四川省某生豬核心育種場2023年主要疫病的監(jiān)測與分析

聶海波，鄧 飛，李 麗，邱明雙，陳依婷，陳弟詩*

（1.四川省南充市順慶區(qū)蘆溪畜牧獸醫(yī)中心站，四川 南充 637000；1.四川省動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041；3.四川農(nóng)業(yè)大學，四川 成都 611130）

由于長期受種源疫病影響，四川省種豬利用率相對較低，各類新發(fā)、突發(fā)疫病仍然是制約生豬種業(yè)發(fā)展和養(yǎng)殖健康的頭號問題。要從源頭上阻斷疫病在生豬產(chǎn)業(yè)鏈中的傳播，就必須從種源疫病凈化工作抓起。目前，我國要求開展非洲豬瘟（ASF）無疫區(qū)、無疫小區(qū)建設(shè)和主要動物疫病PRRSV、CSFV、PRV 的凈化工作。為了解四川省生豬核心育種場的疫病凈化工作實施情況，監(jiān)測種豬疫病防控及免疫情況，增強疫情預警能力，本研究對某生豬核心育種場2023年不同群體種豬的90 份扁桃體和270 份血清進行了ASFV、PRRSV、CSFV、PRV 病原核酸、野毒及免疫抗體的檢測，為該場及全省種豬疫病防控和凈化提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源 采集不同階段豬群扁桃體樣品共90 份，來源于不少于3 棟豬舍的豬只，其中種公豬20頭，經(jīng)產(chǎn)母豬45頭（1～2胎15頭，3～4胎15 頭，5 胎次及以上15 頭），后備豬25 頭（不同體重）；采集血清樣本270 份（血清包含扁桃體樣本生豬對應(yīng)的血清），其中種公豬70 份，后備種豬100 份，經(jīng)產(chǎn)母豬100 份。扁桃體和血清樣本于-20 ℃冷凍保存。各豬群均按常規(guī)程序免疫豬瘟疫苗和偽狂犬基因缺失疫苗，未免疫藍耳病疫苗。

1.2 試劑 病毒DNA/RNA 提取試劑盒（磁珠法），購自西安天隆公司。病原核酸檢測試劑：非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒，購自國生研公司；豬瘟病毒和豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒雙重熒光RT-PCR 檢測試劑盒，購自世紀元亨公司。血清ELISA 檢測試劑：非洲豬瘟阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，購自青島立見公司；豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA 檢測試劑盒，購自ID.vet 公司；PRV-gE 和CSFV 抗體ELISA 檢測試劑盒，購自美國IDEXX公司；PRV-gB抗體ELISA檢測試劑盒，購自Biostoneah公司。

1.3 檢測方法 90 份扁桃體樣品經(jīng)過組織破碎儀破碎后，使用全自動核酸提取儀和上述試劑盒提取病毒核酸，然后用上述實時熒光PCR（RT-PCR）檢測試劑盒檢測ASFV、CSFV 和PRRSV 病原核酸；270 份血清樣本使用上述各ELISA 檢測試劑盒進行ASFV、PRRSV、CSFV、PRV-gE、PRV-gB抗體檢測。嚴格按照試劑盒使用說明進行病原核酸和抗體檢測，并進行結(jié)果判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原核酸檢測 采用相應(yīng)試劑盒對該場不同豬群的90 份扁桃體樣本進行ASFV、PRRSV 和CSFV 病原核酸檢測，結(jié)果顯示ASFV、PRRSV 和CSFV三種病原核酸均為陰性（圖1、圖2）。

圖2 CSFV和PRRSV雙重熒光RT-PCR檢測

2.2 抗體檢測

2.2.1 ASFV 抗體 結(jié)果得出該場不同豬群270份血清樣品的ASFV抗體均為陰性。

2.2.2 CSFV抗體 結(jié)果顯示：該場不同豬群270份血清樣品中，CSFV 抗體陽性樣品有227 份，平均抗體陽性率為84.07%，種公豬、后備種豬、1～2胎次母豬、3～4 胎次母豬、5 胎次及以上母豬的CSFV 抗體陽性率分別為62.86%、95%、81.40%、91.30%、94.12%，離散度（CV）在16%～30%之間。不同豬群抗體平均陽性率從高到低依次為后備種豬＞5胎次及以上母豬＞3～4胎次母豬＞1～2胎次母豬＞種公豬（表1、圖3）。可見該場CSFV免疫較好，抗體水平均達到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%合格線要求，但種公豬群體的抗體陽性率偏低、離散度較高，說明種公豬群的免疫整齊度較差，群體個體差異較大，CSFV免疫有待優(yōu)化。

表1 不同階段豬群CSFV抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計

圖3 不同階段豬群CSFV抗體水平

2.2.3 PRV-gE和PRV-gB抗體 結(jié)果顯示：該場不同豬群270份血清樣品中，PRV-gE（野毒）抗體均為陰性，種公豬、后備種豬、1～2胎次母豬、3～4胎次母豬、5胎次及以上母豬的PRV-gE抗體離散度分別為5.90%、8.29%、6.86%、6.55%、6.83%（表3），均較低；PRV-gB抗體陽性樣品有253份，樣品平均陽性率達93.70%，種公豬、后備種豬、1～2 胎次母豬、3～4 胎次母豬、5 胎次及以上母豬的PRV-gB 抗體陽性率分別為87.14%、93%、97.67%、100%、100%，離散度分別為19.78%、18.13%、9.35%、9.28%、9.46%（表2、圖4）?？梢娫搱龈黟B(yǎng)殖階段均無PRV 野毒感染，PRV 群體免疫抗體水平總體較好，整齊度高；不同胎次生產(chǎn)母豬的PRV-gB 免疫水平和整齊度也非常理想。

表2 不同階段豬群PRV-gB抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計

表3 不同階段豬群不同疫病抗體的離散度統(tǒng)計

圖4 不同階段豬群PRV-gB抗體水平

2.2.4 PRRSV 抗體 結(jié)果顯示：該場不同豬群270 份血清樣品的PRRSV 抗體均為陰性，種公豬、后備種豬、1～2 胎次母豬、3～4 胎次母豬、5胎次及以上母豬的離散度分別為14.78%、7.18%、5.50%、5.34%、5.48%（表3），都較低。該場未免疫過PRRSV疫苗，病原核酸和抗體檢測也全為陰性，說明該場豬群未感染過豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論 自非洲豬瘟疫情發(fā)生以來，全國各地核心育種場都加大了生物安全防控手段和措施，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求以種畜禽場為核心，以垂直傳播性疫病和重大疫病為重點，深入開展疫病凈化工作，推進畜禽種業(yè)振興和畜牧業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。全國各地也積極推進生豬相關(guān)疫病凈化工作，四川省獸醫(yī)主管部門也非常重視，動物疫控系統(tǒng)以育種場為起點，指導核心育種場主動開展凈化。從本次監(jiān)測情況看，凈化取得了切實成效，但CSFV、PRRSV、PRV 等疫病仍然是引起豬場繁殖障礙類、呼吸道類以及免疫抑制類疾病的核心病原，種豬場和規(guī)?；瘓鋈源嬖诟腥尽?jù)2015～2019 年P(guān)RV 流行病學調(diào)查結(jié)果，5 年間均未發(fā)現(xiàn)PRV野毒感染，且gB抗體總陽性率為97.95%，免疫水平較好［1］。2019～2020年對四川省5個片區(qū)17個規(guī)模豬場進行PRV血清流行病學調(diào)查，結(jié)果得出PRV-gB 抗體總陽性率為84.51%，表明規(guī)模豬場PRV 總體免疫效果較好，但PRV-gE 抗體總陽性率為15.63%，哺乳仔豬、育肥豬和經(jīng)產(chǎn)母豬群的野毒感染情況較嚴重［2］。

2011～2019 年對山東省16 個地市717 個規(guī)模豬場的22 465份血清樣品進行CSFV抗體檢測和分析，得出種豬場的場群免疫合格率達73.84%，個體合格率達77.54%，種豬場的免疫效果均優(yōu)于商品代豬場［3］。對江蘇四個地區(qū)22 家規(guī)?；i場的妊娠母豬（497份樣品）和保育仔豬（1 060份樣品）血清進行檢測，結(jié)果顯示妊娠母豬CSFV 和PRRSV 的平均抗體陽性率分別為83.70%和85.11%，從整個豬群來看，該地區(qū)使用的疫苗及免疫手段均能發(fā)揮較好的免疫保護作用［4］。2018～2021年上海嘉定區(qū)2個規(guī)模豬場的CSF、PRRS、PR 免疫抗體平均合格率分別為84.7%、95.6%、95.9%，均超過了70%的國家合格線標準，表明CSF、PRRS和PR的免疫抗體水平良好，PR凈化效果明顯［5］。2015～2019年對湖南省5 個原種豬場的血清及扁桃體樣品進行檢測，結(jié)果顯示：CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV 病原陽性率分別為0、2.1%、1.3%、9.5%；CSFV、PRRSV、PRV-gB 免疫抗體合格率分別為96.9%、99.7%、98.7%，表明這5 個原種豬場的CSFV、PRRSV、PRV抗體保護水平良好，但部分原種豬場仍存在不同程度的PRRSV、PRV 感染［6］。2015～2017年對國內(nèi)2 012 個豬場的PRRSV 抗體進行監(jiān)測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)平均抗體陽性率逐年升高，由2015 年的75.6%逐步升至2017年的81.3%［7］。2021 年從湖北省7 個規(guī)模豬場疑似PRRSV 感染豬群以及所有種公豬群的3 324 份樣品中檢出PRRSV 陽性樣品323 份，陽性率為9.72%［8］。因此，對CSFV、PRRSV、PRV等疾病的種源凈化還需要加大多方面投入和力度。

3.2 結(jié)論 本次采樣監(jiān)測的生豬核心育種場已持續(xù)多年開展主要疫病凈化工作，從病原核酸檢測結(jié)果來看，公豬、妊娠母豬、后備豬、保育豬和仔豬階段豬群均未發(fā)現(xiàn)ASF、CSF、PRRS、PR帶毒情況；抗體檢測結(jié)果顯示ASF 和PRRS 抗體均呈陰性，表明該場從未感染過ASFV 和PRRSV。各階段豬群的CSFV 和PRV-gB 免疫抗體平均陽性率達84.07%和93.70%，均超過了70%的國家合格線標準，表明該核心育種場的疫病綜合防治措施到位，實施的凈化方案可行，凈化效果良好，無ASFV、PRRSV、CSFV感染，保持PRV和PRRSV陰性場。從不同階段豬群的檢測結(jié)果來看，該場3～4胎次母豬的CSFV、PRRSV、PRV三種主要疫病的抗體水平相對較高，離散度相對最低，表明該階段豬群相對比較穩(wěn)定；但公豬CSFV 和PRV抗體陽性率、平均阻斷率均相對最低，各抗體離散度均最高，抗體整齊度較差，可根據(jù)實際情況合理優(yōu)化和調(diào)整種公豬的免疫措施。該場作為核心育種場，需繼續(xù)堅持定期的免疫監(jiān)測，結(jié)合養(yǎng)殖情況和凈化效果，做好生物安全等綜合措施。

基于目前全國動物疫病形勢，如ASFV 毒株多樣性，PRRSV 不斷變異，引種帶來新的病毒如豬圓環(huán)病毒3、4 型（PCV3、4 型）、豬塞內(nèi)卡病毒（SVA）、豬蓋塔病毒（GETV）等，使陰性豬場感染壓力不斷增大。通過核心育種場疫病凈化，有助于動物防疫工作者和養(yǎng)殖場找差距、補短板、堵漏洞、強弱項，從源頭上減輕非洲豬瘟等重大動物疫病的防控壓力，降低和阻斷其他疾病傳播風險，不斷提高疫病風險防控水平，保障四川省生豬產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。