李吉鵬,周興玉,李宇光

(1.金昌市金川區(qū)畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心,甘肅 金昌 737100;2.金川區(qū)雙灣鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,3.金昌卓犖農(nóng)牧有限公司)

口蹄疫(FMD)和小反芻獸疫(PPR)是一類動(dòng)物疫病,羊痘是二類動(dòng)物疫病,這三種疫病都是發(fā)病率高、傳播迅速、流行廣泛、死亡率高的烈性傳染病,嚴(yán)重威脅養(yǎng)殖業(yè)安全,一旦發(fā)病將造成重大經(jīng)濟(jì)損失,甚至威脅人類健康。目前,最有效的預(yù)防措施就是注射疫苗,通過人工主動(dòng)免疫獲得抗體保護(hù),提高畜群免疫力,達(dá)到疫病防控的目的。三種疫苗按照常規(guī)免疫程序,需分時(shí)段分別注射,這樣就給每年春秋兩季的集中免疫工作帶來許多困難。一是防疫員工作強(qiáng)度成倍增加;二是集中免疫時(shí)間托的過長(zhǎng);三是給免疫羊群帶來多次應(yīng)激反應(yīng);四是養(yǎng)殖戶配合免疫費(fèi)時(shí)費(fèi)力,程序繁瑣萌生抵觸情緒。在保證免疫效果的前提下,為了減小免疫勞動(dòng)強(qiáng)度,避免對(duì)羊只造成反復(fù)的應(yīng)激反應(yīng),能否采取同時(shí)分點(diǎn)注射口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘,將多種疫苗免疫程序精簡(jiǎn)化值得研究,以驗(yàn)證多種疫苗免疫同時(shí)進(jìn)行的可行性,以減輕基層動(dòng)物防疫人員的工作量,提高免疫密度和抗體合格率。

1 三種疫苗不同免疫方案

1.1 時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)于2022年4月～2022年8月在金昌市金川區(qū)雙灣鎮(zhèn)某羊場(chǎng)(北緯38°63′,東經(jīng)102°34′)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和材料

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 在羊場(chǎng)選擇飼養(yǎng)條件相當(dāng),健康狀況良好,未經(jīng)過口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘疫苗免疫的試驗(yàn)羊100只,每組20只,分成A、B、C、D、E,5個(gè)組。A組為對(duì)照組,其余四組為試驗(yàn)組。

1.2.2 疫苗選擇及接種劑量 口蹄疫O型-A型二價(jià)滅活苗,天康生物制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)2022003,規(guī)格100 mL/瓶,頸部肌肉注射,1 mL/只。山羊痘活疫苗,天康生物制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)2021005-1,規(guī)格100頭份/瓶,每瓶使用50 mL生理鹽水稀釋,尾部皮內(nèi)注射,0.5 mL/只。小反芻獸疫活疫苗,天康生物制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)2022004-1,規(guī)格100頭份/瓶,每瓶使用100 mL生理鹽水稀釋,頸部皮下注射,1 mL/只。

1.3 三種疫苗不同免疫方案試驗(yàn)方法

1.3.1 免疫方案 A組采用“三苗三針三免”,即先頸部肌肉注射羊口蹄疫疫苗,然后依次間隔14 d后分別頸部皮下注射小反芻獸疫和尾部皮內(nèi)注射羊痘疫苗;B組采用“三苗三針兩免a”,即先同時(shí)頸部肌肉注射羊口蹄疫疫苗和頸部皮下注射小反芻獸疫疫苗,然后14 d后尾部皮內(nèi)注射羊痘疫苗;C組采用“三苗三針兩免b”,即先同時(shí)頸部肌內(nèi)注射羊口蹄疫疫苗和尾部皮內(nèi)注射羊痘疫苗,然后14 d后頸部皮下注射小反芻獸疫疫苗;D組采用“三苗三針一免”,即同時(shí)經(jīng)頸部肌肉注射羊口蹄疫,頸部皮下注射小反芻獸疫疫苗,尾部皮內(nèi)注射羊痘疫苗; E組采用“三苗兩針一免”,即將小反芻獸疫和羊痘疫苗分別等量稀釋后混合為1針,羊口蹄疫疫苗另作1針,同時(shí)經(jīng)雙側(cè)頸部肌肉注射。詳見表1。

表1 試驗(yàn)免疫方案

1.3.2 免疫副反應(yīng)觀察 各組試驗(yàn)羊佩戴分組免疫耳標(biāo),完成疫苗注射后填寫免疫檔案。48 h內(nèi)仔細(xì)逐只觀察精神狀態(tài)、食欲、呼吸、體溫、可視黏膜、流涎、震顫、嘔吐、流產(chǎn)、休克死亡等應(yīng)激反應(yīng)情況。

1.3.3 采樣方案 每次免疫結(jié)束后30 d采集全血樣品。用5 mL真空采血管,頸靜脈采血3 mL以上,標(biāo)記羊耳標(biāo)號(hào),填寫采樣單。離心析出的血清樣品置于無菌試管,按各試驗(yàn)組封裝標(biāo)記,保存在—8°C環(huán)境待檢。

1.3.4 抗體檢測(cè)方法 試驗(yàn)檢測(cè)過程和結(jié)果判定嚴(yán)格按照ELISA檢測(cè)試劑說明操作。詳見表2。

表2 疫苗免疫抗體檢測(cè)試劑盒及判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理 免疫副反應(yīng)和抗體檢測(cè)結(jié)果按不同試驗(yàn)組及免疫疫苗分類統(tǒng)計(jì),分析5種免疫方案的免疫副反應(yīng)和抗體檢測(cè)結(jié)果差異。利用Excel軟件整理原始數(shù)據(jù),對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。詳見表3、表4。

表3 免疫副反應(yīng)統(tǒng)計(jì)表

表4 免疫抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表 只,%

2 三種疫苗不同免疫方案試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 免疫副反應(yīng)

由表3可知,5個(gè)試驗(yàn)組中,A組無免疫應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生,免疫應(yīng)激率和免疫應(yīng)激死亡率均為0;B組、C組、D組發(fā)生免疫應(yīng)激的羊均為1只,都沒有發(fā)生免疫應(yīng)激死亡,B組和C組的免疫應(yīng)激率和免疫應(yīng)激死亡率相同,分別為2.5%和0;E組發(fā)生免疫應(yīng)激的羊?yàn)?只,免疫應(yīng)激死亡1只,免疫應(yīng)激率和免疫應(yīng)激死亡率為5個(gè)組中最高的,分別達(dá)到15%和5%。由此可知,口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘三種疫苗依次間隔14 d后注射幾乎不會(huì)產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng);口蹄疫和小反芻獸疫疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射14 d后再注射羊痘疫苗和三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)的概率較低,但不會(huì)發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)死亡;小反芻獸疫和羊痘疫苗混合為1針,口蹄疫疫苗另作1針同時(shí)注射發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)的概率較高,會(huì)導(dǎo)致應(yīng)激反應(yīng)死亡。

2.2 免疫抗體合格率

由表4可知,5個(gè)試驗(yàn)組中,口蹄疫抗體合格率A組最高達(dá)到85%,其次為B組和C組均為80%,其次為B組的75%,E組最低為60%;小反芻獸疫抗體合格率A組最高達(dá)到95%,其次為C組達(dá)到85%,其次為B組和D組均為80%,E組最低為30%;羊痘抗體合格率A組和B組最高均達(dá)到90%,其次為C組和D組均達(dá)到85%,E組最低為20%。由此可知,口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘三種疫苗依次間隔14 d后注射抗體合格率均為最高;口蹄疫和小反芻獸疫疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射,14 d后再注射羊痘疫苗和三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射抗體合格率均在國家規(guī)定的70%以上;但是小反芻獸疫和羊痘疫苗混合為1針,口蹄疫疫苗另作1針同時(shí)注射抗體合格率均在60%以下。

3 三種疫苗不同免疫方案的選擇

3.1 三種疫苗組合免疫方案安全性有差異

采用“三苗三針兩免a”、“三苗三針兩免b”、“三苗三針一免”,較對(duì)照“三苗三針三免”方案均有免疫副反應(yīng)發(fā)生,但均無羊只因發(fā)生免疫副反應(yīng)而導(dǎo)致死亡的情況發(fā)生?！叭鐑舍樢幻狻?對(duì)照“三苗三針三免”方案免疫副反應(yīng)發(fā)生率和免疫應(yīng)激死亡率均較高。說明口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘疫苗三種疫苗作“三苗三針兩免”和“三苗三針一免”免疫方案是安全可行的。但作“三苗兩針一免”安全性無保障。

3.2 三種疫苗組合免疫方案免疫效果不同

對(duì)照“三苗三針三免”免疫方案,“三苗三針兩免”和“三苗三針一免”免疫方案的免疫抗體合格率均在75%以上,均達(dá)到了70%以上的國家標(biāo)準(zhǔn),免疫效果很好,免疫干擾幾乎沒有;“三苗三針一免”免疫方案的免疫抗體合格率均在60%以下,未能達(dá)到70%以上的國家標(biāo)準(zhǔn),免疫效果不佳,應(yīng)該是小反芻獸疫疫苗和羊痘疫苗混合之后,疫苗的免疫原性遭到破壞或產(chǎn)生免疫干擾造成的。

3.3 三種疫苗組合的最佳免疫方案

結(jié)合免疫安全性和免疫效果兩方面的因素,無疑“三苗三針三免”免疫方案無免疫副反應(yīng)發(fā)生,免疫抗體合格率最高,是最佳免疫方案。但是,考慮到增加一次免疫,組織、人力等經(jīng)濟(jì)成本就會(huì)成倍增加,在保證安全性和抗體合格率達(dá)標(biāo)的前提下,“三苗三針一免”是最經(jīng)濟(jì)省力的免疫方案;“三苗三針二免”是安全性、免疫效果、經(jīng)濟(jì)性結(jié)合最佳的免疫方案;“三苗兩針一免”在安全性和免疫效果方面均無保障。在基層春秋兩季集中免疫期間,各地要結(jié)合當(dāng)?shù)貙?shí)際,謹(jǐn)慎選擇適合的免疫方案,在大面積免疫注射前,須進(jìn)行小范圍免疫試驗(yàn),確認(rèn)安全可靠后,方可全面開展免疫接種,以較低的經(jīng)濟(jì)成本達(dá)到較好的免疫效果。