正己烷-乙醇-水三元雙相溶劑浸提法富集南極磷蝦磷脂

郭向融，劉小芳，姜維，辛云，蘇東，劉宇，冷凱良

（1.浙江海洋大學(xué)國(guó)家海洋設(shè)施養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，浙江舟山 316022；2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)農(nóng)村部極地漁業(yè)可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266071）

南極磷蝦作為可持續(xù)的遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源，近年來(lái)受到越來(lái)越多的關(guān)注[1]。在南極海洋生物資源養(yǎng)護(hù)委員會(huì)的監(jiān)督管理下，南極磷蝦資源正被有序地開(kāi)發(fā)利用[2-3]。我國(guó)南極磷蝦漁業(yè)自2010 年入漁以來(lái)，經(jīng)過(guò)十余年發(fā)展已取得長(zhǎng)足進(jìn)步[2-3]。南極磷蝦漁業(yè)是海陸聯(lián)動(dòng)型海洋生物資源利用產(chǎn)業(yè)，新鮮捕獲的南極磷蝦先在船上加工為南極磷蝦粉、南極磷蝦凍蝦等原料級(jí)產(chǎn)品，而后經(jīng)遠(yuǎn)洋冷鏈運(yùn)輸至陸地再進(jìn)行后續(xù)精深加工利用[1-3]。受捕撈加工船處理能力的限制，捕獲的南極磷蝦少部分可被加工為南極磷蝦粉，大部分仍是以南極磷蝦凍蝦的形式運(yùn)回陸地。目前，陸基加工利用南極磷蝦粉生產(chǎn)南極磷蝦油、南極磷蝦蛋白肽等高值產(chǎn)品已發(fā)展得較為成熟[1，4]，但南極磷蝦凍蝦仍一直作為飼料或者普通食品的原料被低值化應(yīng)用[5]，一定程度上造成了資源浪費(fèi)。合理利用南極磷蝦凍蝦資源進(jìn)行高值產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，對(duì)于支撐南極磷蝦產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展具有重要意義。

磷脂是分子結(jié)構(gòu)中含有磷酸基團(tuán)的極性脂質(zhì)成分，其是構(gòu)成細(xì)胞膜的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)物質(zhì)，并在維持生物體正常代謝和功能穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用[6]。南極磷蝦的磷脂含量高[7]，且南極磷蝦所富含的二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid，EPA）、二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA）等多不飽和脂肪酸主要以磷脂型式存在[8-9]?，F(xiàn)有研究指出，磷脂是南極磷蝦最重要的活性脂質(zhì)成分，與甘油酯、游離脂肪酸等其他脂質(zhì)成分相比，磷脂在防治心腦血管疾病[10]、調(diào)節(jié)糖/脂代謝[11-12]、維持腸道功能穩(wěn)態(tài)[12]等方面能夠發(fā)揮更優(yōu)的活性作用。南極磷蝦磷脂的提取生產(chǎn)已引起產(chǎn)業(yè)關(guān)注，將成為南極磷蝦脂質(zhì)類高值產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的新方向。

磷脂的富集方法主要包括溶劑萃取法、層析分離法及超臨界萃取法等，其中，溶劑萃取法是最常采用的手段，層析分離法和超臨界萃取法則受到加工處理量小、生產(chǎn)投入大、設(shè)備要求高等因素限制而尚未在工業(yè)化生產(chǎn)中大規(guī)模應(yīng)用[13]。利用不同脂質(zhì)成分間的極性差異，采用由極性溶劑和非極性溶劑構(gòu)成的雙相溶劑體系進(jìn)行萃取可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)脂質(zhì)化合物的富集[14]。以正己烷-乙醇為主體構(gòu)成的烴-醇型混合溶劑是油脂工業(yè)中較為成熟的混合溶劑之一，具有提取效果好且產(chǎn)物安全性高等優(yōu)勢(shì)[14-15]。然而，南極磷蝦含水量接近80%[5，16]，在直接浸提南極磷蝦總脂質(zhì)的過(guò)程中水分也會(huì)同步被提取出來(lái)，水分的存在會(huì)對(duì)正己烷-乙醇混合溶劑體系的相平衡產(chǎn)生影響[14]，并最終影響磷脂的富集效果，目前鮮有研究對(duì)此進(jìn)行深入探討[15]。因此，本研究以解凍后的南極磷蝦為原料，針對(duì)乙醇浸提南極磷蝦總脂質(zhì)以及正己烷-乙醇-水三元雙相溶劑萃取富集南極磷蝦磷脂的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)制備獲得的南極磷蝦磷脂的組成進(jìn)行分析，以期為南極磷蝦凍蝦資源的合理利用提供參考，為新型南極磷蝦脂質(zhì)類高值產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

南極磷蝦凍蝦：遼寧遠(yuǎn)洋漁業(yè)有限公司；磷脂酰膽堿（phosphatidylcholine，PC）標(biāo)準(zhǔn)品、磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine，PE）標(biāo)準(zhǔn)品、溶血型磷脂酰膽堿（lysophosphatidylcholine，LPC）標(biāo)準(zhǔn)品、37 種脂肪酸甲酯混標(biāo)（純度均≥98%）：德國(guó)默克生命科學(xué)有限公司；三氯甲烷、濃硫酸、濃硝酸、高氯酸：青島潤(rùn)嵩化學(xué)科技有限公司；甲醇、乙醇、異丙醇、正己烷、甲酸銨：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。除特殊標(biāo)記外，所用化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

BAS224S-CW 型電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；HH-4 型恒溫水浴鍋：常州智博瑞儀器制造有限公司；LXJ-IIB 型離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；RE52AA 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；UV1-102Ⅱ型紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海天美科學(xué)儀器有限公司；LC-16 型液相色譜儀（配置蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）：日本島津公司；HP-6890 型氣相色譜儀（配置火焰離子化檢測(cè)器）：美國(guó)安捷倫科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 南極磷蝦總脂質(zhì)提取條件優(yōu)化

南極磷蝦凍蝦進(jìn)行靜水解凍，以南極磷蝦塊掰開(kāi)斷裂處蝦體完整作為解凍完全的標(biāo)志[17]。適量解凍后的南極磷蝦采用乙醇在相應(yīng)試驗(yàn)條件下進(jìn)行總脂質(zhì)的浸提，浸提完成后進(jìn)行離心（室溫25 ℃，5 000 r/min，20 min）處理，收集上清液經(jīng)旋蒸脫溶得總脂質(zhì)，稱量總脂質(zhì)的質(zhì)量并記錄。固定料液比1∶3（g/mL）、浸提溫度40 ℃、浸提時(shí)間3 h、浸提3 次，探究料液比[1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5（g/mL）]、浸提時(shí)間（1、2、3、4、5 h）、浸提溫度（20、30、40、50、60 ℃）、浸提次數(shù)（1、2、3、4、5 次）對(duì)總脂質(zhì)提取效果的影響。以總脂質(zhì)得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定各因素的最佳條件?？傊|(zhì)得率（w，%）計(jì)算公式如下。

式中：m為南極磷蝦總脂質(zhì)質(zhì)量，g；M為南極磷蝦質(zhì)量，g。

1.3.2 正己烷-乙醇-水三元雙相溶劑萃取南極磷蝦磷脂的條件優(yōu)化

參考文獻(xiàn)[14，18]選擇覆蓋正己烷-乙醇-水混合溶劑雙相區(qū)域的不同相點(diǎn)進(jìn)行南極磷蝦磷脂萃取條件的優(yōu)化，正己烷-乙醇-水三元體系的相平衡圖及各相點(diǎn)對(duì)應(yīng)的正己烷-乙醇-水的體積比分別見(jiàn)圖1 和表1。

表1 不同相點(diǎn)對(duì)應(yīng)的正己烷-乙醇-水的體積比Table 1 Volume ratio of hexane-ethanol-water at the selected phase point

圖1 正己烷-乙醇-水三元體系的相平衡圖Fig.1 Phase equilibrium diagram of hexane-ethanol-water system

取適量南極磷蝦總脂質(zhì)，按照相應(yīng)試驗(yàn)條件進(jìn)行萃取處理，先加入乙醇，渦旋混勻使脂質(zhì)充分溶解，然后加入超純水，再次渦旋混勻后加入正己烷，充分混勻后于室溫25 ℃靜置，待分層完全后分別收集上相溶液和下相溶液，經(jīng)旋蒸脫溶得上相脂質(zhì)提取物和下相脂質(zhì)提取物，用于各指標(biāo)的測(cè)定。不同處理組中南極磷脂總脂質(zhì)與正己烷-乙醇-水混合溶劑的料液比均為1∶100（g/mL）。以脂質(zhì)得率、磷脂含量、磷脂得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定正己烷-乙醇-水混合溶劑從南極磷蝦總脂質(zhì)中萃取富集磷脂的最佳條件。各評(píng)價(jià)指標(biāo)按照以下公式計(jì)算。

式中：w1為上相脂質(zhì)得率，%；m1為上相脂質(zhì)質(zhì)量，g；m為南極磷蝦總脂質(zhì)質(zhì)量，g；w2為下相脂質(zhì)得率，%；m2為下相脂質(zhì)質(zhì)量，g；w3為磷脂得率，%；c為下相脂質(zhì)中磷脂含量，%；c0為南極磷蝦總脂質(zhì)中磷脂含量，g。

1.3.3 南極磷蝦磷脂的富集及組成分析

500 g 解凍后的南極磷蝦，水分含量經(jīng)測(cè)定為（78.52±1.63）g/100 g，利用乙醇按照1.3.1 中優(yōu)化確定的條件進(jìn)行浸提，浸提完成后進(jìn)行離心（室溫25 ℃，5 000 r/min 離心20 min）處理，收集上清液即為總脂質(zhì)提取液，按照1.3.2 中優(yōu)化確定的正己烷-乙醇-水的體積比依次補(bǔ)齊超純水和正己烷，充分混勻后于室溫靜置，待分層完全后收集下相溶液，經(jīng)旋蒸脫溶得南極磷蝦磷脂，然后進(jìn)一步測(cè)定磷脂含量、磷脂組成和脂肪酸組成。

1.3.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)測(cè)定方法

1.3.4.1 磷脂含量測(cè)定

磷脂含量按照GB/T 5537—2008《糧油檢驗(yàn)磷脂含量的測(cè)定》中的鉬藍(lán)比色法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4.2 磷脂組成分析

參照文獻(xiàn)[19-20]的方法進(jìn)行磷脂組成分析：適量磷脂樣品采用三氯甲烷-甲醇溶液（2∶1，體積比）溶解，采用液相色譜法分析磷脂組成，利用外標(biāo)法對(duì)不同磷脂組分進(jìn)行定量，而后計(jì)算各磷脂組分在總磷脂中所占比例。液相色譜條件：色譜柱ZORBAX Rx-SIL（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫35 ℃；流動(dòng)相A：異丙醇、水、5 mmol/L 甲酸銨體積比85∶14∶1，流動(dòng)相B：正己烷、異丙醇、5 mmol/L 甲酸銨體積比82∶17∶1；洗脫程序：0 min（A、B 體積比0∶100），5 min（A、B 體積比20∶80），7 min（A、B 體積比40∶60），17 min（A、B 體積比70∶30），23 min（A、B 體積比100∶0），25 min（A、B 體積比100∶0），26 min（A、B 體積比0∶100），30 min（A、B體積比0∶100）；洗脫流速1 mL/min；漂移管溫度60 ℃；霧化器壓力172 kPa；進(jìn)樣量10 μL。定量分析：在20～500 mg/L 濃度范圍內(nèi)，PC 定量方程為Y=1.118 8X+3.430 9，R2=0.998 7；PE 定量方程為Y=1.339 3X+2.786 2，R2=0.997 6；LPC 定量方程為Y=1.119 8X+3.213 5，R2=0.999 0；其中，X為各磷脂組分標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度（mg/L），Y為相應(yīng)峰面積的對(duì)數(shù)值。

1.3.4.3 脂肪酸組成分析

參照文獻(xiàn)[19-20]的方法進(jìn)行脂肪酸組成分析：適量磷脂樣品經(jīng)甲酯化處理后，采用氣相色譜法分析脂肪酸組成，利用峰面積歸一化法對(duì)各脂肪酸進(jìn)行定量。氣相色譜條件：INNOWAX 毛細(xì)管柱（0.32 mm×30 m，0.25 μm）；進(jìn)樣量1 μL；分流比15∶1；升溫程序：自170 ℃按照3 ℃/min 速率升溫至210 ℃，保持30 min；高純氮?dú)鉃檩d氣，流速40 mL/min；檢測(cè)器溫度250 ℃，氫氣流速40 mL/min，空氣流速450 mL/min。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式表示，采用Excel 2016、IBM SPSS 27.0、Origin 2022 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和圖形繪制。采用單因素方差分析進(jìn)行組間多重比較，以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 南極磷蝦總脂質(zhì)提取條件的確定

料液比、浸提時(shí)間、浸提溫度、浸提次數(shù)對(duì)南極磷蝦總脂質(zhì)提取效果的影響見(jiàn)圖2。

圖2 不同提取條件對(duì)南極磷蝦總脂質(zhì)提取效果的影響Fig.2 Effects of different extraction conditions on the extraction efficiency of total lipids from Antarctic krill

由圖2A 可知，隨著溶劑體積的增加，總脂質(zhì)得率逐漸提高，當(dāng)料液比達(dá)到1∶3（g/mL）后，總脂質(zhì)得率趨于穩(wěn)定；依據(jù)傳質(zhì)平衡原理，在一定范圍內(nèi)，隨著溶劑體積的增加，浸出的脂質(zhì)逐漸增多，當(dāng)脂質(zhì)基本被提取出后，繼續(xù)增加溶劑并不會(huì)改善提取效果，但卻會(huì)增加成本和后續(xù)脫溶的能耗[21]。因此，選定料液比1∶3（g/mL）為最佳條件。由圖2B 可知，隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng)，總脂質(zhì)得率逐漸升高，浸提3 h 時(shí)總脂質(zhì)得率較高；隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng)，南極磷蝦原料與浸提溶劑中的脂質(zhì)濃度差不斷縮小，直至擴(kuò)散基本達(dá)到平衡[22]，之后浸提時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)，總脂質(zhì)得率基本穩(wěn)定。因此，選定浸提時(shí)間3 h 為最佳條件。由圖2C 可知，總脂質(zhì)得率隨著浸提溫度的升高而顯著升高（P＜0.05），當(dāng)浸提溫度高于40 ℃后，繼續(xù)升高浸提溫度，總脂質(zhì)得率無(wú)顯著變化（P＞0.05）。適當(dāng)提高浸提溫度能夠加快分子運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)脂質(zhì)的溶出，但浸提溫度過(guò)高會(huì)引起料液間氣化層的形成，阻礙分子擴(kuò)散，無(wú)法繼續(xù)帶來(lái)浸提效果的明顯改變[21，23]。因此，選定浸提溫度40 ℃為最佳條件。由圖2D 可知，總脂質(zhì)得率隨著浸提次數(shù)的增加而增加，浸提超過(guò)3 次后總脂質(zhì)得率基本不變。隨著浸提次數(shù)的增加，原料中的脂質(zhì)不斷被提取，待充分抽提后，增加浸提次數(shù)不會(huì)帶來(lái)浸提效果的改善。因此，選定浸提3 次為最佳條件。

綜上，確定南極磷蝦總脂質(zhì)提取條件為料液比1∶3（g/mL）、浸提時(shí)間3 h、浸提溫度40 ℃、浸提次數(shù)3 次，在此條件下重復(fù)進(jìn)行6 次提取試驗(yàn)，總脂質(zhì)得率為（4.69±0.13）%，這與前期研究中測(cè)得的南極磷蝦總脂質(zhì)含量保持一致[19，24]，表明在上述條件下，南極磷蝦總脂質(zhì)已被提取完全。

2.2 正己烷-乙醇-水三元雙相溶劑萃取南極磷蝦磷脂條件確定

正己烷-乙醇-水三元體系不同相點(diǎn)條件對(duì)南極磷蝦磷脂萃取效果的影響見(jiàn)圖3。

圖3 A～M 相點(diǎn)條件對(duì)南極磷蝦磷脂萃取效果的影響Fig.3 Effects of A-M phase point conditions on the extraction efficiency of Antarctic krill phospholipids

南極磷蝦總脂質(zhì)中的磷脂屬極性脂質(zhì)，其因頭部基團(tuán)中含有磷酸和堿基而具有很強(qiáng)的親水性，在萃取過(guò)程中優(yōu)先富集于極性較高的下相乙醇-水層；而南極磷蝦總脂質(zhì)中的甘油酯、游離脂肪酸等中性脂質(zhì)則更易分配至極性較低的上相正己烷層[25]。由圖3（A）可知，與處于均相區(qū)的相點(diǎn)A 相比，采用非均相區(qū)的相點(diǎn)B～I(xiàn) 對(duì)應(yīng)條件處理，南極磷蝦總脂質(zhì)可得到不同程度的分離。相點(diǎn)F、H、I 因體系中水的比例過(guò)大引起了磷脂乳化[26-27]，而相點(diǎn)D、G 需在總脂質(zhì)提取液中引入較高比例的正己烷，因此選定相點(diǎn)B、C、E 所對(duì)應(yīng)的三角區(qū)域進(jìn)行進(jìn)一步的條件優(yōu)化。由圖3（A）可知，在相點(diǎn)B、C、E、J、K、L、M 對(duì)應(yīng)條件下，南極磷蝦總脂質(zhì)在正己烷-乙醇-水三元體系中能夠?qū)崿F(xiàn)雙相分配。由圖3（B）可知，在相點(diǎn)B 對(duì)應(yīng)條件下，下相脂質(zhì)得率最高，為（55.87±0.53）%，顯著高于其他相點(diǎn)（P＜0.05）；下相脂質(zhì)得率由高到低順序?yàn)锽＞J＞K＞C＞L＞M＞E。由圖3（C）可知，在相點(diǎn)J 對(duì)應(yīng)條件下，下相脂質(zhì)中的磷脂含量最高，為（83.95±0.65）%，顯著高于其他相點(diǎn)（P＜0.05）；下相脂質(zhì)中的磷脂含量由高到低順序?yàn)镴＞K＞B＞C＞L＞M＞E。由圖3（D）可知，在相點(diǎn)B 對(duì)應(yīng)條件下，下相磷脂得率最高，達(dá)到（94.31±0.48）%，顯著高于其他相點(diǎn)（P＜0.05）；其次為相點(diǎn)J 和相點(diǎn)K，下相磷脂得率分別為（89.87±0.59）%和（72.15±0.70）%；下相磷脂得率由高到低順序?yàn)锽＞J＞K＞C＞L＞M＞E。綜上，選定相點(diǎn)B、J所對(duì)應(yīng)的直線區(qū)域進(jìn)行進(jìn)一步的條件優(yōu)化。

B、N、O、P、J 相點(diǎn)條件對(duì)南極磷蝦磷脂萃取效果的影響見(jiàn)圖4。

圖4 B、N、O、P、J 相點(diǎn)條件對(duì)南極磷蝦磷脂萃取效果的影響Fig.4 Effects of B，N，O，P，J phase point conditions on the extraction efficiency of Antarctic krill phospholipids

在由相點(diǎn)B 至相點(diǎn)J 的直線區(qū)域內(nèi)，正己烷-乙醇-水三元體系中乙醇的比例保持不變、正己烷的比例逐漸減少、水的比例逐漸增大。由圖4（A）可知，在相點(diǎn)B、N、O、P、J 對(duì)應(yīng)條件下，南極磷蝦總脂質(zhì)在正己烷-乙醇-水三元體系中能夠?qū)崿F(xiàn)雙相分配。由圖4（B）可知，在相點(diǎn)B 至相點(diǎn)J 的直線區(qū)域內(nèi)，隨著萃取條件的變化，下相脂質(zhì)得率逐漸降低；在相點(diǎn)B、N 對(duì)應(yīng)條件下，下相脂質(zhì)得率顯著高于其他相點(diǎn)（P＜0.05）。由圖4（C）可知，在相點(diǎn)B 至相點(diǎn)J 的直線區(qū)域內(nèi)，隨著萃取條件的變化，下相脂質(zhì)中的磷脂含量先升高后趨于穩(wěn)定；在相點(diǎn)N 對(duì)應(yīng)條件下，下相磷脂含量最高，為（85.51±0.37）%。由圖4（D）可知，在相點(diǎn)B 至相點(diǎn)J的直線區(qū)域內(nèi)，隨著萃取條件的變化，下相磷脂得率先升高后下降；在相點(diǎn)N 對(duì)應(yīng)條件下，下相磷脂得率最高，達(dá)到（98.39±0.38）%，表明磷脂已基本全部被萃取富集于正己烷-乙醇-水三元雙相體系的下相。綜上，確定相點(diǎn)N 所對(duì)應(yīng)條件為最佳萃取條件，即正己烷-乙醇-水三者體積比為0.275∶0.600∶0.125。

2.3 南極磷蝦磷脂的組成分析

制備獲得的南極磷蝦磷脂12.85 g，經(jīng)測(cè)定磷脂含量為（85.46±0.31）%，這與前述萃取富集工藝研究的結(jié)果保持一致。采用本研究?jī)?yōu)化后的工藝條件進(jìn)行南極磷蝦磷脂的富集，與張千等[13]采用的水化法（磷脂含量70.78%）和魏山山[28]采用的氧化鋁柱層析分離法（磷脂含量79.83%）相比效果更優(yōu)，與魏山山[28]采用的硅膠柱層析分離法（磷脂含量97.77%）和陰法文[29]采用的超臨界萃取法（磷脂含量92.81%）相比效果略有不足。本研究所采用的正己烷-乙醇-水三元雙相溶劑浸提法能夠快速高效地實(shí)現(xiàn)南極磷蝦磷脂的富集，處理效果理想且未引入有害溶劑，具有較好的規(guī)?；瘧?yīng)用價(jià)值。

南極磷蝦磷脂的磷脂組成和脂肪酸組成分析結(jié)果見(jiàn)圖5 和表2。

表2 南極磷蝦磷脂的脂肪酸組成Table 2 Fatty acid composition of Antarctic krill phospholipids%

圖5 磷脂混合標(biāo)準(zhǔn)品和南極磷蝦磷脂的高效液相分離圖譜Fig.5 The HPLC-ELSD spectrum of phospholipids standard and Antarctic krill phospholipids

由圖5 可知，南極磷蝦磷脂主要為PC，含有少量的PE 和LPC；經(jīng)計(jì)算，PC 約占總磷脂含量的（91.29±1.28）%。由表2 可知，南極磷蝦磷脂中多不飽和脂肪酸含量豐富且主要為EPA 和DHA，分別占總脂肪酸含量的（35.65±0.52）%和（17.74±0.47）%，以上結(jié)果與已有研究報(bào)道保持一致[7，19]。此外，通過(guò)對(duì)比上相中性脂和下相磷脂的脂肪酸組成可知，南極磷蝦富含的EPA、DHA 等多不飽和脂肪酸更多地以磷脂型式存在?，F(xiàn)有文獻(xiàn)指出，與大豆磷脂和卵黃磷脂等陸地食品原料來(lái)源的磷脂相比，海洋EPA/DHA 磷脂在防治心腦血管疾病、調(diào)節(jié)代謝穩(wěn)態(tài)、改善神經(jīng)系統(tǒng)功能等方面的活性更優(yōu)[20，30]。南極磷蝦磷脂作為典型的海洋EPA/DHA 磷脂，其后續(xù)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用值得重點(diǎn)關(guān)注。

3 結(jié)論

本研究以解凍后的南極磷蝦為原料，對(duì)乙醇浸提南極磷蝦總脂質(zhì)以及正己烷-乙醇-水三元雙相溶劑萃取富集南極磷蝦磷脂的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)制備獲得的南極磷蝦磷脂的組成進(jìn)行分析。工藝研究結(jié)果表明，乙醇提取南極磷蝦總脂質(zhì)最優(yōu)條件為料液比1∶3（g/mL）、浸提溫度40 ℃、浸提時(shí)間3 h、浸提次數(shù)3 次，在此條件下，南極磷蝦總脂質(zhì)得率為（4.69±0.13）%；正己烷-乙醇-水三元雙相溶劑從南極磷蝦總脂質(zhì)中萃取富集磷脂的最佳體積比為0.275∶0.600∶0.125，制備獲得的南極磷蝦磷脂中磷脂含量為（85.46±0.31）%。組成分析結(jié)果表明，南極磷蝦磷脂主要為PC，含有少量的PE 與LPC；南極磷蝦磷脂是典型的海洋EPA/DHA 磷脂，磷脂中EPA 和DHA 的含量分別占總脂肪酸含量的（35.65±0.52）%和（17.74±0.47）%。正己烷-乙醇-水三元雙相溶劑浸提法能夠快速高效地實(shí)現(xiàn)南極磷蝦磷脂的富集，具有較好的應(yīng)用前景。研究結(jié)果對(duì)于推進(jìn)南極磷蝦凍蝦資源合理利用以及新型南極磷蝦脂質(zhì)類高值產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)具有積極意義。