郭 敏

青島中科基因生物技術(shù)有限公司,山東 青島 266114

0 引言

豬附紅細(xì)胞體病是由附紅細(xì)胞體寄生于豬的紅細(xì)胞表面或者游離于血漿、組織液和腦脊髓液中的一種寄生蟲疾病[1]。豬附紅細(xì)胞體病除了可以感染豬之外,還可以感染人、牛、羊等,是一種人畜共患的血液原蟲病[2]。該病一年四季均可發(fā)生,主要呈隱性感染,經(jīng)常和豬其他類型的疾病混合感染,為豬病的診斷和防治帶來了極大的困難?；诖?本文對豬附紅細(xì)胞體的診斷與防治進(jìn)行了簡要綜述。

1 病原

豬附紅細(xì)胞體的病原為立克次氏體目無漿體科的原核生物,病原大小為0.1～2.6 μm,其形態(tài)多變,呈圓形、卵圓形、環(huán)形、桿狀、逗點(diǎn)狀等。該病原無明顯的細(xì)胞核與細(xì)胞器,無細(xì)胞壁與鞭毛,只有單層界膜,多寄生于紅細(xì)胞邊緣,紅細(xì)胞病變?yōu)橥淮虪?。附紅細(xì)胞體耐低溫,對干燥和消毒劑敏感,例如4 ℃抗凝血中可存活15 d,冰凍血液中可存活30 d,-30 ℃脫纖維血中可存活83 d,-79 ℃含甘油的血液中可存活80 d,凍干環(huán)境中可存活2年[3],干燥2 min即可失活,用0.5%石炭酸溶液、75%乙醇、0.1%碘溶液、0.1%苯扎溴銨或0.3%～0.5%過氧乙酸溶液可殺滅。

2 流行特點(diǎn)

豬附紅細(xì)胞體病具有傳染性強(qiáng)、發(fā)病率高、流行范圍廣泛等諸多特點(diǎn),而且該病對各種年齡、性別、品種的豬均易感,患病豬及隱性感染豬是該病最主要的傳染源。該病的潛伏期為2～45 d,一年四季均可發(fā)生。臨床調(diào)查表明,豬附紅細(xì)胞體病的傳播途徑非常多樣化,攝入含有病原的血液,或接觸被血液污染的注射器、醫(yī)療器具等物質(zhì),都可能導(dǎo)致感染。具體來說,當(dāng)豬只舔食斷尾后的創(chuàng)傷、因互相爭斗而受傷,或飲用了被血液污染的水和尿液時(shí),都有可能直接感染上這種疾病。除此之外,一些以吸血為生的昆蟲,例如豬虱、蚊蟲、疥螨等,也有可能成為該疾病的傳播者。豬附紅細(xì)胞體病還能通過豬的繁殖行為進(jìn)行傳播。

3 診斷方法

3.1 臨床癥狀

豬附紅細(xì)胞體病因畜種和個(gè)體體況不同,臨床癥狀不同。臨床上主要表現(xiàn)為發(fā)熱、黃疸、貧血等癥狀。仔豬會出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、貧血、腹瀉、體溫升高、四肢抽搐、皮膚潮紅、眼結(jié)膜蒼白或黃染、急性死亡等癥狀。保育和育肥豬會出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、便秘、呼吸困難、體溫升高、多處皮膚紅紫且指壓不褪色。母豬會出現(xiàn)高熱、厭食、營養(yǎng)不良、尿液顏色加深,眼周、耳背、脊背、外陰四周毛孔滲血,嚴(yán)重的可視黏膜黃染,不發(fā)情,流產(chǎn)、死胎、弱胎、胎兒貧血等繁殖障礙,胎兒于不同的發(fā)展階段死亡。

3.2 病理變化

豬附紅細(xì)胞體病主要病理變化是貧血和黃疸,血液稀薄、臟器黃染。全身肌肉色澤變淡,脂肪及肺、胸腔、胃、腸、膀胱等內(nèi)臟器官漿膜有不同程度的黃染。脾臟、肝臟、淋巴結(jié)腫大[4],腎臟腫大、質(zhì)地變脆、外觀黃染[5]。皮下組織水腫,多數(shù)有胸水和腹水。膀胱蓄積濃茶樣尿液,黏膜黃染。心包積液,心肌蒼白柔軟。

3.3 試驗(yàn)室診斷方法

1)鏡檢法。①血液直接涂片鏡檢。自病豬及健康豬耳靜脈或前腔靜脈無菌采抗凝血,置光學(xué)顯微鏡下觀察。感染豬附紅細(xì)胞體的豬可見紅細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)變化,呈鋸齒狀、菜花狀或星芒狀等。健康豬紅細(xì)胞邊緣整齊、呈圓形,未見變形。②血液涂片染色鏡檢。從病豬及健康豬耳靜脈或前腔靜脈無菌采抗凝血,抹片自然干燥,1%的甲醇固定5 min,浸入盛有姬姆薩或者瑞氏染色液的染色缸中染色,取出水洗,水分干后置光學(xué)顯微鏡下觀察。感染豬附紅細(xì)胞體病的豬只紅細(xì)胞呈波浪狀、星芒狀、鋸齒狀改變且周圍有染成紫紅色或者淡藍(lán)色的小體。健康豬紅細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,邊緣光滑,染色均勻。③掃描電鏡鏡檢。在無菌環(huán)境中分別從患病豬和健康豬的耳部靜脈或前腔靜脈采集了血液樣本,這些樣本無需添加任何抗凝物質(zhì)。按照1：5比例(即1份血液樣本與5份3%的戊二醛溶液)將血液樣本加入戊二醛中進(jìn)行初步固定,并謹(jǐn)慎地混合以確保均勻。之后,樣本經(jīng)過離心處理,移除上清液,并加入了1%的鋨酸溶液進(jìn)行二次固定,同樣混合均勻。為了進(jìn)一步處理,使用0.1 mol/L二甲砷酸鈉進(jìn)行混合,并將樣本在4 ℃的條件下靜置12 h。最終制備涂片,并通過電子顯微鏡進(jìn)行詳細(xì)觀察。在電子顯微鏡下觀察到,受豬附紅細(xì)胞體感染的豬的紅細(xì)胞出現(xiàn)了顯著的形態(tài)變化。這些紅細(xì)胞表面呈現(xiàn)出皺褶和突起,形狀極不規(guī)則,類似于齒輪或海星的形狀。附著在這些紅細(xì)胞膜上的附紅體呈現(xiàn)出多種形狀,包括球形、卵圓形等,大小不一。這些附紅體有時(shí)單個(gè)存在,有時(shí)多個(gè)聚集在一起形成小團(tuán)狀,附著在紅細(xì)胞表面,甚至有時(shí)會在血漿中自由游動。相對之下,健康豬的紅細(xì)胞在電子顯微鏡下則呈現(xiàn)出完全不同的景象。它們的形狀規(guī)則類似于兩面凹陷的圓盤,且血漿中完全不存在附紅體樣的顆粒。

2)血清學(xué)檢測法?，F(xiàn)階段比較常見的血清學(xué)檢測試驗(yàn)方法有補(bǔ)體結(jié)合法、血凝法、熒光抗體法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法。血清學(xué)檢測有速度快、準(zhǔn)確率高、敏感性高和特異性好等特點(diǎn),不僅可以用來診斷該病,也可以用來進(jìn)行流行病學(xué)診斷及監(jiān)測[6]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在臨床上應(yīng)用較為普遍,其檢測樣本一般包括血漿、血清、尿液、腦脊液、胸腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

3)分子生物學(xué)診斷法。從病豬及健康豬耳靜脈或前腔靜脈無菌采血進(jìn)行核酸的提取,核酸提取之后通過普通PCR或者實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行疫病的診斷。普通PCR試驗(yàn)結(jié)果成立的條件是豬附紅細(xì)胞體核酸陽性對照的PCR產(chǎn)物在特定的位置有一個(gè)特異性條帶,同時(shí)陰性對照沒有條帶,如果樣品的試驗(yàn)結(jié)果同陽性對照一致,則豬附紅細(xì)胞體核酸陽性,否則為陰性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)結(jié)果成立的條件是豬附紅細(xì)胞體核酸陽性對照和陰性對照成立,如果樣品的試驗(yàn)結(jié)果在陽性CT值判定范圍內(nèi)則為陽性,否則為陰性。

4)動物試驗(yàn)法。從病豬耳靜脈或前腔靜脈無菌采血注射給健康的試驗(yàn)動物。觀察試驗(yàn)動物臨床癥狀、病理變化,采集試驗(yàn)動物的血樣,檢查是否含有附紅細(xì)胞體。如果試驗(yàn)動物有相應(yīng)的臨床癥狀及病理變化,且通過血樣檢查出有附紅細(xì)胞體,則為陽性,否則為陰性。

3.4 鑒別診斷

在臨床診斷疾病的時(shí)候,根據(jù)患病豬體的臨床癥狀和病理變化可以對疫病有一個(gè)初步的判斷,但是豬附紅細(xì)胞體病的癥狀在臨床和其他一些疫病有些類似,如豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、副豬嗜血桿菌病、豬弓形體病等,只有正確地把握各個(gè)疾病的特征,才可以精準(zhǔn)的對疾病進(jìn)行鑒別診斷。

1)豬瘟的鑒別。豬瘟無貧血和黃疸癥狀,豬瘟病毒導(dǎo)致機(jī)體高熱稽留,各臟器出血(喉頭、膀胱),腎臟貧血性出血(麻雀卵腎),淋巴結(jié)大理石狀出血,脾臟有梗死灶,回盲口鈕扣狀潰瘍。

2)豬繁殖與呼吸綜合征的鑒別。豬繁殖與呼吸綜合征無貧血和黃疸癥狀,呼吸道癥狀明顯比較明顯,肺部有明顯病變,胎兒常在懷孕后期死亡,胎衣點(diǎn)狀或斑狀出血,臍帶動脈壁出血。

3)副豬嗜血桿菌病的鑒別。副豬嗜血桿菌病無貧血和黃疸癥狀,有五炎兩白癥狀(關(guān)節(jié)炎、腹膜炎、胸膜炎、心包炎、腦膜炎、皮膚白、淋巴白)、熊貓眼、絨毛心、皮下水腫多發(fā)生于后肢。

4)豬弓形體病的鑒別。豬弓形體病無貧血和黃疸癥狀,病豬會出現(xiàn)流鼻涕、痙攣等癥狀,伴隨肺部異常,還有出血點(diǎn)與淡紅膨大等癥狀。在病死豬的解剖中,豬弓形體可從多個(gè)器官中發(fā)現(xiàn),而豬附紅細(xì)胞體病僅在血液中可以檢出蟲體。

4 預(yù)防與治療措施

4.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

豬附紅細(xì)胞體病是由多種因素引起的疾病,應(yīng)激可導(dǎo)致該病暴發(fā)[7]。過度擁擠、長途運(yùn)輸、天氣變化、飼養(yǎng)管理不當(dāng)、更換圈舍或飼料及其他疾病感染時(shí),常引起呈隱性感染的豬抵抗力下降,進(jìn)而引起豬群發(fā)生附紅體病[8]。豬舍要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,保證空氣通暢,保持豬舍、飼具干凈衛(wèi)生,定期對豬舍進(jìn)行清洗消毒,對豬群進(jìn)行疫病檢測,對豬舍服務(wù)人員進(jìn)行健康檢查并建立健康檔案,盡量減少一切外來人員及車輛的進(jìn)入,減少不良應(yīng)激,防止豬附紅細(xì)胞體病的傳入和發(fā)生。

4.2 加強(qiáng)對疫病的監(jiān)測

定期對豬舍內(nèi)的豬進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室的檢查,對該病進(jìn)行監(jiān)測預(yù)警。堅(jiān)持自繁自養(yǎng),必須引入豬時(shí)要從非疫區(qū)引入,并對引入的豬進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查,確定無豬附紅細(xì)胞體才可引入。引入后的豬進(jìn)行一段時(shí)間的隔離飼養(yǎng)后再進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)室的檢查,檢查結(jié)果為陰性才能混群飼養(yǎng)。

4.3 科學(xué)進(jìn)行免疫接種

要制定科學(xué)合理、切合實(shí)際的免疫程序,做好豬偽狂犬病、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、副豬嗜血桿菌、豬腹瀉類病等疫苗的免疫接種,確保豬處于高度的免疫狀態(tài),有效預(yù)防豬附紅細(xì)胞體病與其他常見疫病的混合感染或并發(fā)感染。

4.4 藥物治療

4.4.1 中藥治療

隨著對青蒿素研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)青蒿素在治療寄生蟲病、抗炎、調(diào)節(jié)免疫和抗腫瘤等方面有顯著的療效。程富盛 等[9]研究表明,青蒿素對豬附紅細(xì)胞體病有很好的治療效果,用青蒿素新制劑按照豬體質(zhì)量2 mg/kg,分點(diǎn)肌內(nèi)注射,1次/d,連用3 d,對病豬治療有效率達(dá)95%,治愈率達(dá)82%。

豬附紅細(xì)胞體病的致病機(jī)理是通過破壞血液中的紅細(xì)胞,從而導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降。黃芪等中草藥對紅細(xì)胞免疫功能具有增強(qiáng)作用,用黃芪粉末3～4 g/kg拌料,連續(xù)飼喂5 d左右,每月循環(huán)1次,可預(yù)防該病。因紅細(xì)胞中存在著許多與免疫功能相關(guān)的物質(zhì),為此可從提高紅細(xì)胞免疫功能方面采取中草藥輔助治療該病。

4.4.2 西藥治療

用西藥新砷凡納明按照豬體質(zhì)量10～15 mg/kg,進(jìn)行一次靜脈注射即可,注射后2～24 h,病原可從血液中消失,3 d內(nèi)可消除癥狀。使用過程中需要注意劑量,劑量過大有可能造成動物砷中毒。也可以使用血蟲凈(二脒那泰)。這種藥物能特異性地干擾原蟲動基體的DNA合成和復(fù)制過程,同時(shí)與細(xì)胞核發(fā)生不可逆的結(jié)合反應(yīng),從而有效地清除原蟲和動基體,阻斷其繁殖周期。在具體應(yīng)用時(shí),劑量為按照病豬的體質(zhì)量5～10 mg/kg進(jìn)行肌內(nèi)注射。治療時(shí),將血蟲凈用生理鹽水稀釋至5%的濃度,然后選擇合適的注射部位進(jìn)行肌內(nèi)注射。治療的頻率是1次/d,連續(xù)進(jìn)行3 d即可達(dá)到預(yù)期的治療效果。

土霉素和強(qiáng)力霉素都是廣譜抗菌藥。土霉素除殺細(xì)菌外,對衣原體、各種立克次氏體、螺旋體和某些原蟲有抑制作用,按體質(zhì)量10 mg/kg口服、肌內(nèi)注射或者靜脈注射,連用7～14 d,但長期使用會造成細(xì)菌耐藥性升高和毒副作用;強(qiáng)力霉素可在飼料中添加進(jìn)行治療,添加量150～300 mg/kg,連用3～5 d。

4.4.3 中西藥結(jié)合治療

有研究表明,中草藥與西藥合用有協(xié)同增效作用,對豬附紅細(xì)胞體病的治療具有更好的效果。中西聯(lián)合用藥通過西藥對豬附紅細(xì)胞病原體對因治療,然后按照中醫(yī)理論查找機(jī)體功能失調(diào)的病機(jī)對癥治療。王天坤[10]的研究也表明了單獨(dú)用西藥(貝尼爾按體質(zhì)量5～7 mg/kg進(jìn)行深部肌內(nèi)注射)或者單獨(dú)用中藥(生地20 g,配以金銀花30 g、青蒿15 g、野菊花30 g、魚腥草20 g以增強(qiáng)療效、常山30 g、芒硝20 g、大黃20 g,以上藥材水煎后服用?？筛鶕?jù)癥狀加減藥量,如出現(xiàn)腹瀉,應(yīng)減少大黃、芒硝的用量;若高熱不退,可加知母、生石膏以清熱;若呼吸困難,應(yīng)增加魚腥草的用量以緩解癥狀。但是單獨(dú)使用中草藥或西藥的效果都沒有兩者結(jié)合的殺滅力強(qiáng)。中西藥結(jié)合中,中藥的用藥具體還需要結(jié)合病豬的臨床癥狀分析進(jìn)行用藥。

5 結(jié)束語

豬附紅細(xì)胞體病是現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)過程中常見的一類疾病,該病多呈隱性感染且易與其他疾病混合感染,不易被發(fā)現(xiàn),但其流行范圍廣、傳染性強(qiáng),易造成豬群大面積感染,可嚴(yán)重影響?zhàn)B殖場的經(jīng)濟(jì)效益。養(yǎng)殖戶應(yīng)給予高度重視,樹立科學(xué)的養(yǎng)殖意識,早發(fā)現(xiàn)、早確診、早治療,并結(jié)合自身?xiàng)l件合理開展防控措施,確保在短時(shí)間內(nèi)控制病情,切斷傳播途徑,全面保障養(yǎng)殖場的健康,避免豬場遭受更大的經(jīng)濟(jì)損失。