解冰輝，段曉紅，李同川，王貴江，羅文學(xué)，駱菲，馬軍紅，張軍輝

（河北省畜牧良種工作總站，河北石家莊 050000）

傳統(tǒng)的豬常溫精液檢測使用的是人工判斷精子活力和密度，檢測方法比較落后，人為誤差較大， 而隨著精準(zhǔn)智能化的研發(fā)和推廣新型的豬精液檢測儀器CASA 系統(tǒng)出現(xiàn)，多數(shù)中大型公豬站已經(jīng)采用， 它更快捷和精準(zhǔn)的檢測出精子活力和密度；舊標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)要求比較單一，深部輸精技術(shù)在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用效果顯著； 舊標(biāo)準(zhǔn)使用的福爾馬林固定液， 從環(huán)保的角度對人員和環(huán)境已經(jīng)不太適用。 新標(biāo)準(zhǔn)及時修訂實(shí)施使種豬常溫精液生產(chǎn)經(jīng)營行為更標(biāo)準(zhǔn)更規(guī)范更具有先進(jìn)性和科學(xué)性， 筆者對新舊標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了梳理，便于檢測人員操作、避免出現(xiàn)數(shù)據(jù)誤差和保證檢測技術(shù)方法一致性。

1 常溫精液質(zhì)量要求的比對

新舊比對，一是檢測項(xiàng)目減少2 項(xiàng)：外觀和有效期；二是劑量，舊標(biāo)準(zhǔn)：地方品種40～50 毫升，其他80～100 毫升；新標(biāo)準(zhǔn)：常規(guī)輸精≥80.0毫升,深部輸精≥60.0 毫升，地方品種≥40.0 毫升；三是精子活力新舊不變≥60.0%；四是每劑量中直線前向運(yùn)動精子數(shù)，舊標(biāo)準(zhǔn)：地方品種≥10 億，其他≥25 億；新標(biāo)準(zhǔn)：常規(guī)輸精≥18.0 億,深部輸精≥12.0 億，地方品種≥10.0 億；五是精子畸形率新舊不變≤20%。

2 抽樣的比對

舊標(biāo)準(zhǔn)： 抽樣方法與批次化生產(chǎn)實(shí)際不符，不便于操作。

新標(biāo)準(zhǔn)：抽樣方法條理清晰，可操作性強(qiáng)。出廠檢驗(yàn)：以每批次生產(chǎn)量隨機(jī)抽取，取樣量不少于10%。 型式檢驗(yàn)： 以每批次生產(chǎn)量隨機(jī)抽取，取樣量不少于15%。 抽樣時間：產(chǎn)品分裝后2 小時至保質(zhì)期截止前24 小時。

3 檢測方法的比對

3.1 劑量的檢測

舊標(biāo)準(zhǔn)量筒法： 取兩個劑量全部倒入量筒內(nèi)，讀取其精液量，兩個劑量平均數(shù)為樣品劑量值。 為了降低誤差，以及避免對活力的影響，需要將量筒洗凈晾干，緩緩倒入精液，將精液瓶置于量筒上方30 秒以上，盡量使精液全部移入量筒內(nèi)，讀出劑量值。 實(shí)際工作中需要準(zhǔn)備大量量筒否則檢測時間過長影響后面的檢測內(nèi)容，量筒內(nèi)精液也倒不干凈， 檢測誤差大、 操作不方便。

新標(biāo)準(zhǔn)稱量法：電子臺秤，清零后稱量待檢產(chǎn)品，記錄數(shù)值，再使用與受檢產(chǎn)品同一批次未使用的空包裝稱量記錄數(shù)值， 兩個數(shù)值之差為劑量值。 根據(jù)精液密度約等于水的密度，用臺秤稱量精液質(zhì)量， 將精液質(zhì)量數(shù)值直接等同于體積數(shù)值。 測量結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后1 位。

新舊檢測方法對比， 稱量法與量筒法的比較優(yōu)勢：簡單、快捷，更好地體現(xiàn)科學(xué)性、先進(jìn)性， 更符合生產(chǎn)實(shí)際。 種豬常溫精液密度約為1.0038 克/毫升與水的密度1.000 克/毫升(4℃)接近，1 份80 毫升的種豬常溫精液誤差約為0.304 克，使用量筒法時其殘留在原容器的精液量約為0.5930 毫升，約0.5952 克。 可見量筒法誤差大。量筒法在操作過程中對精子損傷較大，可能對后續(xù)活力和畸形檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。

3.2 精子活力和前向運(yùn)動精子數(shù)的檢測

精子活力檢測方法比對，舊標(biāo)準(zhǔn)使用人工目測判斷；新標(biāo)準(zhǔn)使用儀器法檢測。 舊標(biāo)準(zhǔn)：活力：取兩個劑量精液搖勻，各取1 毫升水浴鍋加熱，分別滴1 滴于載玻片上，加蓋玻片，37℃條件下，估算精子活力，每個樣片觀察3 個視野，計(jì)算平均值。

前向運(yùn)動精子數(shù)檢測方法比對，舊標(biāo)準(zhǔn)使用血球計(jì)數(shù)板法；新標(biāo)準(zhǔn)使用儀器法檢測。舊標(biāo)準(zhǔn)：用移液器取950 微升3%的氯化鈉， 再取50 微升的精液與之混勻，取一滴稀釋后的精液于血蓋片邊緣，使精液自行慢慢流入計(jì)數(shù)室，均勻充滿后立刻停止，放置5 分鐘，然后在顯微鏡下數(shù)上下兩個計(jì)數(shù)室，每個計(jì)數(shù)室選左上右上左下右下中間5 個中方格計(jì)數(shù)， 取兩個計(jì)數(shù)室平均數(shù)，如果計(jì)數(shù)結(jié)果誤差超過5%，則應(yīng)重檢。 通過公式計(jì)算出每劑量前向運(yùn)動精子數(shù)。

新標(biāo)準(zhǔn)： 開啟精子質(zhì)量分析儀預(yù)熱至少5分鐘，恒溫臺設(shè)置溫度為37℃；物鏡轉(zhuǎn)換到相差顯微鏡頭，調(diào)節(jié)至視野光線最佳；專用定容玻片預(yù)熱大于1 分鐘；樣品在18℃～25℃室溫下輕搖2～3 分鐘；保持精液瓶與視線水平，使其傾斜約45°， 將移液器吸頭伸入液面下15～20 毫米處，避開凝結(jié)絮狀物，吸取3～5 微升，滴于定容玻片進(jìn)樣口處，讓其自行流入腔室，同樣方法做一平行樣；點(diǎn)樣后預(yù)熱1～3 分鐘，在200 倍條件下，在3 分鐘內(nèi)完成兩個樣點(diǎn)的檢測。 每個樣點(diǎn)至少讀取3 個視野的數(shù)據(jù)， 記錄每個樣點(diǎn)的平均值。相對偏差大于5% ，則應(yīng)重檢。算出活力平均值，保留小數(shù)點(diǎn)后1 位。 同樣方法在儀器軟件界面讀取并記錄精子密度值，通過公式計(jì)算出前向運(yùn)動精子數(shù)，保留小數(shù)點(diǎn)后1 位。

新標(biāo)準(zhǔn)中精子質(zhì)量分析儀的優(yōu)勢： 步驟簡單、操作快速、讀數(shù)準(zhǔn)確、重復(fù)性好，提高檢測效率。 舊標(biāo)準(zhǔn)中，聘用職工流動性大，而且每個人判定標(biāo)準(zhǔn)各異，人為誤差較大，嚴(yán)重影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。 而使用質(zhì)量分析儀， 讀數(shù)一視同仁，降低了人工誤差，避免了糾紛。 質(zhì)量分析儀需要定期采用血球計(jì)數(shù)法進(jìn)行校準(zhǔn)，一般1 年1 次。

3.3 精子畸形率檢測

精子畸形率新舊比對，舊標(biāo)準(zhǔn)使用姬姆薩染色法染色時間需要1.5 小時；新標(biāo)準(zhǔn)使用姬姆薩染色法需要15～30 分鐘或者使用伊紅苯胺黑快速染色法，時間更短，檢測更快。 舊標(biāo)準(zhǔn)使用了福爾馬林固定液，新標(biāo)準(zhǔn)刪除了中性福爾馬林的固定步驟。

新標(biāo)準(zhǔn)染色法優(yōu)勢：染色時間縮短，染色效果不變；中性福爾馬林為有毒有害試劑，屬于管制試劑， 刪去固定步驟不影響精子畸形率的檢測，環(huán)保安全；伊紅苯胺黑快速染色法能快速檢測精子畸形率，有效縮短檢測時間，提高檢測效率，對生產(chǎn)企業(yè)具有絕對優(yōu)勢。

4 檢驗(yàn)分類的比對

4.1 出廠檢驗(yàn)

舊標(biāo)準(zhǔn)為常規(guī)檢驗(yàn)，只檢驗(yàn)外觀和活力。

新標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目：產(chǎn)品劑量、精子活力和前向運(yùn)動精子數(shù)。 主要是在封裝入庫前和銷出時檢驗(yàn)。 判定規(guī)則：所檢項(xiàng)目有一項(xiàng)不符合本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定時，則判定該抽檢樣品不合格。

4.2 型式檢驗(yàn)

舊標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目：全部檢驗(yàn)項(xiàng)目，每兩周抽檢1 次。

新標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目：全部檢驗(yàn)項(xiàng)目。 正常生產(chǎn)時，至少每半年進(jìn)行1 次型式檢驗(yàn)。 有特殊情況隨時進(jìn)行型式檢驗(yàn)。 判定規(guī)則：任何項(xiàng)目不符合本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定時，則判定該抽檢樣品不合格。 若該抽檢樣品在其保質(zhì)期內(nèi)可進(jìn)行復(fù)檢。 批次判定規(guī)則：每個批次中所有抽檢樣品合格，則判定該批次合格；其中有任一抽檢樣品不合格，則判定該批次不合格。

5 新標(biāo)準(zhǔn)增加了標(biāo)簽和隨行文件的內(nèi)容

5.1 標(biāo)簽標(biāo)識信息

種豬常溫精液、品種名稱、種公豬個體編號、生產(chǎn)企業(yè)名稱及聯(lián)系方式、生產(chǎn)時間、適用受體、授精方式、保存條件、保質(zhì)期，以及規(guī)定的產(chǎn)品質(zhì)量參數(shù)最低保證值。

非生產(chǎn)企業(yè)經(jīng)營常溫精液產(chǎn)品時，其標(biāo)簽信息還應(yīng)包括經(jīng)營企業(yè)的名稱和聯(lián)系方式等。若是混合精液則應(yīng)注明。

使用電子標(biāo)簽（如二維碼標(biāo)簽）的標(biāo)簽信息至少應(yīng)包括本條款規(guī)定的信息，還可包括生產(chǎn)企業(yè)商標(biāo)或徽標(biāo)，以及可追溯的其他信息。

5.2 隨行文件

隨行文件至少應(yīng)包括種畜禽生產(chǎn)經(jīng)營許可證和動物防疫合格證復(fù)印件，以及種公豬系譜檔案復(fù)印件。

6 包裝、貯存、運(yùn)輸和保質(zhì)期

新標(biāo)準(zhǔn)更為詳細(xì)、具體，可操作性更強(qiáng)。

包裝：包裝的容量應(yīng)大于規(guī)定的對應(yīng)產(chǎn)品的最低劑量的110%。 如40 毫升包裝容量應(yīng)不低于44 毫升。

貯存：恒溫箱避光保存，16℃～18℃，保質(zhì)期內(nèi)每間隔8～12 小時搖勻1 次。

運(yùn)輸：16℃～18℃避光密封容器中運(yùn)輸，避免強(qiáng)烈振動和碰撞。

保質(zhì)期：應(yīng)不少于72 小時。

7 新標(biāo)準(zhǔn)增加了不合格產(chǎn)品的處置

不應(yīng)出售和使用檢驗(yàn)不合格的產(chǎn)品。不合格產(chǎn)品應(yīng)按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行無害化處理。新標(biāo)準(zhǔn)對不合格產(chǎn)品的處置提供了參考依據(jù)。

8 新標(biāo)準(zhǔn)新增定義內(nèi)容

種豬：體型外貌和性能質(zhì)量符合本品種標(biāo)準(zhǔn)要求且具有種用價值的公豬。 對公豬質(zhì)量可靠性的要求。

精子密度：每毫升精液中所含的精子個數(shù)。

批次：同一生產(chǎn)線、同一時間，使用同一份或混合精液稀釋分裝生產(chǎn)的一批常溫精液產(chǎn)品。

保質(zhì)期：自產(chǎn)品生產(chǎn)之時起，在滿足種豬常溫精液產(chǎn)品規(guī)定的保存和運(yùn)輸條件下，其產(chǎn)品符合質(zhì)量要求的最長期限。

混合精液：同一品種兩頭及以上種豬的常溫精液混合產(chǎn)品。