[摘要]目的：研究濃縮生長因子（Concentrated growth factor，CGF）用于牙髓血管再生對內(nèi)皮細胞增殖的影響。方法：選取筆者醫(yī)院2019年3月-2021年3月擬行牙髓血管再生的年輕恒牙牙髓壞死患兒84例作為研究對象，按照隨機數(shù)表法分為CGF組和對照組，各42例。兩組均行牙髓血管再生治療，CGF組采用CGF覆蓋，對照組采用無機三氧化物聚合體（Mineral trioxide aggregate，MTA）覆蓋。手術(shù)6個月后觀察兩組臨床療效，觀察術(shù)前、術(shù)后6個月牙根尺寸變化情況[牙根長度、根尖孔直徑、影像學(xué)牙根區(qū)域（Radiographic root area，RRA）]，觀察兩組術(shù)后6個月牙髓活力恢復(fù)情況，測定兩組手術(shù)前后血管內(nèi)皮細胞表面標記物表達情況[血小板-內(nèi)皮細胞黏附分子（CD31）、血管內(nèi)皮生長因子受體2（Vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）、血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（Vascularendothelial cell cadherin，VE-Cadherin）]，統(tǒng)計兩組隨訪期間并發(fā)癥發(fā)生情況。結(jié)果：觀察組總有效率為100.00%，對照組為97.62%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。術(shù)后6個月，CGF組牙根長度、PRA顯著高于本組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月，根尖孔直徑顯著低于同組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月（P＜0.05）。CGF組患兒牙髓活力測試陽性率為40.48%（17/42），對照組為19.05%（8/40），比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。術(shù)后6個月，CGF組CD31、VEGFR2、VE-Cadherin表達水平高于本組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月（P＜0.05）。兩組并發(fā)癥發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：CGF用于牙髓血管再生可有效促進年輕恒牙繼續(xù)發(fā)育，恢復(fù)部分牙髓活力，改善患牙內(nèi)皮細胞增殖情況，值得臨床推廣。

[關(guān)鍵詞]濃縮生長因子；無機三氧化物聚合體；牙髓血管再生；內(nèi)皮細胞增殖；牙髓活力；血管內(nèi)皮細胞；并發(fā)癥

[中圖分類號]R781.3 [文獻標志碼]A [文章編號]1008-6455（2024）10-0018-04

Effect of CGF on Endothelial Cell Proliferation in Dental Pulp Vascular Regeneration

SHAN Yi， LIU Hongxiu， BAO Chunyan， LIU Haibo

（ Department of Stomatology， Qinhuangdao Maternal and Child Health Hospital， Qinhuangdao 066000， Hebei， China ）

Abstract： Objective To study the effect of concentrated growth factor （CGF） on endothelial cell proliferation in dental pulp vascular regeneration. Methods 84 children with pulp necrosis of young permanent teeth who planned to undergo pulp vascular regeneration in the author's hospital from March 2019 to March 2021 were selected as the research objects. They were randomly divided into CGF group and control group， with 42 cases in each group.Both groups were treated with pulp vascular regeneration. The CGF group was covered with CGF and the control group was covered with inorganic trioxide polymer （MTA）.The clinical effects of the two groups were observed 6 months after operation，The changes of root size [root length， apical hole diameter， imaging root area （RRA）] were observed before and 6 months after operation，The recovery of dental pulp vitality in the two groups was observed 6 months after operation，The expression of vascular endothelial cell surface markers [platelet endothelial cell adhesion molecule （CD31）， vascular endothelial growth factor receptor 2 （VEGFR2）， vascular endothelial cadherin] before and after operation were measured，the complications of the two groups during follow-up were counted. Results The total effective rate was 100.00% in the observation group and 97.62% in the control group， with no significant difference （P＞0.05）. 6 months after operation， the root length and pra of CGF group were significantly higher than those before operation and 6 months after operation in the control group， and the diameter of apical foramen was significantly lower than that before operation and 6 months after operation in the control group （P＜0.05）.The positive rate of dental pulp viability test in CGF group was 40.48% （17/42） and that in control group was 19.05% （8/40）. The difference was statistically significant （P＜0.05）.The expression levels of CD31， VEGFR2 and ve cadherin in CGF group were higher than those before operation and 6 months after operation in control group （P＜0.05）.There was no significant difference in the incidence of complications between the two groups （P＞0.05）. Conclusion CGF used in dental pulp vascular regeneration can effectively promote the continuous development of young permanent teeth， restore the vitality of some dental pulp， and improve the proliferation of endothelial cells of affected teeth， which is worthy of clinical promotion.

Key words： concentrated growth factor; mineral trioxide aggregate; dental pulp vascular regeneration; endothelial cell proliferation; pulp vitality; vascular endothelial cells; complication

年輕恒牙是牙根發(fā)育不完全且根尖孔未閉的恒牙，其發(fā)生牙髓感染、壞死與外傷、齲病等有關(guān)，可導(dǎo)致牙根停止發(fā)育。以往多采用根尖誘導(dǎo)成形術(shù)治療，但結(jié)局往往是愈后不穩(wěn)定、冠根比例不協(xié)調(diào)等[1-3]。隨著組織工程學(xué)的發(fā)展，牙髓血管再生技術(shù)逐漸應(yīng)用至臨床，并已經(jīng)開始圍繞牙髓血管再生手術(shù)的方法和材料進行研究[4]。無機三氧化物聚合體（MTA）是目前應(yīng)用較廣的牙髓血管再生治療材料，因其較好的封閉性、生物相容性和抑菌性而廣受認可，但MTA固化時間長、遇唾液易溶解，固化后牙冠易變色，且操作難度高，因此臨床一直在尋找更為適宜的替換材料[5]。自體血小板濃縮物中的生長因子可調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、趨化，并加快軟硬組織再生，在牙髓血管再生中的應(yīng)用價值備受關(guān)注[6]。本研究分別對比濃縮生長因子（CGF）和MTA在牙髓血管再生中的應(yīng)用效果和對患兒內(nèi)皮細胞增殖的影響，旨在為臨床年輕恒牙牙髓壞死治療方式的選擇提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料：選取筆者醫(yī)院2019年3月-2021年3月擬行牙髓血管再生的84例年輕恒牙牙髓壞死患兒作為研究對象，按照隨機數(shù)表法分為兩組，CGF組和對照組，各42例。其中CGF組男21例，女21例；年齡6～12歲，平均年齡（9.32±2.01）歲；對照組男23例，女19例；年齡6～12歲，平均年齡（9.42±2.11）歲。兩組基礎(chǔ)資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，本研究獲筆者醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

1.2 納入和排除標準

1.2.1 納入標準：①年輕恒牙因發(fā)育異常、外傷、齲病引起的牙髓炎或根尖周炎患兒[7]；②擬行牙髓血管再生手術(shù)，符合手術(shù)指征；③患牙牙根尚未發(fā)育完成，Nolla鈣化分期為7、8、9期[7]；④患兒家長簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準：①根折或全脫位牙齒；②根尖發(fā)育完成的患牙；③藥物過敏者；④隨訪失訪者。

1.3 方法

1.3.1 CGF制備：取患兒外周血9 ml于CGF無菌離心管中，置于Medifuge離心機（Silfradent srl，意大利）中，離心14 min后將離心管中液體分3層，分別為貧血小板層、CGF凝膠層以及紅細胞層，鑷子夾起CGF凝膠，以無菌眼科剪剪開中、下層的交界處，后將CGF凝膠層剪成約2 mm×2 mm大小備用。

1.3.2 手術(shù)方法：兩組均行牙髓血管再生治療，CGF組采用CGF覆蓋，對照組采用MTA覆蓋，具體如下。術(shù)前拍攝X線片觀察患牙根尖發(fā)育情況、病變情況和工作長度，以2%利多卡因行局部麻醉，顯微鏡（蘇州速邁醫(yī)療設(shè)備，中國）下開髓引流，揭全髓頂，充分暴露根管口，形成直線通路。以超聲（EMS，瑞士）和化學(xué)預(yù)備蕩洗清理根管，去除壞死物質(zhì)，K銼預(yù)備根管，預(yù)備時盡可能保留牙本質(zhì)壁，0.5%次氯酸鈉液反復(fù)沖洗根管，無菌吸潮紙尖蘸干根管，將環(huán)丙沙星、甲硝唑、米諾環(huán)素以1∶1∶1比例碾成粉末，與生理鹽水調(diào)制為三聯(lián)抗生素糊劑，用螺旋輸送器將糊劑導(dǎo)入根管，冠方使用暫封膏暫封，1周后復(fù)診，若患牙未明顯改善或出現(xiàn)叩痛、牙齦紅腫、瘺管等現(xiàn)象則再次進行上述操作，癥狀消除后局麻下使用橡皮障隔離患牙，顯微鏡下去除冠方暫封材料，打開并清除根管內(nèi)物質(zhì)，以次氯酸鈉液和生理鹽水沖洗根管，超聲蕩洗至根管完全潔凈，無菌吸潮紙尖蘸干根管，放置CGF塊前，以根管銼刺破根尖牙乳頭，出血達釉牙骨質(zhì)界下2～3 mm，暫封膏暫時封閉，等候約20 min以形成較好血凝塊。①CGF組以可吸收明膠海綿覆蓋凝血塊表面作為支架，用鑷子將CGF小塊置于根管中，垂直加壓器加壓，反復(fù)操作至CGF封閉根管上段。②對照組同樣用可吸收明膠海綿支架，填入MTA封閉根管上段。兩組封閉成功后，均放置厚度約為2 mm的Vitapex，GIC墊底，復(fù)合樹脂充填窩洞。術(shù)后1、3、6、12個月定期復(fù)查，臨床檢查與影像學(xué)檢查，觀察牙根發(fā)育、根尖周病變的愈合狀況和牙髓活力恢復(fù)情況。

1.4 觀察指標

1.4.1 臨床療效：手術(shù)6個月后觀察兩組臨床療效[8]。治愈：患牙無叩擊痛，牙齦腫脹和瘺管消失，牙松動度同對照牙；X線片顯示牙周膜影像清晰連續(xù)，根尖周低密度影消失，患牙牙根繼續(xù)發(fā)育，根尖孔直徑減小、根管壁增厚。好轉(zhuǎn)：患牙無叩擊痛，牙齦無腫脹，未見瘺管，牙松動度同對照牙；X線片見根尖周低密度影消失，患牙牙根無明顯發(fā)育。失敗：未達以上標準。總有效率=（治愈+好轉(zhuǎn)）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4.2 牙根尺寸變化情況：觀察術(shù)前、術(shù)后6個月牙根尺寸變化情況，觀察內(nèi)容包括牙根長度、根尖孔直徑、影像學(xué)牙根區(qū)域（RRA）。Image J圖像處理軟件分析圖片，測量前先以軟件中TurboReg插件校準圖像以減少因X光片投照角度變化導(dǎo)致的圖片偏差。其中牙根長度：近遠中根尖點連線中點與近遠中釉牙骨質(zhì)界點連線中點的距離。根尖孔直徑：近遠中根尖點的距離。RRA：Image J中以多邊形工具勾勒出近遠中釉牙骨質(zhì)界點及牙周韌帶，獲得牙根總面積，牙根總面積為牙根整個平面面積，并使用多邊形工具勾勒出根管空間的輪廓，獲取根管空間面積。RRA測量值=每個X片中的牙根總面積-根管空間面積。

1.4.3 牙髓活力恢復(fù)情況：觀察兩組術(shù)后6個月，患牙牙髓冷熱測試和牙髓電活力測試（長沙得悅，中國）與對照牙相同或稍遲鈍于對照牙視為牙髓活力測試陽性。

1.4.4 血管內(nèi)皮細胞表面標記物表達情況：測定兩組手術(shù)前后血管內(nèi)皮細胞表面標記物表達情況，取患兒血清5 ml，以常規(guī)Trizol（購自美國Invitrogen公司）提取總細胞中RNA并進行逆轉(zhuǎn)錄，以Primer Premier 5.0軟件設(shè)計引物，以β-actin為內(nèi)參，采用7 500 Real Time PCR以熒光實時定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（VQ-RT-PCR）測定血小板-內(nèi)皮細胞黏附分子（CD31）、血管內(nèi)皮生長因子受體2（VEGFR2）、血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（VE-Cadherin）表達水平。

1.4.5 并發(fā)癥：統(tǒng)計兩組隨訪期間根管內(nèi)感染、牙齒染色、牙齦腫痛及填充物脫落等并發(fā)癥發(fā)生情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析：選用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以（xˉ±s）表示，兩兩比較行獨立樣本t檢驗，同組內(nèi)比較采取配對樣本t檢驗，計數(shù)資料以[例（%）]表示，組間行χ2檢驗及Fisher精確概率法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效：觀察組總有效率與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。兩組典型病例手術(shù)前后X線片見圖1～2。

2.2 手術(shù)前后牙根尺寸變化情況：術(shù)前兩組牙根長度、根尖孔直徑、PRA比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），術(shù)后6個月CGF組牙根長度、PRA顯著高于本組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月，根尖孔直徑顯著低于本組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月（P＜0.05）。見表2。

2.3 術(shù)后6個月牙髓活力恢復(fù)情況：CGF組患兒牙髓活力測試陽性率為40.48%（17/42），對照組為19.05%（8/42），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.613，P=0.032）。

2.4 手術(shù)前后血管內(nèi)皮細胞表面標記物表達情況：術(shù)前兩組CD31、VEGFR2、VE-Cadherin表達水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），術(shù)后6個月CGF組CD31、VEGFR2、VE-Cadherin表達水平高于本組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月（P＜0.05）。見表3。

2.5 兩組并發(fā)癥發(fā)生情況：兩組并發(fā)癥發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

3 討論

年輕恒牙具有根尖乳頭、牙周膜、牙髓、牙囊等多種干細胞，其中根尖乳頭干細胞可誘導(dǎo)分化為牙本質(zhì)和牙髓樣組織，為牙髓血管再生手術(shù)成功的重要原因[9]。年輕恒牙具有血運豐富的特點，且有較強的牙髓抗感染能力，盡管牙髓感染或壞死，但仍可能有根管內(nèi)牙髓組織存在，即使根尖存在較為嚴重的病變，也可能保存部分牙乳頭、牙髓組織，當(dāng)牙周圍炎癥得以控制且根管消毒后，這些殘留組織就會增殖[10-11]。牙髓血管再生技術(shù)可利用牙周膜組織、根尖周組織和根管內(nèi)剩余牙髓組織，通過改善微環(huán)境充分發(fā)揮其生長潛能，促使其增殖、分化，從而促進牙髓樣組織成熟，使年輕恒牙繼續(xù)發(fā)育，而找到適宜的材料可為牙髓血管再生治療提供較好的生物學(xué)基礎(chǔ)和微環(huán)境[12-13]。

本研究中，兩組臨床療效比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但術(shù)后6個月CGF組牙根長度、PRA顯著高于同組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月，根尖孔直徑顯著低于本組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月。CGF組患兒牙髓活力測試陽性率顯著高于對照組。提示兩種材料運用至牙髓血管再生技術(shù)中均可獲得較好臨床療效，但CGF對牙根繼續(xù)發(fā)育、牙髓活力改善有更好的促進效果。其原因分析如下：PRA可反應(yīng)牙根的平面面積，為牙根發(fā)育的有效評價指標，較單一測量更加全面。CGF取自自體外周靜脈血，由特定離心機處理后獲得，制備操作簡便快速，離心過程中血小板之間高頻率撞擊，使得CGF富含高濃度的生長因子，可促進軟硬組織的愈合、修復(fù)和再生[14-16]。CGF為三維纖維蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，白細胞、生長因子、血小板聚集于纖維蛋白基質(zhì)中緩慢釋放，使生長因子長時間存在于體內(nèi)，促進組織再生，同時纖維蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可作為支架，加快微血管形成，為軟硬組織的愈合、修復(fù)和再生提供較高的生物學(xué)基礎(chǔ)[17-18]。

本研究中，術(shù)后6個月CGF組CD31、VEGFR2、VE-Cadherin表達水平高于本組術(shù)前及對照組術(shù)后6個月。提示CGF用于牙髓血管再生可有效促進牙周圍內(nèi)皮細胞增殖。CD31、VEGFR2、VE-Cadherin為常見的血管內(nèi)皮細胞表面標記物，可用于反應(yīng)牙周圍內(nèi)皮細胞增殖情況[19]。CGF離心后因血小板碰撞生成大量α顆粒，包括富含血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、血小板衍生生長因（PDGF）和轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β），這些物質(zhì)可將未分化的間充質(zhì)細胞吸引至相應(yīng)部位，促進細胞增殖和血管生成[20-21]。其中VEGF可促進血管內(nèi)皮細胞遷移、增殖，并提高血管通透性，促進血漿蛋白滲出，有利于血管再生[22-23]；PDGF可誘導(dǎo)受損部位的上皮細胞與內(nèi)皮細胞分裂、增殖，促進血管生成，并趨化白細胞、間充質(zhì)干細胞、成纖維細胞、成骨細胞等發(fā)生作用，其還可通過增加膠原蛋白合成、刺激骨細胞有絲分裂來促進新骨形成[24]；TGF-β可募集多種免疫細胞，并促進骨細胞增殖和分化，抑制破骨細胞生成，其還為細胞因子中促纖維生成的最強介質(zhì)，可促進創(chuàng)口愈合[25]。本研究中，兩組并發(fā)癥風(fēng)險基本相當(dāng)，提示CGF用于牙髓血管再生安全性較高。

綜上，CGF用于年輕恒牙牙髓壞死的牙髓血管再生治療中療效確切，有利于牙根繼續(xù)發(fā)育和牙髓活力恢復(fù)，在促進牙周圍內(nèi)皮細胞增殖中也具有較好效果，值得臨床推廣。

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[收稿日期]2023-04-19

本文引用格式：單軼，劉虹秀，包春艷，等.CGF用于牙髓血管再生對內(nèi)皮細胞增殖的影響[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2024，33（10）：18-22.