自身免疫性肝炎患者中隱匿性HBV感染的病毒學(xué)分析及臨床研究調(diào)查

王美娟 謝群 王華雨

自身免疫性肝炎(AIH)指由自身抗體導(dǎo)致自身肝臟損害所引起的慢性進(jìn)行性肝臟炎癥性疾病,可發(fā)展為肝硬化和肝衰竭[1-2]。研究報道稱AIH患者會同時患有隱匿性嗜肝病毒感染,如隱匿性乙型肝炎(OBI)[3-4]。病毒感染導(dǎo)致的肝細(xì)胞損傷和抗原暴露會破壞自身免疫耐受并引發(fā)自身免疫過程,導(dǎo)致明顯的自身免疫性疾病[5]。此外,AIH患者接受免疫抑制治療會重新激活病毒[6]。作為乙型肝炎病毒(HBV)感染的一種特殊形式,OBI患者體內(nèi)通常檢測不到HBsAg的存在,但可以在血清或肝組織中檢測到低載量HBV DNA的存在,常低于200 IU/mL[7]。在接受全身性放化療或免疫抑制治療的患者中,OBI的檢出至關(guān)重要,他們存在HBV再激活甚或是暴發(fā)性肝功能衰竭的風(fēng)險[8]。本研究旨在調(diào)研AIH患者OBI的患病率并分析其病毒學(xué)特征。

資料與方法

一、研究對象

連續(xù)選取2015年1月—2022年8月期間海安市人民醫(yī)院收治的AIH患者69例,其中男性7例、女性62例,年齡50(30, 73)歲。AIH依據(jù)國際自身免疫性肝炎組(IAIHG)的診斷評分系統(tǒng)[9],對納入病例的臨床資料進(jìn)行評估。排除標(biāo)準(zhǔn):①其他嗜肝性病毒感染;②酒精性、藥物性和代謝紊亂性肝損傷;③其他自身免疫性肝病,如原發(fā)性膽汁性肝硬化。研究符合醫(yī)院倫理委員會要求。

二、檢測方式

經(jīng)TBA-120FR型生化分析儀(Toshiba公司,日本)測定血生化指標(biāo);化學(xué)發(fā)光法(Cobas e601分析儀,Roche公司,德國)測定HBV血清學(xué)標(biāo)志物;間接免疫熒光法、免疫印跡法(Euroimmun公司,德國)測定自身抗體。HBV DNA提取采用QIAamp DNA blood mini kit(QIAGEN公司,德國),通過半巢式PCR方法擴(kuò)增HBV DNA陽性樣品中S區(qū)(122個核苷酸結(jié)合位點(diǎn):84至205),獲得PCR產(chǎn)物序列,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定、回收純化后進(jìn)行測序(上海生工生物工程公司),序列輸入HBVseq數(shù)據(jù)庫,得到核苷酸替換位點(diǎn)以及基因分型結(jié)果。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 24. 0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)量資料以[M(P25,P75)]表示,采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以%表示, 采用卡方檢驗(yàn)。

結(jié) 果

一、臨床資料

OBI陽性、陰性病例分別為14例、55例,AIH患者中OBI陽性率為20.3%。比較OBI陽性、陰性病例臨床資料,除抗-HBc、抗-HBs及抗-HBe陽性例數(shù)外,兩組其余臨床資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

二、OBI陽性AIH患者分子特征

為評估AIH患者OBI隱匿狀態(tài)與HBV基因突變的關(guān)系,我們分析了S區(qū)核苷酸結(jié)合位點(diǎn)替換情況。HBV基因分型結(jié)果顯示,14例OBI陽性AIH患者中B型、C型分別為6例(42.8%)、8例(57.2%)?；駼型、C型OBI陽性AIH患者S區(qū)核苷酸替換位點(diǎn)分別為1(1/122, 0.8%)、12(12/122, 9.8%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.832,P=0.002);兩組總的核苷酸結(jié)合位點(diǎn)替換頻率為0.1%(1/122*6)、1.2%(12/122*8),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.614,P=0.010)。

討 論

目前有關(guān)AIH患者OBI病率和病毒學(xué)特征的研究報道較少。Georgiadou 等報道,在13.6%的AIH患者血清中檢測到HBV DNA,并證實(shí)存在OBI,不過隨后隨訪觀察并未發(fā)現(xiàn)OBI對AIH患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)產(chǎn)生不良影響[4]。在這項(xiàng)研究中,我們發(fā)現(xiàn)超1/5的AIH病例合并感染OBI,以上結(jié)果表明OBI與AIH有很強(qiáng)的相關(guān)性。此外我們還分析了OBI陽性AIH患者的病毒學(xué)特征,以便更好地了解在AIH背景下的嗜肝病毒感染狀況。

抗-HBc是既往HBV感染的重要標(biāo)志。我們發(fā)現(xiàn),雖然抗-HBc陽性與OBI之間沒有直接聯(lián)系,但OBI陽性AIH患者與既往HBV感染標(biāo)記物(包括抗-HBs、抗-HBc及抗-HBe)的陽性率是相關(guān)的。HBV基因型的分布因地域而異[10]。國內(nèi)HBV基因型主要為B和C型[11]。在我們的研究中,HBV基因型C型占主要部分(8例,57.2%),其次是基因型B型(6例,42.8%)。一些研究報道稱,HBV基因型與疾病進(jìn)展以及治療效果相關(guān)。比如,HBV基因B型與HBeAg血清轉(zhuǎn)換有關(guān),基因C型則與較高的肝癌發(fā)病率聯(lián)系密切[12]。不過,在該項(xiàng)研究中,我們發(fā)現(xiàn)OBI陽性、陰性AIH患者肝功能、自身抗體比較并無明顯差異。雖然OBI陽性AIH患者中肝硬化占比高于OBI陰性的病例,但差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能的原因在于本次研究納入的AIH病例較少。此外,我們也并未發(fā)現(xiàn)基因B型、C型OBI陽性AIH患者肝功能、自身抗體以及肝硬化等之間的區(qū)別(文章中未列出)。

有研究表明,位于S區(qū)核苷酸124-147位點(diǎn)突變是OBI的主要促成因素[13]。例如,sG145R和sD144A能夠干擾OBI病例HBsAg的檢測[14]。OBI有病毒傳播的風(fēng)險,與疾病進(jìn)展的風(fēng)險增加有關(guān)[15]。Huang等[16]報道稱,S區(qū)“α”決定簇的突變(如sG119R、sK141E和sG145R)可導(dǎo)致OBI病例HBsAg檢測失敗。此外,還有研究表明,S區(qū)“α”決定簇外的核苷酸替換(如sE2G、sC69*和sL98V)與較低的血清HBsAg和DNA水平相關(guān)[16]。我們發(fā)現(xiàn),基因C型OBI陽性AIH患者S區(qū)核苷酸替換位點(diǎn)以及頻率均顯著高于B型。這與Chen 等[17]報道的結(jié)論是一致的,他們還分析了基因C型中核苷酸替換位點(diǎn)的分布,包括既往證實(shí)的“α”決定簇內(nèi)的免疫逃逸突變(sT125A、sI126T、sP127R、sG130N、sT140I和sP142S)、羧基末端截短突變(sW172*)、缺失突變(AAs 113e116)以及新發(fā)現(xiàn)的位點(diǎn)(sP111L和sL176P)。羧基末端截短突變可導(dǎo)致DNA水平降低。Wang等[18]報道,sW172*突變會導(dǎo)致HBV相關(guān)腫瘤的發(fā)生。S區(qū)核苷酸位點(diǎn)突變的存在和替換程度有著一定的預(yù)測性臨床意義。

通過本次研究分析,我們發(fā)現(xiàn)AIH患者OBI陽性患病率遠(yuǎn)高于普通人群。因此,對于AIH患者,尤其是HBV血清學(xué)標(biāo)志物陽性病例,有必要定期HBV DNA監(jiān)測,以評估HBV的再激活。此外,OBI診斷對于同時接受免疫抑制治療AIH患者的治療策略制定具有指導(dǎo)價值。我們證實(shí)了既往研究所報道的HBV基因組S區(qū)核苷酸結(jié)合位點(diǎn)的替換與OBI的相關(guān)性。通過對AIH患者OBI陽性率的認(rèn)識和對其發(fā)病機(jī)制的理解可以有助于臨床實(shí)踐作出及時診斷和恰當(dāng)處理。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。