荔枝核香薰療法對(duì)慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬及血清5-HT、DA的干預(yù)作用

趙嘉欣,黃文海,張俊鴻,遲嘉墨,王澤慧,夏 猛

(廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西 南寧 530000)

抑郁癥是由各種原因引起的,是最常見(jiàn)的精神障礙,主要臨床表現(xiàn)為持久性的情緒低落、思維遲緩、意志活動(dòng)減退等軀體不適癥狀。 以顯著而持久的心境低落、思維遲緩、認(rèn)知功能損害、意志活動(dòng)減退和軀體癥狀為主要臨床特征的一類(lèi)心境障礙[1]。中醫(yī)將抑郁癥歸入“郁證”范疇[2],具有高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率、高自殺率的特點(diǎn)[3],主要為情志內(nèi)傷所致,其機(jī)制為肝失疏泄、過(guò)思傷脾、臟腑氣血陰陽(yáng)失調(diào)。目前,臨床上用于治療抑郁癥的西醫(yī)藥物存在很多不足之處,如不良反應(yīng)大、依賴(lài)性強(qiáng)、依從性低、出現(xiàn)治療抵制等[4],而中藥湯劑內(nèi)服治療的煎煮方式、氣味口感等方面讓患者難以接受,且辨證論治難全面推廣。香薰療法是通過(guò)中草藥氣味的芳香性或由其提煉出來(lái)的香薰精油,通過(guò)多種方式作用于人體,從而起到調(diào)節(jié)臟腑經(jīng)絡(luò)和陰陽(yáng)的作用。荔枝核是廣西道地藥材,具有行氣散結(jié)、止痛功效,但對(duì)于抑郁癥的治療,目前尚少見(jiàn)相關(guān)研究。因此,本實(shí)驗(yàn)采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方法,采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激(CUMS)抑郁大鼠模型[5-6],通過(guò)體重增長(zhǎng)數(shù)檢測(cè)和糖水消耗實(shí)驗(yàn)檢測(cè)觀察大鼠抑郁情緒變化,并通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)大鼠海馬和血清中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)的變化,探討荔枝核香熏輔助療法的作用功效和機(jī)制。本研究對(duì)于進(jìn)一步開(kāi)發(fā)荔枝核香薰療法的有效性,以及廣西道地藥材價(jià)值的開(kāi)發(fā)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1材料 SD大鼠32只,體重(240±20)g,雄性,從湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司購(gòu)入,合格證號(hào):430727211101807037。荔枝核精油,萃取裝置:超臨界CO2萃取(10±1)L,分離壓力:8,分離溫度:45.6 ℃,提取時(shí)間202 min。擴(kuò)香機(jī)(閣來(lái)美,型號(hào):2806)。酶標(biāo)分析儀(德鐵,型號(hào):HBS-1096A)。低溫離心機(jī)(Eppendorf,型號(hào):5418R)。大鼠5-HT試劑盒(Bioswamp,型號(hào):RA20031)。大鼠DA試劑盒(Bioswamp,型號(hào):RA20050)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前適應(yīng)性飼養(yǎng)大鼠7 d。

1.2方法

1.2.1建模 將大鼠隨機(jī)分組,分別為空白組、模型組、百憂解治療組、荔枝核香薰輔助治療組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)為空白組、模型組、百憂解組、百憂解輔香薰療法組),每組8只,分組方法采用隨機(jī)數(shù)字表法。除空白組外,其余各組大鼠造模方式均采用孤養(yǎng)結(jié)合CUMS進(jìn)行,分別為24 h禁食,4 ℃冷水游泳5 min,3 h閃光照明,24 h潮濕墊料,夾尾1 min,噪聲干擾3 h,24 h禁水,擁擠飼養(yǎng)4 h,共8種刺激,隨機(jī)出現(xiàn)2～3次,每天1種,持續(xù)21 d[7]。

1.2.2給藥與取材 建立模型成功后即開(kāi)始給藥,百憂解組胃飼鹽酸氟西汀1.8 mg/(kg·d);百憂解輔香薰療法組:在西藥氟西汀治療基礎(chǔ)上,在保證空氣流通的玻璃箱內(nèi)放置荔枝核精油霧化器進(jìn)行霧化45 min,連續(xù)14 d。模型組、空白組大鼠每天灌胃生理鹽水2 mL/(kg·d),持續(xù)14 d。在實(shí)驗(yàn)第1、7、14、21、28、35天,每組8只大鼠進(jìn)行體重增長(zhǎng)數(shù)檢測(cè);第 7、14、21、28、35天,每組8只大鼠進(jìn)行糖水消耗量檢測(cè)。給藥結(jié)束后即第35天進(jìn)行ELISA檢測(cè)。

1.2.3大鼠體重情況 對(duì)大鼠進(jìn)行體重稱(chēng)取,計(jì)算其體重增長(zhǎng)數(shù)(ΔW),觀察各組間體重變化趨勢(shì),評(píng)估實(shí)驗(yàn)造模結(jié)果。

1.2.4糖水消耗試驗(yàn) 在對(duì)各組大鼠進(jìn)行測(cè)試前24 h禁食、禁水,在15:00～16:00進(jìn)行大鼠糖水消耗試驗(yàn)。同時(shí)采用1%蔗糖水供給大鼠飲用,1 h后取走瓶子,分別進(jìn)行稱(chēng)重,計(jì)算前后糖水消耗量,分別于第7、14、21、28、35天進(jìn)行檢測(cè)[8]。

1.2.5大鼠海馬及血清中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA水平的測(cè)定 治療14 d結(jié)束后,大鼠斷頭后取雙側(cè)海馬和血清,使用ELISA試劑盒按常規(guī)步驟進(jìn)行測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫軸,吸光組(OD)值作為縱軸,觀察變化趨勢(shì)[9]。

2 結(jié) 果

2.1大鼠體重檢測(cè) 第14～21天,與空白組比較,模型組、百憂解組、百憂解輔香薰療法組大鼠體重差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第28～35天,與空白組比較,模型組大鼠體重增長(zhǎng)數(shù)減少(P>0.05);與模型組比較,百憂解組、百憂解輔香薰療法大鼠體重增長(zhǎng)數(shù)均增加(P>0.05);與百憂解組比較,百憂解輔香薰療法組大鼠體重增長(zhǎng)數(shù)增加(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠在抑郁形成不同時(shí)間段的體重增長(zhǎng)數(shù)比較

2.2糖水消耗量檢測(cè) 在第14、21天時(shí),與空白組比較,模型組、百憂解組、百憂解輔香薰療法組大鼠糖水消耗量減少(P<0.01)。第28天時(shí),與空白組比較,百憂解組、模型組、百憂解輔香薰療法組大鼠糖水消耗量均減少(P<0.01),與模型組比較,百憂解組、百憂解輔香薰療法組大鼠糖水消耗量均無(wú)明顯差異(P>0.05);與百憂解組比較,百憂解輔香薰療法組大鼠糖水消耗量均無(wú)明顯差異(P>0.05)。第35天時(shí),與空白組比較,模型組大鼠糖水消耗量減少(P<0.01),百憂解組減少(P<0.05),百憂解輔香薰療法組無(wú)明顯差異(P>0.05);與模型組比較,百憂解組大鼠糖水消耗量增加(P<0.05),百憂解輔香薰療法組大鼠糖水消耗量增加(P<0.01),與百憂解組比較,百憂解輔香薰療法組大鼠糖水消耗量增加(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠在抑郁形成不同時(shí)間段的糖水消耗量比較

表3 各組大鼠海馬及血清中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA濃度的比較

2.3各組大鼠海馬及血清中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA水平的測(cè)定 與空白組比較,模型組、百憂解組大鼠5-HT、DA水平均明顯減少(P<0.01),百憂解輔香薰療法組大鼠5-HT、DA水平無(wú)明顯差異(P>0.05);與模型組比較,百憂解組、百憂解輔香薰療法組大鼠5-HT、DA水平均明顯升高(P<0.01);與百憂解組比較,百憂解輔香薰療法組大鼠5-HT、DA水平均明顯升高(P<0.05)。見(jiàn)表 3。見(jiàn)圖1、 2。

圖1 各組大鼠5-HT濃度

圖2 各組大鼠DA濃度

3 討 論

抑郁癥指情緒低落、軀體和認(rèn)知的多方面障礙,是精神病里的常見(jiàn)病之一。其主要表現(xiàn)為在生活中對(duì)喜歡的事物欲望降低,常常心情低落,出現(xiàn)持續(xù)2周以上的悲傷。抑郁癥對(duì)患者造成的痛苦是長(zhǎng)期的,輕者被低落情緒困擾,對(duì)生活失去動(dòng)力,嚴(yán)重者可能產(chǎn)生自殺的想法或行為。世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè),未來(lái)抑郁癥將在世界疾病負(fù)擔(dān)的排名中上升至第2位,如果任其發(fā)展,將進(jìn)一步加劇社會(huì)的醫(yī)療負(fù)擔(dān),對(duì)人類(lèi)健康造成一定的負(fù)面影響[10]。近年來(lái),中藥香薰治療的方法作為心理學(xué)的一種新型治療方式,適應(yīng)范圍廣、無(wú)不良反應(yīng)、方便實(shí)惠,能夠被眾多患者所接受。而中藥香薰的新型治療方式也被應(yīng)用于臨床各個(gè)方面,如在臨床上應(yīng)用香薰療法能夠顯著降低患者治療期間的不良反應(yīng)等[11-12]。抑郁癥在中醫(yī)理論體系中的發(fā)病多由情志和體質(zhì)等因素引起。目前,在對(duì)抑郁癥的臨床治療上,多采用單一的西藥治療方式,百憂解作為臨床常用藥仍存在不良反應(yīng)大、依賴(lài)性高等不足之處。荔枝核性溫、歸肝、肺經(jīng),具有行氣散結(jié)、散寒止痛的作用。香薰療法將荔枝核中的有效成分提取并制作成精油。香薰精油易于透過(guò)血-腦脊液屏障,具有不滯留、不良反應(yīng)少、高滲透等特點(diǎn),通過(guò)呼吸道或皮膚吸收進(jìn)入機(jī)體,從而起到疏肝解郁、行氣散結(jié)的治療作用,達(dá)到治療疾病和未病先防的目的。

本研究使用CUMS方法建立研究模型,CUMS模型是目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中廣泛使用的模型[13]。各組大鼠在接受 21 d慢性溫和應(yīng)激刺激及14 d治療后,除空白組外,其余各組大鼠糖水消耗量均減少,表明慢性應(yīng)激破壞了大鼠的獎(jiǎng)賞機(jī)制,從而出現(xiàn)反應(yīng)快感缺失、興趣減少的癥狀[14]。同時(shí)伴有體重增長(zhǎng)、糖水消耗量顯著減少,表現(xiàn)出大鼠探充行為和自主活動(dòng)減弱,與抑郁癥患者伴有的食欲下降、體重減輕、心境低落及思維遲緩、意志活動(dòng)減退等精神運(yùn)動(dòng)遲滯癥狀相似,上述大鼠行為均證明了大鼠處于抑郁狀態(tài)。百憂解能有效改善抑郁癥狀,是臨床上用于治療抑郁癥的常用藥,通過(guò)百憂解輔香薰療法組與百憂解組比較,可提示荔枝核香薰輔助治療可有效治療CUMS產(chǎn)生的抑郁大鼠。DA系統(tǒng)是運(yùn)動(dòng)活動(dòng)、動(dòng)機(jī)、注意力和獎(jiǎng)賞處理的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器,起源于黑質(zhì)和腹側(cè)被蓋區(qū)的DA能投射終止于紋狀體,失調(diào)與許多神經(jīng)精神疾病有關(guān)。5-HT是一種存在于大多數(shù)動(dòng)物門(mén)中的神經(jīng)調(diào)節(jié)劑,無(wú)論是在脊椎動(dòng)物還是無(wú)脊椎動(dòng)物中,5-HT系統(tǒng)都能調(diào)節(jié)認(rèn)知和行為功能,參與不同水平的應(yīng)激反應(yīng)和情緒障礙[15]。通過(guò)檢測(cè)各組大鼠血清5-HT和DA水平、觀察其變化趨勢(shì),結(jié)果提示:與模型組、百憂解組比較,百憂解輔香薰療法組大鼠5-HT、DA水平均顯著升高(P<0.05)。

本研究結(jié)果表明,百憂解輔助荔枝核香薰的治療效果優(yōu)于百憂解單藥的治療,荔枝核香薰輔助治療可提高抑郁模型大鼠內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量,故荔枝核香薰的抗抑郁機(jī)制可能與增加腦內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)。目前,檢索的文獻(xiàn)中,并未提及香薰的有害性,大眾對(duì)于香薰的接受程度較高[16],且香薰精油的使用方式簡(jiǎn)便,面向群體廣泛,值得臨床上推廣使用。隨著中醫(yī)藥新治療技術(shù)的發(fā)展和創(chuàng)新及對(duì)中藥藥物的不斷研究和深化,中藥香薰的新型治療方式有望在未來(lái)更上一個(gè)臺(tái)階,為臨床治療提供更有力的幫助。抑郁癥的中醫(yī)治療應(yīng)衷中參西,弘揚(yáng)經(jīng)典,敢于創(chuàng)新,不局限于故紙中求學(xué)問(wèn),注重中醫(yī)理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的聯(lián)系,在中醫(yī)的傳承道路上進(jìn)一步拓展,從中醫(yī)的診治思維出發(fā),以四診合參、辨證論治為提綱,結(jié)合西醫(yī)治療方式,守正創(chuàng)新,展現(xiàn)中醫(yī)治療技術(shù)對(duì)于治療抑郁癥的優(yōu)勢(shì),為預(yù)防及治療抑郁癥提供中醫(yī)思路。