GC-ECD法測定地龍藥材中17種有機氯類農(nóng)藥殘留

李正剛　邵大志　張亦萌　馬彧　馬金剛

【摘要】目的：采用氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）檢測不同產(chǎn)地的多批次地龍藥材中17種有機氯類農(nóng)藥殘留量。方法：樣品經(jīng)水、丙酮、適量氯化鈉超聲分散，二氯甲烷萃取，離心轉移，有機相用無水硫酸鈉脫水后減壓濃縮至近干，正己烷溶解，硫酸溶液和水除去雜質，GC-ECD 法測定。結果：在本實驗條件下，17種農(nóng)藥組分能很好地分離檢測，在測定范圍0.76～100.30 ng/mL內線性關系良好，相關系數(shù)r均大于0.995，檢出限在0.0015～0.0020 mg/kg之間，方法的重復性RSD均小于5.0%，加標回收率在81.2％～93.1％之間。結論：方法靈敏準確。收集的不同產(chǎn)地的10個批次樣品中17種有機氯類農(nóng)藥均未檢出，藥材質量較好。

【關鍵詞】氣相色譜法；有機氯；農(nóng)藥殘留；地龍

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）18-0045-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.18.zgmzmjyyzz202318009

Determination of 17 Organochlorine Pesticide Residue in Pheretima by GC-ECDLI Zhenggang1SHAO Dazhi1ZHANG Yimeng1MA Yu1MA Jingang2*

1.Siping Institute for Food and Drug Control， Siping 136000，China；

2.Siping Central Peoples Hospital， Siping 136000，ChinaAbstract：Objective? Determination of 17 organochlorine pesticide residues in different batches of Pheretima from different habitats by gas chromatography electron capture detector（GC-ECD）.Methods? The samples were dispersion with water，acetone and sodium chloride of appropriate amount by ultrasound；The pesticides were extracted with dichloromethane，centrifuged migrate.The organic phase was steamed to dry by reducing the pressure after dehydration with anhydrous sodium sulfate. Dissolveed by N-hexane，sulfuric acid solution and water to remove impurities，the pesticides were determined by GC-ECD.Results? All the 17 pesticides showed good linearities in their reasonable rang（ 0.76-100.30 ng/mL），r2>0.995，the LODs of each pesticide were all in the range of 0.0015-0.0020 mg/kg，the RSD of repeatability of the developed method was less than 5.0%，and the average recoveries of all the pesticides were in the range of 81.2％-93.1％.Conclusion The method is sensitive and accurate.17 organochlorine pesticides were not detected in 10 batches of samples collected from different habitats， and the quality of the medicinal materials was good.

Keywords：Gas Chromatography; Organochlorine; Pesticide Residue；Pheretima

現(xiàn)階段，大量使用農(nóng)藥導致農(nóng)藥殘留超標問題頻頻發(fā)生［1-2］，且大多數(shù)的農(nóng)藥都有難降解、易蓄積、毒性高、易污染等特點［3-4］。農(nóng)藥使用后，很大一部分農(nóng)藥會進入環(huán)境中，進而在土壤、水等環(huán)境介質中傳播，并隨著食物鏈的傳遞在生物體內累積，從而使整個生態(tài)系統(tǒng)的結構和功能遭到破壞。農(nóng)藥殘留對食品安全性及人類健康產(chǎn)生的負面作用日益凸顯出來。因此，為保證中藥材用藥的安全性。必須加強對農(nóng)藥殘留量檢測的力度。建立合適的分析方法來檢測和量化中藥材中的農(nóng)藥。并且制定合理的限值范圍，提高中藥材在實際應用過程中的安全性 ［5-7］。農(nóng)藥殘留的檢測方法有液相色譜-串聯(lián)質譜（LC-MS/MS）、氣相色譜-質譜（GC-MS）、液相色譜-紫外檢測（LC-UV）、氣相色譜-電子捕獲檢測（GC-ECD）等［8-11］。GC-ECD法為實驗人員應用最多的測定方法。

地龍為常用動物類藥材，最早在《神農(nóng)本草經(jīng)》就有記載［12］。地龍性味寒、咸，歸肺、腎、肝經(jīng)，具有清熱定驚、通絡、平喘、利尿的功效，常用于治療高熱、神昏、驚癇抽搐、肺熱喘咳等癥狀?，F(xiàn)標準收載在2020版《中國藥典》一部，標準中安全性質量控制項目進行了重金屬和黃曲霉毒素的限量控制檢驗［13］。經(jīng)過文獻調研，也未有關于農(nóng)藥殘留的研究檢測報道。市場上野外捕獲地龍和人工養(yǎng)殖均有，環(huán)境中農(nóng)藥的使用可能造成地龍藥材中農(nóng)藥含量超標。有害元素含量的多少，直接反映中藥材的質量。本實驗以不同產(chǎn)地及不同批次地龍為研究對象，采用GC-ECD法，測定了17種有機氯類農(nóng)藥的殘留含量，為進一步提高動物藥的質量，保證其用藥安全提供依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器7890B型氣相色譜儀（配備Ni-ECD電子捕獲檢測器，安捷倫科技有限公司）；BP211D型電子天平（北京賽多利斯儀器天平有限公司）；RE 52-99 型旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；TDL-5-A臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）。

1.2試驗材料有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液（批號：610005-202003；特性量值：約10μg/mL，中國食品藥品檢定研究院）。丙酮、二氯甲烷、正己烷、硫酸（均為色譜純）；氯化鈉、無水硫酸鈉（均為分析純）；純化水為自制。

本次收集到不同產(chǎn)地和批次的地龍藥材共10 批，基本信息見表1。

2方法與結果

2.1儀器參數(shù)OV-1701（30 m×0.32 mm×0.25 μm）毛細管色譜柱；載氣：N2，檢測器為Ni-ECD電子捕獲檢測器；進樣口溫度：230℃；檢測器溫度：300 ℃；流速：1.5 mL/min；進樣模式：不分流進樣；程序升溫：60 ℃，保持0.3 min，以60 ℃/min升至170 ℃，再以10 ℃/min升至220 ℃，保持10 min，再以1 ℃/min升至240 ℃，15 ℃/min升至280 ℃，保持5 min，進樣量為1 μL。

2.2混合對照品溶液的制備精密量取17種有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用正已烷逐級稀釋制成每1 mL分別約含2 ng、5 ng、10 ng、20 ng、50 ng、100 ng的溶液。

2.3供試品溶液的制備取本品，粉碎成細粉（過二號篩），取約5 g，置具塞錐形瓶中，加水30 mL，振搖10 min，使分散，精密加入丙酮50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再用丙酮進行補重，再加氯化鈉約5 g，精密加二氯甲烷25 mL，稱定重量，超聲處理15 min，放冷，再用二氯甲烷進行補重，振搖使氯化鈉充分溶解，靜置，轉移至具塞離心管中，離心5 min，使完全分層，將有機相轉移至裝有適量無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30 min。精密量取15 mL。置于40 ℃水浴中減壓濃縮至約1 mL，再加正己烷約5 mL，減壓濃縮至近干，用正己烷溶解并轉移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，轉移至離心管中，再加入硫酸溶液（9→10）1 mL，振搖1 min，離心10 min，分取上清液，加水1 mL，振搖，取上清液，即得。

2.4空白溶液除不添加樣品外，其余按“2.3”項下操作，制得空白溶劑溶液。

2.5方法學考察

2.5.1系統(tǒng)適用性考察分別精密量取混合對照品溶液、樣品溶液和空白溶液各1 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣。結果，17種有機氯農(nóng)藥色譜峰分離度均大于1.5，空白溶液無干擾。具體如圖1所示。

2.5.2線性范圍和檢出限精密量取“2.2”項下系列不同濃度的17種有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀。以進樣濃度X（ng/mL）為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線，分別計算17 種農(nóng)藥的線性回歸方程。結果，各組分線性關系良好。將17 種有機氯農(nóng)藥對照品溶液逐步稀釋后進樣測定，進樣1 μL，以3倍基線噪聲（S/N=3）確定方法的檢出限（LOD）。結果見表2。

2.5.3精密度試驗取“2.2”項下17種有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液（濃度約為20 ng/mL），重復進樣6 次，計算峰面積的RSD 值均小于2.3%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.5.4穩(wěn)定性試驗取“2.2”項下17種有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液（濃度約為20 ng/mL），分別于0 h、4 h、８ h、16 h、18 h、24 h，進樣1 μL，記錄所測各組分峰面積。結果17種有機氯農(nóng)藥組分峰面積的RSD均小于3.3% （n=6），表明17種有機氯農(nóng)藥在24 h內均穩(wěn)定。

2.5.5重復性試驗及回收率試驗經(jīng)考察10批地龍藥材樣品中均未檢出17種農(nóng)藥殘留，故本次實驗重復性采用加樣回收試驗進行考察。取供試品粉末約5 g，各6份，精密稱定，再精密加入17種有機氯農(nóng)藥混合對照品溶液0.25 mL，按“2.3”項下方法制備樣品溶液，按“2.1”項下條件測定。計算回收率，結果平均回收率在81.2％～93.1％之間，RSD均小于4.0%（n=6），符合規(guī)定。測定結果見表3。表明方法的重復性和回收率滿足實驗要求。

2.5.6樣品測定應用本方法對海南、廣東、廣西、河南、湖北、浙江采集的10批次樣品進行檢測，均未檢出17 種有機氯農(nóng)藥，其原因可能為現(xiàn)階段國家對農(nóng)藥的使用管理日趨規(guī)范嚴格，環(huán)境中的農(nóng)藥殘留顯著減少，中藥材種養(yǎng)植基地也更加注重生態(tài)化管理。同時本次收集的樣品批次局限，更多樣品量仍待研究考察。

3結論

3.1基線偏移本次試驗為達到17中測定成分均達到較好的分離效果，故采用程序梯度升溫。基線因測試的溫度的不斷提高而緩慢向上偏移，經(jīng)方法學驗證，不影響最終結果的準確性，可以接受。

3.2樣品提取方法及檢測方式本次樣品前處理方式考察了丙酮和二氯甲烷有機溶劑直接超聲提取、固相萃取和快速樣品前處理（QuEChERS）3種方法，3種提取法的平均回收率分別為≥81.2%、75.4%、78.7%。最終采用了方便、經(jīng)濟、實用的直接超聲提取法，能較好地去除雜質，降低樣品對于儀器的污染。

有機氯類農(nóng)藥的殘留檢測方法主要有氣相色譜法-電子捕獲檢測法、氣相色譜串聯(lián)質譜法、液相色譜串聯(lián)質譜法，相比與后兩種檢測方法，氣相色譜在使用的普遍性和經(jīng)濟性上都有很大的優(yōu)勢，也是目前大部分生產(chǎn)企業(yè)配備的檢測儀器。

綜上所述，研究為地龍藥材中多種有機氯農(nóng)藥殘留的檢測、風險評估等研究提供了經(jīng)濟、實用、可靠的檢測方法，同時為監(jiān)管部門監(jiān)控當前地龍藥材中的農(nóng)藥殘留情況提供了一定參考數(shù)據(jù)［14-20］。參考文獻

［1］王美麗.固相萃取-氣相色譜質譜法定量檢測農(nóng)耕土壤中4種農(nóng)藥殘留［J］.化學工程師，2022，36（10）：38-40.

［2］侯宛玉，李維軍，陳浩，等.土壤中有機氯農(nóng)藥殘留檢測技術進展［J］. 農(nóng)業(yè)工程， 2022， 12（2）：48-52.

［3］苗水， 毛秀紅， 周恒，等.中藥中農(nóng)藥殘留防控的現(xiàn)狀與建議［J］.中國食品藥品監(jiān)管，2022（3）：96-103.

［4］任理雪，鄧高瓊，龍婉君，等.中藥材中常見農(nóng)藥殘留及其研究進展［J］.中國中藥雜志，2022，47（11）：2899-2908.

［5］劉芫汐，辜冬琳，茍琰，等.中藥材種植中農(nóng)藥使用情況及殘留現(xiàn)狀分析［J］.中國藥事，2022，36（5）：503-510.

［6］肖歐麗，李敏敏，李瑞瑆，等.中藥材中農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀及標準體系建設研究進展［J］.植物保護，2022，48（5）：1-14.

［7］霍甜甜，李彥超，周寧， 等.GC-MS/MS方法測定卷柏中66種農(nóng)藥殘留［J］.中國藥物評價，2021，38（1）：62-69.

［8］曾霞，于雅匯，王鳥，等.QuEChERS前處理技術在農(nóng)藥多殘留檢測中的研究進展［J］.當代化工研究，2022（6）：33-35.

［9］嚴倩茹，鄔偉魁，宋偉．QuEChERS技術在中藥安全檢測中的應用進展［J/OL］.云南民族大學學報（自然科學版）：1-10［2022-10-16］.http：//kns.cnki.net/kcms/detail/53.1192.N.20221012.1000.002.html

［10］程似錦，李恒，喻悅.氣相色譜法測定尿塞通片中有機氯類農(nóng)藥殘留量［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2020，16（12）：84-87.

［11］王瑩，王趙，喬菲，等.基于點評估方法的人參中農(nóng)藥殘留攝入暴露風險研究［J］.中國藥事，2018，32（10）：1342-1348.

［12］黃麗，陳惠玲.氣相色譜法快速測定中藥材中52種農(nóng)藥殘留［J］.海峽藥學，2022，34（5）：48-53.

［13］國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：373.

［14］馬存德，常暉，楊祎辰，等.經(jīng)典名方中地龍的本草考證［J］.中國實驗方劑學雜志，2022，28（10）：184-192.

［15］鄭坤明.QuEChERS-氣相色譜-串聯(lián)質譜法測定中藥材水蛭中73種農(nóng)藥殘留［J］.農(nóng)藥學學報，2022，24（3）：601-609.

［16］佚名.農(nóng)藥殘留問題將成為2017年重點檢查項目［J］.當代化工，2017，46（1）：27.

［17］李本淳，馬彧，程焱.GC-ECD法測定人參健脾丸中17種有機氯類農(nóng)藥殘留［J］.質量安全與檢驗檢測，2022，32（1）：29-32.

［18］王娟，李媛，王云霞， 等.GC-ECD法測定茵梔黃口服液（注射液）中23種有機氯和菊酯類農(nóng)藥殘留［J］.中南藥學，2021，19（1）：105-109.

［19］宋瑩瑩，徐芳菲，郭暢冰， 等.氣相色譜法測定人參中十六種有機氯含量的不確定度評定［J］.人參研究，2020，32（4）：17-21.

［20］高宇，潘曉鵬，于立亮，等.中國藥典2015版第一增補本人參、西洋參有機氯農(nóng)藥殘留量的測定［J］.人參研究，2019，31（2）：29-31.

（收稿日期：2022-12-18編輯：陶希睿）