量較高，需要對提取液進行除脂處理。分別采用乙腈飽和的正己烷萃取、–20 ℃冷凍及–78 ℃冷凍3 種方式進行除脂，根據(jù)文獻[10-11]，選取–20 ℃和–78 ℃時的冷凍時間分別為12 h 和5 min。比較了3 種方式去除脂肪的效果（見電子版文后支持信息圖S1），結果表明，正己烷去除脂肪的量最多，為27.1 mg，兩種冷凍除脂方式的去脂肪質量分別為7.4 mg（–78 ℃冷凍）和18.9 mg（–20 ℃冷凍）。

將按3 種方式除脂后的溶液在GC-MS 上進行全掃描，色譜圖見圖1。正己烷萃取除脂后，色譜圖上的峰個數(shù)及峰的響應明顯低于兩種冷凍除脂方式，在15.5～18.0 min 及32.0～34.0 min 時間范圍內，乙腈飽和的正己烷除脂后，色譜峰更干凈。尤其32.75 min 處的色譜峰，采用正己烷萃取方式除脂時的峰面積為19230.6，而采用兩種冷凍方式除脂時峰面積分別是13339378（–20 ℃）和13319154（–78 ℃），經(jīng)NIST 譜庫檢索此峰可能為三十碳六烯。由于正己烷和三十碳六烯均為烴類化合物，極性相似，進一步驗證了正己烷的去脂效果，因此選取正己烷去除脂肪。

2.3.2 正己烷用量的優(yōu)化

對于脂溶性強的農藥，除脂時正己烷的用量對其回收率有很大的影響。在空白基質油脂中加入20 μg/kg 的74 種農藥，考察了正己烷的用量（2、5、10 和20 mL）對目標物的回收率和脂肪的去除率的影響。結果表明，正己烷用量越大，雜質峰的干擾越少，說明脂肪的去除率越大；正己烷的用量對大部分化合物的回收率影響不大，但是對于硫丹、氯丹和七氯等14 種化合物，隨著正己烷的用量增加，回收率逐漸降低。如圖2A 所示，正己烷用量為2 mL 時，14 種化合物的回收率在78.6%～105.2%之間；正己烷用量為5 和10 mL 時，目標物的回收率相差不大，均在70%～101%之間；正己烷用量為20 mL 時，回收率均降至80%以下，三氯殺螨醇、α-硫丹、β-硫丹、p,p′-DDE 和o,p′-DDT 的回收率甚至低于60%，不能準確定量分析，這可能是由于這幾種化合物極性較弱，在正己烷中的溶解性優(yōu)于乙腈，隨著正己烷用量增大，在乙腈中的殘留量減少，導致回收率降低。

圖2 正己烷用量的優(yōu)化：（A）正己烷用量對回收率的影響；（B）不同正己烷用量下回收率和基質峰面積的比值a，七氯；b，三氯殺螨醇；c，反-氯丹；d，α-硫丹；e，順-氯丹；f，p,p′-滴滴伊（p,p-DDE）；g，狄氏劑；h，β-硫丹；i，p,p′-滴滴滴（p,p-DDD）；j，o,p′-滴滴涕（o,p-DDT）；k，p,p′-滴滴涕（p,p-DDT）；l，聯(lián)苯菊酯；m，氯菊酯；n，氯氰菊酯Fig.2 Optimization of n-hexane volume: (A) Effects of different volumes of n-hexane on recovery;(B) Ratio of recovery to matrix peak area at different volumes of n-hexanea,heptachlor;b,dicofol;c, β-chlordane;d, α-endosulfan;e,α-chlordane;f,1,1′-(dichlorovinylidene)bis[chlorobenzene](p,p-DDE);g,dieldrin;h, β-endosulfan;i,1,1-dichloro-2,2-bis(4-chlorophenyl)ethane (p,p-DDD);j,1,1,1-trichloro-2-(2-chlorophenyl)-2-(4-chlorophenyl)ethane (o,p-DDT);k,1,1,1-trichloro-2,2-bis[4-chlorophenyl]ethane (p,p-DDT);l,diphenyl ester;m,permethrin;n,cypermethrin

上述結果表明，正己烷用量越大，基質的去除效果越好，在色譜圖上的響應峰面積越小，但相應的目標物的回收率也會降低，需要優(yōu)化正己烷的用量，以達到最優(yōu)的除脂及回收效果，因此考察了不同正己烷用量條件下的回收率與基質峰面積的比值，此值越大，說明回收率降低的程度越低于基質減少的程度，實驗結果也更準確。如圖2B 所示，當正己烷用量為10 mL 時，回收率/基質峰面積的比值最大，在此條件下雜質去除多，并可保證回收率在可接受的范圍內。因此，本研究選擇10 mL 正己烷進行除脂。

2.4 QuEChERS條件的優(yōu)化

正己烷可有效去除大部分非極性或弱極性的雜質化合物，但是對于一些極性的游離脂肪酸和甾醇的去除效果不佳。PSA、C18、弗羅里硅土（Florisil）和中性氧化鋁（Al2O3）等材料常作為吸附劑[3,14-15]。本研究在空白基質油脂中加入20 μg/kg 的74 種農藥，分別選用PSA、C18、PSA+C18、弗羅里硅土（Florisil）和中性氧化鋁作為吸附劑，對74 種農藥殘留的回收率進行考察。如圖3 所示，大部分農藥的回收率滿足要求，但敵敵畏、久效磷、甲拌磷和對硫磷等17 種農藥的回收率差別較大。Florisil 和中性氧化鋁作為吸附劑時，17 種農藥的回收率分布較分散，在22%～130%之間；敵敵畏、久效磷、三唑醇、戊唑醇、聯(lián)苯三唑醇、甲拌磷和聯(lián)苯肼酯的回收率均低于70%，尤其對于敵敵畏，兩種吸附劑的回收率均低于40%，無法準確定量分析。PSA、C18和PSA+C18這3 種吸附劑的回收率均在70%～120%之間，其中，PSA+C18作為吸附劑時回收率的分布更集中，除敵敵畏的回收率為75%外，其它16 種農藥的回收率均在90%～110%之間，并且基質峰的干擾最少。

圖3 不同吸附劑的回收率Fig.3 Recoveries of different sorbents

由于C18材料屬于反向硅膠鍵合吸附劑，可通過疏水作用較好地吸附非極性的組分和弱極性的干擾物（如脂肪酸、氨基酸、脂肪和脂類等）[14]。PSA 材料的硅膠表面鍵合有極性官能團，屬于弱陰離子交換吸附劑，對樣品中的一些強極性雜質、有機酸、色素、糖、脂肪酸和金屬離子等具有良好的凈化效果，使得基質峰的干擾較少[29]。弗羅里硅土柱是硅膠鍵合氧化鎂的吸附劑，與硅膠相似，是強極性吸附劑，可以從非極性溶液中萃取極性化合物，在萃取雜質的同時，一些極性目標物也可能會被萃取出去，導致有機磷農藥回收率降低。因此，選用PSA+C18作為吸附劑。

考察了不同用量的吸附劑（50、100、150、200、250 mg）對雜質去除率的影響，發(fā)現(xiàn)當吸附劑的用量≥150 mg 時，基質峰面積明顯降低，基線趨于平滑；當吸附劑的用量為200 和250 mg 時，敵敵畏、久效磷和樂果等有機磷農藥的回收率降低。因此，選擇吸附劑的最佳用量為150 mg。

2.5 凝膠色譜條件的優(yōu)化

GPC 凈化技術是一種根據(jù)分子量的大小對化合物進行分離的技術，其關鍵是確定餾分的接收時間，以確保目標物的有效導入及雜質的高效去除。文獻[15]報道的GPC 餾分接收時間采用滅螨猛和氟胺氰菊酯兩種農藥殘留的保留時間進行確定，其缺點是不能對不同的食品基質進行針對性的雜質去除，也無法能保證目標物的回收率。本研究針對植物油基質與目標農藥殘留在GPC 上的保留行為，創(chuàng)新性的提出導入效率（Import efficiency，IE）的概念。將74 種農藥殘留的混合標準溶液注入到On-line-GPC-GC-MS/MS，得到的各化合物的峰面積與未經(jīng)GPC 凈化直接注入GC-MS/MS 得到的各化合物的峰面積的比值定義為導入效率（IE（%）=A/B×100，其中，A為經(jīng)由GPC 凈化的標準溶液中各化合物的響應峰面積，B為未經(jīng)GPC 凈化的標準溶液中各化合物的響應峰面積）。通過計算導入效率，可精準測定所有目標化合物經(jīng)由GPC 凈化后的回收率，為餾分接收時間段的確定提供數(shù)據(jù)支持。本研究考察了不同餾分接收時間段內目標物的導入效率和基質效應，以獲得最優(yōu)的餾分接收時間。

2.5.1 餾分接收時間的考察

本研究選用74 種農藥殘留中相對分子質量最大的溴氰菊酯（505.2）和相對分子質量最小的嘧霉胺（199.25）作為指示物，分別將溴氰菊酯（濃度為10 μg/mL）、嘧霉胺（濃度為10 μg/mL）和橄欖油空白基質溶液注入在線凝膠色譜儀中，其紫外檢測光譜圖見圖4A。空白基質溶液、溴氰菊酯和嘧霉胺標準品的保留時間分別為2.92、3.55 和4.13 min，從光譜圖可知，收集不同時間段內的餾分，可實現(xiàn)植物油中大分子雜質和目標物的有效分離。

圖4 標準溶液和空白基質溶液的紫外檢測光譜圖（A）和不同時間段餾分74 種農藥殘留的導入效率（B）Fig.4 Ultraviolet dectetion spectra of standard solutions and blank matrix solution(A)and recovery of 74 kinds of residues in different distillates (B)

考察了收集不同時間段內的餾分時，74 種農藥殘留從在線GPC 向GC-MS/MS 儀器的導入效率。將濃度為0.1 μg/mL 的74 種混合標準溶液注入到凝膠色譜柱中，分別收集3.00～5.55 min（全部導入）和3.55～5.55 min（部分導入）時間段內的餾分，計算每種化合物的導入效率，結果見圖4B。全部導入時，74 種農藥殘留的導入效率為71.3%～102.7%；部分導入時，僅有33 種農藥殘留的導入效率在70%以上，對于溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯和氯氟氰菊酯等分子量較大的化合物，導入效率僅為14.0%～46.5%，較低的導入效率降低了方法的靈敏度，影響檢測的準確度。因此，選擇3.00～5.55 min 為餾分的接收時間段。

2.5.2 不同餾分接收時間段內目標物的基質效應

由圖4A 可見，農藥殘留全部導入時，有部分大分子雜質隨著目標物一同進入了GC-MS/MS 儀器，可能會對檢測產生影響，而部分導入可將90%的大分子雜質去除。因此，本研究考察了兩種時間段流出的基質對74 種農藥殘留產生的基質效應，以考察共洗脫出的雜質對檢測產生的影響，結果見電子版文后支持信息表S3。當農藥殘留部分導入時，66 種農藥的基質效應為0.3%～19.3%，表現(xiàn)為弱基質效應；8 種農藥的基質效應為23.0%～48.8%，表現(xiàn)為中等強度基質效應。收集3.00～5.55 min 時間段內餾分時，64 種農藥的基質效應為0.1%～19.7%，表現(xiàn)為弱基質效應；10 種農藥的基質效應為24.4%～48.5%，表現(xiàn)為中等強度基質效應。以上結果表明，兩種餾分收集方法均有少部分農藥需要進行基質效應校正，綜合考慮導入效率和基質效應，確定餾分的收集時間為3.00～5.55 min。

2.6 QuEChERS-GPC聯(lián)用技術的優(yōu)勢

利用優(yōu)化的提取溶劑和除脂方式對樣品進行處理后，分別采用QuEChERS、On-line GPC、QuEChERS+On-line GPC 這3 種方式對樣品溶液進行凈化，比較凈化效果，色譜圖見圖5。僅采用在線GPC 凈化的提取液，在a、b 時間段內及31.5 min 處均有明顯的雜質峰；只經(jīng)過QuEChERS（PSA 和C18）凈化的提取液，a、b 時間段的色譜峰比較平滑，在c 時間段內出現(xiàn)群峰；而經(jīng)過兩者雙重凈化后，在3 個時間段內的色譜峰強度均下降。通過NIST 譜庫檢索，a、b 時間段內的雜質峰主要為棕櫚酸和油酸，c 時間段內的群峰為油酸甘油酯、維生素E 和β-谷甾醇。在柱容量允許的情況下，GPC 可有效去除99%的脂質物質[28]，因此經(jīng)GPC 凈化后，c 時間段的甘油酯類化合物得到了有效去除。由于凝膠色譜柱僅能除去特定分子大小的化合物，不能分辨與目標物分子大小相近的化合物，因此不能對油脂中所有雜質成分進行去除，而PSA 和C18對有機酸和非極性化合物有較好的吸附作用，使a、b 時間段內的棕櫚酸和油酸也得到了有效去除。因此，QuEChERS 及On-line GPC 兩種凈化方式缺一不可。

圖5 不同凈化條件下樣品溶液的全掃描色譜圖Fig.5 Full scan chromatograms of sample solution under different purification conditions

2.7 定量方式的選擇

考察了74 種農藥的基質效應，如圖6 所示，74 種農藥中有10 種農藥|ME|≥20%，需對基質效應進行校正。植物油種類較多，基質較復雜，為滿足不同種類植物油的分析要求，降低基質效應的影響，本研究采用基質匹配標準溶液進行定量分析。

圖6 74 種農藥的基質效應Fig.6 Matrix effects of 74 kinds of pesticides

2.8 方法學評價

2.8.1 線性范圍、相關系數(shù)及定量限

取空白樣品處理液加入一定濃度的標準工作溶液，得到系列濃度的基質匹配標準溶液，按濃度由低到高依次測定，以各物質定量離子對的峰面積（Y）對其質量濃度（X）作標準曲線，其線性相關系數(shù)均大于0.998。采用空白基質加標的方法，以信噪比S/N=10 得到目標物的定量限（LOQ），以信噪比S/N=3 得到目標物的檢出限（LOD）。74 種農藥的線性范圍、相關系數(shù)、檢出限及定量限見電子版文后支持信息表S4，結果表明，相關化合物的檢出限可以滿足GB 2763-2021[7]和其它國家及組織對植物油中農藥殘留的限量要求。

2.8.2 回收率和精密度

由于不同農藥的檢出限不同，選取檢出限最高的農藥聯(lián)苯三唑醇的LOD 作為加標實驗的最低水平。在橄欖油、大豆油和花生油這3 種陰性樣品基質中，分別添加1 倍LOD、2 倍LOD 和4 倍LOD 濃度的混合標準溶液，靜置2 h，待各農藥標準品被樣品充分吸收后，利用本方法進行檢測，每個濃度水平重復測定6 次。結果（見電子版文后支持信息表S5）表明，加標水平在1～4 倍LOD 時，74 種農藥在橄欖油中的加標回收率為73.0%～112.4%，相對標準偏差（RSD）為1.5%～8.6%；在大豆油中的加標回收率為84.3%～109.8%，RSD 為2.5%～7.6%；在花生油中的加標回收率為80.5%～115.3%，RSD 為0.8%～8.1%。上述結果表明，本方法的準確度和精密度均能滿足植物油中農藥殘留檢測的要求。

2.9 實際樣品的篩查

采用本方法對市場上購買的60 批次植物油樣品進行分析，植物油樣品涉及橄欖油、花生油、大豆油和芝麻油，有2 批次大豆油樣品和6 批次花生油樣品被檢出毒死蜱，其中，大豆油樣品的檢出值為14.8 和23.7 μg/kg，低于GB 2763-2021[7]對大豆油中毒死蜱的限量規(guī)定；花生油樣品的檢出值在18.6～116 μg/kg之間，我國GB 2763-2021[7]、CAC 和日本等均未對花生油中的毒死蜱作限量要求。

3 結論

本研究將QuEChERS 與在線On-line GPC 凈化技術相結合，建立了植物油中多農藥殘留的GC-MS/MS檢測技術，解決了單一凈化方式凈化不徹底的問題。提出了目標物由GPC 至GC-MS/MS 的導入效率概念，對GPC 的餾分接收時間段進行優(yōu)化，實現(xiàn)了目標物的有效導入和基質的高效去除。采用正己烷飽和的乙腈作為提取溶劑，可提高脂溶性農藥的回收率。利用稱重法、全掃描法及回收率與基質峰面積比值等多種評價方式，全面考察了QuEChERS 技術的除雜效果。通過對GC-MS/MS 工作條件的優(yōu)化，實現(xiàn)了一次進樣同時完成植物油中74 種農藥的檢測分析。本研究建立的QuEChERS 結合On-line-GPC-GC-MS/MS的檢測技術，可用于含油脂食品中其它農藥殘留的檢測，為含油脂食品中農藥殘留、塑化劑和多環(huán)芳烴等一系列危害物的檢測提供了參考，提出的基質去除方法、基質去除效果的評價方式及GPC 條件優(yōu)化程序可為其它目標物的檢測提供理論指導。

支持信息

Supporting information

表S1 74 種農藥的保留時間、定量定性離子對及碰撞能Table S1 Retention time,monitoring ion pairs and collision energies of 74 kinds of pesticides

圖S1 三種除脂方式去除脂肪的量Fig.S1 Fat removal quality of three methods