西南手參醇提取物的體外抗氧化和體外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)

摘 要：為挖掘西南手參醇提物的應(yīng)用潛力，該研究采用高效液相色譜法、生化分析技術(shù)和MTT法，對(duì)西南手參醇提物的體外抗氧化活性和體外抗腫瘤活性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明：（1）供試西南手參醇提物中含有天麻素（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5 mg·g^-1，濃度為0.25%）。（2）西南手參醇提物對(duì)羥基自由基、ABTS⁺自由基以及DPPH自由基具有顯著的清除能力，并隨著濃度的升高，作用更加明顯，具有濃度依賴性，醇提物的濃度為2.0 mg·mL^-1時(shí)最為顯著，2.0 mg·mL^-1的醇提取物對(duì)羥基自由基、ABTS⁺自由基和DPPH自由基的清除率分別為81.68%、19.94%和48.16%；而天麻素僅對(duì)羥基自由基具有清除能力，對(duì)ABTS⁺自由基和DPPH自由基沒有清除能力。（3）2.0 mg·mL^-1的西南手參醇提物對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞和HepG-2細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC₅₀）分別為5.170 mg·mL^-1和4.551 mg·mL^-1，對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞和MKN-45細(xì)胞的IC₅₀分別為1.759 mg·mL^-1和1.564 mg·mL^-1，對(duì)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞IC₅₀為2.665 mg·mL^-1，對(duì)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的IC₅₀為4.401 mg·mL^-1，說明西南手參醇提物對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞和HepG-2細(xì)胞、人胃癌BGC-823細(xì)胞和MKN-45細(xì)胞、人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞以及人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞活性均有顯著的抑制作用，其中對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞和MKN-45細(xì)胞的抑制效果最為顯著，表明西南手參的抗腫瘤作用具有廣譜性。綜上認(rèn)為，西南手參醇提物具有抗氧化活性，并且比其抗氧化活性物質(zhì)天麻素具有更廣譜的活性氧清除能力，依據(jù)活性氧與腫瘤發(fā)生之間的關(guān)系將其用于抗腫瘤的研究，發(fā)現(xiàn)其具有廣泛的抗腫瘤特性和天然植物通過多種成分協(xié)同作用的特性，可抑制多種腫瘤細(xì)胞尤其是人胃癌細(xì)胞的增殖。

關(guān)鍵詞：西南手參，天麻素，醇提取物，抗氧化，抗腫瘤

中圖分類號(hào)：Q946

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-3142（2025）02-0337-10

基金項(xiàng)目：第四次全國(guó)中藥資源普查項(xiàng)目（2019PC006）；九龍縣中藏藥資源調(diào)查及研究項(xiàng)目（HX20220274）；四川省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（23NSFSC0993）。

第一作者：范晶鈺（1999—），碩士，主要從事細(xì)胞學(xué)研究，（E-mail）1748914715@qq.com。

^*通信作者：馬丹煒，博士，教授，主要從事植物科學(xué)研究，（E-mail）danwei10ma@126.com。

Evaluation of in vitro antioxidant and antitumor activity of alcohol extract from Gymnadenia orchidis

FAN Jingyu¹，REN Yumin¹，TANG Xian¹，LI Jiuyi¹，MA Danwei^1，2*，NIE Shenming³

（1. College of Life Sciences，Sichuan Normal University，Chengdu 610101，China; 2. Key Laboratory of Land Resources Evaluation and Monitoring in Southwest China，Ministry of Education （Sichuan Normal University），Chengdu 610066，China; 3. Jiulong County Runde Chinese Herbal Medicine Technology Co.，Ltd.，Jiulong 626200，Sichuan，China）

Abstract：To investigate the potential applications of the alcohol extract from Gymnadenia orchidis，an in vitro study was conducted to evaluate its antioxidant activity and antitumor activity using high-performance liquid chromatography （HPLC），biochemical analysis technology，and the MTT method. The results were as follows：（1） Gastrodin was discovered in the alcohol extract from G. orchidis，with a mass fraction of 2.5 mg·g^-1. The concentration of gastrodin in the alcohol extract was 0.25%. （2） The alcohol extract from G. orchidis demonstrated a significant scavenging capacity towards hydroxyl radicals，ABTS⁺ radicals，and DPPH radicals. The efficacy of the alcohol extract from G. orchidis becomed more pronounced with an increase in concentration，exhibiting a concentration-dependent response. The alcohol extract from G. orchidis demonstrated the most substantial scavenging capacity at a concentration of 2.0 mg·mL^-1，the scavenging rates for hydroxyl radical，ABTS⁺ radical，and DPPH radical were 81.68%，19.94%，and 48.16%，respectively. In contrast，gastrodin solely exhibited scavenging activity towards hydroxyl radicals and lacked such activity towards ABTS⁺ and DPPH radicals. （3） The IC₅₀ of the 2.0 mg·mL^-1 alcohol extract from G. orchidis on SMMC-7721 and HepG-2 were 5.170 mg·mL^-1 and 4.551 mg·mL^-1，respectively. Similarly，the IC₅₀ of BGC-823 and MKN-45 were 1.759 mg·mL^-1 and 1.564 mg·mL^-1，respectively，while the IC₅₀ of MDA-MB-231 was 2.665 mg·mL^-1. Furthermore，the IC₅₀ of U251 was 4.401 mg·mL^-1. The alcohol extract from G. orchidis demonstrated significant inhibitory effects on SMMC-7721，HepG-2，BGC-823，MKN-45，MDA-MB-231，and U251 cells. Notably，the inhibitory effects on BGC-823 and MKN-45 were the most pronounced，suggesting that the antitumor activity of the alcohol extract from G. orchidis exhibited a wide range of efficacy. The above findings of this research demonstrate that the alcohol extract from G. orchidis possesses antioxidant capabilities，and its ability to scavenge reactive oxygen species is more extensive than that of its antioxidant active component，gastrodin. Given the correlation between reactive oxygen species and tumorigenesis，the alcohol extract from G. orchidis was discovered to possess significant characteristics of antitumor and contributing to the synergistic effects of natural plants through its multiple components. The alcohol extract from G. orchidis can effectively inhibit the proliferation of various tumor cells，particularly those of human gastric cancer.

Key words：Gymnadenia orchidis，gastrodin，alcohol extracts，antioxidant，antitumor

據(jù)統(tǒng)計(jì)，人類有1/6的死亡是由癌癥引起的，最常見的癌癥有肝癌、胃癌、乳腺癌（Sung et al.，2021）。目前，在癌癥治療方面大多采用手術(shù)、放療、化療等手段，中醫(yī)藥作為補(bǔ)充和替代醫(yī)學(xué)發(fā)揮著重要的作用，中藥治療涉及多個(gè)靶點(diǎn)、多個(gè)通路，可以緩解化療藥物的副作用、實(shí)現(xiàn)協(xié)同治療的效果，在癌癥治療方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)（陳鷹娜等，2023）。

手參屬（Gymnadenia）為蘭科（Orchidaceae）的草本植物，主要分布于俄羅斯、英國(guó)、中國(guó)、日本和朝鮮等國(guó)家海拔2 800～4 700 m的范圍內(nèi)（Shang et al.，2017）。手參屬的塊莖狀如手掌，又稱為手掌參。手參塊莖味甘、澀，具有補(bǔ)益氣血、生津止渴、增強(qiáng)體質(zhì)的功效，可用于治療神經(jīng)衰弱、失血、虧精、肺虛咳喘等疾?。ㄔ勒齽偟?，2010），是蒙醫(yī)和藏醫(yī)常用藥材。手參的藥用價(jià)值最早記載于《四部醫(yī)典》，在蒙醫(yī)和藏醫(yī)古籍如《晶珠本草》《本草圖鑒》《藍(lán)琉璃》等均有記載（岳正剛等，2010）。近年來，手參作為珍貴的傳統(tǒng)藥材逐漸受到關(guān)注，經(jīng)研究其化學(xué)成分包括二氫芪類、菲類、苷類、苯丙素類、異戊二烯類、脂肪酸衍生物等多種類型，藥理活性包括抗氧化、抗過敏、促進(jìn)祖細(xì)胞增殖（李敏等，2006）。鄭振興等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，手參屬的西南手參（Gymnadenia orchidis）醇提物中含有天麻素。Qin等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，天麻素通過Fractalkine（CX3CL1）及其受體CX3CR1抑制脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，從而緩解周圍神經(jīng)病變（CIPN），進(jìn)而抑制P38/絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，降低炎癥因子TNF-α和白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）的表達(dá)，從而抑制腫瘤的增殖。已有研究表明，天麻素可抑制肝癌（張恒，2023）、胃癌（季蒙蒙等，2015）、乳腺癌（李余星等，2017）以及膠質(zhì)瘤（伏計(jì)能等，2022）。腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移與氧化應(yīng)激有關(guān)（Jiao et al.，2016）。手參醇提物（何侃亮等，2017）及其成分天麻素（Ahmad et al.，2019）均具有良好的抗氧化能力，但是否能夠通過其抗氧化功能抑制腫瘤細(xì)胞增殖還有待進(jìn)一步考證。

藥用植物的活性成分受生長(zhǎng)環(huán)境影響較大，不同產(chǎn)地的植物成分和藥效均具有較大的差異（Yang et al.，2018）。四川省甘孜藏族自治州九龍縣位于四川省西南部的橫斷山區(qū)，植物資源十分豐富（余有德等，1989），過去由于地理位置偏僻，加上交通十分不便，其植物資源尤其是藥用植物資源的研究基礎(chǔ)較為薄弱。本課題組調(diào)查發(fā)現(xiàn)，九龍縣高寒草甸和灌叢西南手參分布廣泛，當(dāng)?shù)鼐用癯３⑵鋲K莖用于滋補(bǔ)藥材。然而，目前尚不清楚九龍產(chǎn)西南手參塊莖天然產(chǎn)物中是否含有天麻素，是否具有抗氧化活性物質(zhì)和抗腫瘤活性物質(zhì)。基于此，本研究以九龍縣產(chǎn)西南手參塊莖為研究對(duì)象，在測(cè)定其塊莖醇提物中天麻素含量的基礎(chǔ)上，評(píng)估西南手參醇提物和天麻素的抗氧化活性，并進(jìn)一步采用MTT法研究西南手參醇提物對(duì)人肝癌細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞、人乳腺癌細(xì)胞和人膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)，以期篩選出對(duì)西南手參醇提物敏感的腫瘤細(xì)胞，為西南手參醇提物抗腫瘤活性物質(zhì)的分離、抗腫瘤機(jī)制的深入研究奠定基礎(chǔ)，進(jìn)而為九龍縣產(chǎn)西南手參資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試西南手參塊莖購(gòu)自四川省甘孜藏族自治州九龍縣中藥材市場(chǎng)，經(jīng)四川師范大學(xué)馬丹煒教授鑒定為西南手參（Gymnadenia ordnidis）。

人肝癌SMMC-7721細(xì)胞和HepG-2細(xì)胞、人胃癌BGC-823細(xì)胞和MKN-45細(xì)胞、人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞均來自中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)。

1.2 方法

1.2.1 西南手參醇提取物的制備

先將干燥的西南手參塊莖粉碎過篩后，按120（V/V）料液比加入75%乙醇溶液，30 ℃振蕩2 h，再熱回流提取2 h后，過濾得到濾液，重復(fù)2次以上操作。將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，經(jīng)冷凍干燥得到西南手參醇提物干燥粉末，存放于4 ℃下備用（何侃亮等，2017）。

1.2.2 西南手參醇提取物中天麻素含量的測(cè)定

精密稱取西南手掌參醇提取物粉末1 g，加入50%的甲醇定容至10 mL，過0.45 μm濾膜，即得樣品溶液，采用液相色譜測(cè)定天麻素含量。

1.2.2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C₁₈（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇0.1%磷酸水溶液（595）；流速：0.8 mL·min^-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL（吳燕等，2017；鄭振興等，2020）。

1.2.2.2 線性關(guān)系考察 精密量取天麻素標(biāo)品，用甲醇準(zhǔn)確配置成濃度為0.030、0.070、0.140、0.210、0.280、0.350、0.420 mg·mL^-1的系列標(biāo)品溶液，取各標(biāo)品溶液進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得天麻素的回歸方程。

1.2.3 西南手參醇提取物體外抗氧化活性測(cè)定

1.2.3.1 羥基自由基清除能力的測(cè)定 精確配制濃度為0.5、1、2 mg·mL^-1的西南手參醇提物溶液，將9 mmol·L^-1 FeSO₄溶液、9 mmol·L^-1水楊酸-乙醇溶液、10 mmol·L^-1 H₂O₂溶液各2 mL與各組待測(cè)西南手參醇提物溶液混合，在37 ℃下水浴30 min，運(yùn)用MD/SpectraMaxM2多功能細(xì)胞分析儀在510 nm處分別測(cè)其吸光度。以維生素C作為陽性對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次。羥基自由基清除率計(jì)算公式（Husain et al.，1987）：

羥基自由基清除率（%）= ［1-（A_樣品-A_對(duì)照）/A_空白］×100（1）

式中：A_樣品為實(shí)驗(yàn)組吸光度；A_對(duì)照為用蒸餾水代替水楊酸的吸光度，按上述方法測(cè)定的吸光度；A_空白為用蒸餾水代替待測(cè)樣品溶液，按上述方法測(cè)定的吸光度。

1.2.3.2 DPPH自由基清除能力的測(cè)定 分別取2 mL濃度為0.5、1、2 mg·mL^-1的西南手參醇提物溶液，加入0.05 mg·mL^-1 DPPH乙醇溶液2 mL，充分混勻后，室溫避光靜置30 min，于517 nm處分別測(cè)吸光度。以維生素C作為陽性對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次。DPPH自由基清除率計(jì)算公式（Villao et al.，2007）：

DPPH自由基清除率（%）=［1-（A_樣品-A_對(duì)照）/A_空白］×100（2）

式中：A_樣品為實(shí)驗(yàn)組吸光度；A_對(duì)照為用蒸餾水代替DPPH溶液的吸光度，按上述方法測(cè)定的吸光度；A_空白為用無水乙醇代替多糖溶液，按上述方法測(cè)定的吸光度。

1.2.3.3 ABTS自由基清除能力的測(cè)定 配制7 mmol·L^-1 ABTS水溶液和4.9 mmol·L^-1過硫酸鉀溶液各10 mL，將其等體積混合，于室溫條件下暗處反應(yīng)16 h。用磷酸鹽緩沖液稀釋至A_{734 nm}在0.7左右。分別取0.1 mL濃度為0.5、1、2 mg·mL^-1的西南手參醇提物溶液，加入3.9 mL制得的ABTS稀釋溶液，混勻，靜置6 min，運(yùn)用MD/SpectraMaxM2多功能細(xì)胞分析儀分別在510 nm和734 nm處測(cè)吸光度。以維生素C作為陽性對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次。ABTS自由基清除率計(jì)公式（Tang amp; Liu，2007）：

ABTS自由基清除率（%）=（1-A₁/A₀）×100（3）

式中：A₁為實(shí)驗(yàn)組吸光度；A₀為用蒸餾水代替西南手參醇提物溶液，按上述方法測(cè)定的吸光度。

1.2.4 細(xì)胞的培養(yǎng)及增殖抑制率檢測(cè)

1.2.4.1 細(xì)胞的培養(yǎng) 人肝癌SMMC-7721細(xì)胞（Han et al.，2019）和HepG-2細(xì)胞（Yang et al.，2019）、人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞（Caner et al.，2021）以及人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞（Wang et al.，2020）在添加10% FBS、100 U·mL^-1青霉素和0.1 mg·mL^-1鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。人胃癌BGC-823細(xì)胞（Hu et al.，2016）和MKN-45細(xì)胞（Naghashpour et al.，2023）在添加10% FBS、100 U·mL^-1青霉素和0.1 mg·mL^-1鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)環(huán)境為37 ℃、5% CO₂和5%飽和濕度。

1.2.4.2 細(xì)胞活率檢測(cè) 將細(xì)胞按照每孔1×10⁵個(gè)細(xì)胞的密度接種至96孔板，孵育過夜。將含終濃度為0、1、2、3、4、5 mg·mL^-1的西南手參醇提物培養(yǎng)基放入96孔板中，每個(gè)濃度4次重復(fù)，置于5%的CO₂培養(yǎng)箱，37 ℃培養(yǎng)24、48、72 h后每孔加入10 μL MTT試劑，37 ℃靜置4 h，吸去上清液，每孔加入150 μL DMSO溶液，于490 nm處測(cè)吸光度。每個(gè)處理重復(fù)4次。計(jì)算細(xì)胞存活率，計(jì)算公式（Hu et al.，2016 ; Wang et al.，2020; Naghashpour et al.，2023）：

細(xì)胞存活率（%）=（A_樣品-A_空白）/（A_陰性-A_空白）×100

式中：A_空白是無細(xì)胞組的吸光度；A_陰性是未加藥處理組的吸光度。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。運(yùn)用Graphpad Prism 8軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）和多重比較（LSD）。采用Graphpad Prism 8和Microsoft PowerPoint 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 西南手參醇提物中天麻素的含量

如圖1：A所示，在色譜條件下天麻素的色譜峰分離度良好，按1.2.2方法測(cè)得天麻素的回歸方程為Y=3×10⁷X+21 085，r=0.999 8。進(jìn)樣量在0.3～4.2 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。如圖1：B所示，天麻素在西南手參中含量，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5 mg·g^-1，西南手參醇提物中所含天麻素為0.25%。

2.2 西南手參醇提取物的體外抗氧化活性

西南手參醇提取物具有較強(qiáng)的體外抗氧化能力，對(duì)羥基自由基（圖2：A）、ABTS⁺自由基（圖2：B）和DPPH自由基（圖2：C）的清除率隨著濃度的增加呈上升趨勢(shì)，2.0 mg·mL^-1的西南手參醇提取物對(duì)羥基自由基、ABTS⁺自由基和DPPH自由基的清除率分別為81.68%、19.94%和48.16%，表明西南手參醇提取物對(duì)羥基自由基的清除具有顯著作用。

天麻素具有很強(qiáng)的清除羥基自由基的能力（圖2：D），在濃度分別為1.25、2.5、5.0 μg·mL^-1時(shí)對(duì)DPPH自由基和ABTS⁺自由基均無清除能力。

2.3 西南手參醇提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞活率的影響

如圖3所示，西南手參醇提物對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞和HepG-2細(xì)胞具有抑制作用，并表現(xiàn)為濃度-時(shí)間依賴效應(yīng)。在同一時(shí)間處理下，兩種人肝癌細(xì)胞活率隨著西南手參醇提取物濃度升高，呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。在相同濃度下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的存活率也呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。西南手參醇提物濃度高于3 mg·mL^-1時(shí)，與對(duì)照組相比均具有顯著性差異（P＜0.05）。

2.4 西南手參醇提取物對(duì)人胃癌細(xì)胞活率的影響

西南手參醇提物對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞和MKN-45細(xì)胞具有明顯的抑制作用，并具有濃度-時(shí)間依賴效應(yīng)（圖4）。在同一時(shí)間處理下，細(xì)胞活率隨著西南手參醇提取物濃度的升高，而呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。在同一處理濃度下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的存活率也呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。西南手參醇提物濃度高于1 mg·mL^-1時(shí)，與對(duì)照組相比均有顯著性差異（P＜0.000 1）。

2.5 西南手參醇提取物對(duì)乳腺癌細(xì)胞活率的影響

西南手參醇提物對(duì)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用，如圖5所示。在相同時(shí)間處理下，細(xì)胞活率隨著西南手參醇提取物濃度的升高，而呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。在相同濃度下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的存活率也呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)，表明西南手參醇提物抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞生長(zhǎng)具有時(shí)間-濃度依賴效應(yīng)。當(dāng)西南手參醇提物濃度高于2 mg·mL^-1時(shí)與對(duì)照組相比均有顯著性差異（P＜0.001）。

2.6 西南手參醇提取物對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞活率的影響

西南手參醇提物對(duì)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞具有抑制作用（圖6）。在相同時(shí)間處理下，細(xì)胞活率隨著西南手參醇提取物濃度的升高而呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。在相同濃度下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的存活率也呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。這說明西南手參醇提物抑制人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞生長(zhǎng)具有時(shí)間-濃度依賴效應(yīng)。西南手參醇提物濃度高于3 mg·mL^-1時(shí)，與對(duì)照組相比均具有顯著性差異（P＜0.000 1）。

2.7 西南手參醇提取物對(duì)細(xì)胞半數(shù)抑制濃度的影響

西南手參醇提物對(duì)6種細(xì)胞作用24 h時(shí)的半數(shù)抑制濃度（IC₅₀）如圖7所示，在相同時(shí)間處理下，人肝癌SMMC-7721細(xì)胞和HepG-2細(xì)胞的IC₅₀分別為5.170 mg·mL^-1和4.551 mg·mL^-1，人胃癌BGC-823細(xì)胞和MKN-45細(xì)胞的IC₅₀分別為1.759 mg·mL^-1和1.564 mg·mL^-1，人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的IC₅₀為2.665 mg·mL^-1，人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的IC₅₀為4.401 mg·mL^-1。結(jié)果表明，西南手參醇提物對(duì)6種細(xì)胞有不同程度的抑制作用，其中對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞和MKN-45細(xì)胞的抑制效果最為顯著。

3 討論

活性氧在組織穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用，從調(diào)節(jié)信號(hào)到促進(jìn)細(xì)胞損傷和死亡，它的水平受到細(xì)胞抗氧化防御系統(tǒng)的嚴(yán)格調(diào)節(jié)（Harris amp; DeNicola，2020）。腫瘤細(xì)胞線粒體電子傳遞鏈（ETC）和NADPH氧化酶產(chǎn)生超氧化物的速度很快，超氧化物經(jīng)超氧化物歧化酶1（SOD1）或超氧化物歧化酶2（SOD2）快速轉(zhuǎn)化為H₂O₂，H₂O₂可以通過氧化還原信號(hào)促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、存活和侵襲（Martínez-Reyes amp; Chandel，2021）。已有研究表明，通過抑制活性氧的產(chǎn)生，有效抑制肝癌（Zhan et al.，2023）、胃癌（Tao et al.，2020）、乳腺癌（Das et al.，2023）和膠質(zhì)瘤（Huang et al.，2021）等癌細(xì)胞的增殖。因此，抗氧化已然作為抗腫瘤的一種手段。從植物來源的天然產(chǎn)物（如多糖、酚類、萜類化合物、醌類和生物堿類）中發(fā)現(xiàn)潛在治療癌癥的手段越來越受到關(guān)注。一些天然產(chǎn)物可以通過促進(jìn)胞內(nèi)ROS增加，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞通過ROS介導(dǎo)的線粒體依賴性途徑凋亡（Qian et al.，2019）。與傳統(tǒng)的藥物相比，天然產(chǎn)物具有多靶點(diǎn)、低副作用和低成本的突出優(yōu)勢(shì)（Yang et al.，2021）。本研究結(jié)果表明，西南手參醇提物比天麻素具有更加廣泛的抗氧化作用，對(duì)人肝癌SMMC-772細(xì)胞和HepG-2細(xì)胞、人胃癌BGC-823細(xì)胞和MKN-45細(xì)胞、人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞以及人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞有不同程度的抑制作用，其中對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制效應(yīng)最大。有研究發(fā)現(xiàn)，靈芝提取物不僅通過調(diào)控p53蛋白表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡達(dá)到抑制結(jié)直腸腺癌細(xì)胞Caco-2細(xì)胞的效果（Elkhateeb et al.，2018），而且還通過調(diào)節(jié)NFκB、IKKα、IKKβ、p-NFκB-65（Ser 536）和p-IKKα/β（Ser 176/180）蛋白使宮頸癌細(xì)胞HeLa細(xì)胞死亡（Kiddane et al.，2022）。這是由于天然產(chǎn)物存在復(fù)雜的成分對(duì)不同細(xì)胞均具有抑制作用，因此對(duì)西南手參進(jìn)行進(jìn)一步的深入研究非常有必要?？傊髂鲜謪⒖勺鳛橐环N抗腫瘤的潛在藥物，為多種癌癥的治療提供新的解決方案，胃癌細(xì)胞可作為今后的試驗(yàn)靶標(biāo)重點(diǎn)關(guān)注。

4 結(jié)論

西南手參醇提物及其成分天麻素具有顯著體外清除羥基自由基的能力，西南手參醇提物對(duì)肝癌、胃癌、乳腺癌和人膠質(zhì)瘤等滯留細(xì)胞的增殖具有抑制效應(yīng)，尤其是對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的抑制效果最佳。

參考文獻(xiàn)：

AHMAD O，WANG B，MA K，et al.，2019. Lipid modulating anti-oxidant stress activity of gastrodin on nonalcoholic fatty liver disease larval zebrafish model ［J］. International Journal of Mollecular Sciences，20（8）：1984.

CANER A，ONAL MG，SILICI S，2021. The effect of bee bread （Perga） with chemotherapy on MDA-MB-231 cells ［J］ . Molecular Biology Reports，48（3）：2299-2306.

CHEN YN，F(xiàn)ANG ZR，XIE ZH，2023. Anti-tumor active ingredients of traditional Chinese medicine and its mechanism of action ［J］. Journal of Chinese Medicinal Matericals，46（9）：2370-2376. ［陳鷹娜，方芷若，謝志豪，2023. 中藥抗腫瘤有效成分及其作用機(jī)制 ［J］. 中藥材，46（9）：2370-2376.］

DAS C，ADHIKARI S，BHATTACHARYA A，et al.，2023. Epigenetic-metabolic interplay in the DNA damage response and therapeutic resistance of breast cancer ［J］ . Cancer Research，83（5）：657-666.

ELKHATEEB WA，ZAGHLOL GM，EL-GARAWANI IM，et al.，2018. Ganoderma applanatum secondary metabolites induced apoptosis through different pathways：In vivo and in vitro anticancer studies ［J］. Biomedicine amp; Pharmacotherapy，101：264-277.

FU JN，ZHAO HJ，WANG YX，2022. Effect of gastrodin on proliferation and apoptosis of glioma cells ［J］. The Chinese Journal of Clinical Pharmacology，38（6）：518-522. ［伏計(jì)能，趙慧娟，王玉霞，2022. 天麻素對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響 ［J］. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，38（6）：518-522.］

HAN X，ZHANG JM，SHI DF，et al.，2019. Targeting thioredoxin reductase by ibrutinib promotes apoptosis of SMMC-7721 cells ［J］ . Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，369（2）：212-222.

HARRIS IS，DENICOLA GM，2020. The complex interplay between antioxidants and ROS in cancer ［J］ . Trends in Cell Biology，30（6）：440-451.

HE KL，LI B，JI MC，2017. Pharmacodynamics research on the activity of Gymnadenia conopsea ［J］. Shaanxi Journal of Traditional Chinese Medicine，38（9）：1308-1310. ［何侃亮，李博，紀(jì)明春，2017. 手掌參醇提物的藥效學(xué)研究 ［J］. 陜西中醫(yī)，38（9）：1308-1310.］

HU CQ，GAO XX，HAN YY，et al.，2016. Evodiamine sensitizes BGC-823 gastric cancer cells to radiotherapy in vitro and in vivo ［J］ . Molecular Medicine Reports，14（1）：413-419.

HUANG HH，ZHANG SY，LI YY，et al.，2021. Suppression of mitochondrial ROS by prohibitin drives glioblastoma progression and therapeutic resistance ［J］ . Nature Communications，12：3720.

HUSAIN SR，CILLARD J，CILLARD P，1987. Hydroxyl radical scavenging activity of flavonoids ［J］ . Phytochemistry，26（9）：2489-2491.

JI MM，YANG JW，DU B，et al.，2015. Effect of gastrodin on activity and apoptosis of gastric cancer cells ［J］. Progress in Modern Biomedicine，15（13）：2421-2424. ［季蒙蒙，楊金偉，杜斌，等，2015.天麻素對(duì)胃癌細(xì)胞活力和凋亡的影響 ［J］. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，15（13）：2421-2424.］

JIAO R，LIU YX，GAO H，et al.，2016. The Anti-oxidant and antitumor properties of plant polysaccharides ［J］ . American Journal of Chinese Medicine，44（3）：463-488.

KIDDANE AT，KANG M J，HO TC，et al.，2022. Anticancer and apoptotic activity in cervical adenocarcinoma HeLa using crude extract of Ganoderma applanatum ［J］. Current Issues in Molecular Biology，44（3）：1012-1026.

LI M，WANG CL，GUO SX，et al.，2006. Advances in studies on chemical constituents and pharmacological activities for plants of Gymnadenia R.Br. ［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，37（8）：1264-1268. ［李敏，王春蘭，郭順星，等，2006. 手參屬植物化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展 ［J］. 中草藥，37（8）：1264-1268.］

LI YX，JIANG YX，ZHENG J，et al.，2017. Effect of gastrodin on CINP rat model under different pathological conditions ［J］. Traditional Chinese Drug Research amp; Clinical Pharmacology，28（6）：724-728. ［李余星，江永祥，鄭軍，等，2017. 天麻素對(duì)不同生理病理狀態(tài)下CINP大鼠模型的作用 ［J］. 中藥新藥與臨床藥理，28（6）：724-728.］

MARTíNEZ-REYES I，CHANDEL NS 2021. Cancer Metabolism：Looking forward. ［J］ . Nature Reviews Cancer，21：669-680.

NAGHASHPOUR M，DAYER D，KARAMI H，et al.，2023. Evaluating the magnolol anticancer potential in MKN-45 gastric cancer cells ［J］ . Medicina （Kaunas），59（2）：286.

QIAN QH，CHEN WQ，CAO YJ，et al.，2019. Targeting reactive oxygen species in cancer via Chinese herbal medicine ［J］ . Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2019：9240426.

QIN BJ，LUO N，LI YX，et al.，2021. Protective effect of gastrodin on peripheral neuropathy induced by anti-tumor treatment with vincristine in rat models ［J］ . Drug and Chemical Toxicology，44（1）：84-91.

SHANG XF，GUO X，LIU Y，et al.，2017. Gymnadenia conopsea （L.） R. Br.：A systemic review of the ethnobotany，phytochemistry，and pharmacology of an important asian folk medicine ［J］ . Frontiers in Pharmacology，8：24.

SUNG H，F(xiàn)ERLAY J，SIEGEL RL，et al.，2021. Global cancer statistics 2020：GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries ［J］ . CA Cancer Journal for Clinicians，71（3）：209-249.

TANG YZ，LIU ZQ，2007. Free-radical-scavenging effect of carbazole derivatives on DPPH and ABTS radicals ［J］ . Journal of the American Oil Chemists Society，84（12）：1095-1100.

TAO JQ，SUN GL，LI Q，et al.，2020. KIF15 promotes the evolution of gastric cancer cells through inhibition of reactive oxygen species-mediated apoptosis. ［J］ . Journal of Cellular Physiology，235（12）：9388-9398.

VILLAO D，F(xiàn)ERNNDEZ-PACHN MS，MOY ML，et al.，2007. Radical scavenging ability of polyphenolic compounds towards DPPH free radical ［J］. Talanta，71（1）：230-235.

WANG PY，WANG X，TANG Q，et al.，2020. Functionalized grap hene oxide against U251 glioma cells and its molecular mechanism ［J］ . Materials Science and Engineering：C，116：111187.

WU Y，DU LL，LI B，et al.，2017. Determination of the six kinds of gastrodin derivatives in Gymnadenia conopsea by UPLC ［J］. West China Journal of Pharmaceutical Sciences，32（1）：71-73. ［吳燕，杜蕾蕾，李彬，等，2017. UPLC測(cè)定手參中的6種天麻素類成分 ［J］. 華西藥學(xué)雜志，32（1）：71-73.］

YANG LS，JI WW，ZHONG H，et al.，2019. Anti-tumor effect of volatile oil from Houttuynia cordata Thunb. on HepG2 cells and HepG2 tumor-bearing mice ［J］. RSC Advances，9（54）：31517-31526.

YANG L，WEN KS，RUAN X，et al.，2018. Response of plant secondary metabolites to environmental factors ［J］ . Molecules，23（4）：762.

YANG Y，LIU QY，SHI XN，et al.，2021. Advances in plant-derived natural products for antitumor immunotherapy ［J］ . Archives of Pharmacal Research，44：987-1011.

YU YD，LIU LH，ZHANG JH，1989. Vegetation regionalization of the hengduan mountainous region ［J］. Mountain Research，7（1）：47-55. ［余有德，劉倫輝，張建華，1989. 橫斷山區(qū)植被分區(qū) ［J］. 山地研究，7（1）：47-55.］

YUE ZG，ZI JC，ZHU CG，et al.，2010. Constituents of Gymnadenia conopsea ［J］. China Journal of Chinese Materia Medica，35（21）：2852-2861. ［岳正剛，訾佳辰，朱承根，等，2010. 手掌參的化學(xué)成分 ［J］. 中國(guó)中藥雜志，35（21）：2852-2861.］

ZHANG H，2023. Experimental study of GAS on the proliferation and apoptosis of human hepatocellular carcinoma HepG-2 cell ［D］. Kunming：Kunming Medical University. ［張恒，2023. 天麻素對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞增殖凋亡的實(shí)驗(yàn)研究 ［D］. 昆明：昆明醫(yī)科大學(xué).］

ZHAN MX，DING YF，HUANG SZ，et al.，2023. Lysyl oxidase-like 3 restrains mitochondrial ferroptosis to promote liver cancer chemoresistance by stabilizing dihydroorotate dehydrogenase ［J］ . Nature Communications，14：3123.

ZHENG ZX，HU HW，HUANG BJ，et al.，2020. Determination of the contents of gastrodin and 4-hydroxybenzyl alcohol in Gymnadeniae rhizome of different morphology by HPLC ［J］. Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica，11（1）：35-38. ［鄭振興，胡瀚文，黃碧君，等，2020. HPLC測(cè)定不同形態(tài)西南手參中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量 ［J］. 中藥與臨床，11（1）：35-38.］

（責(zé)任編輯 蔣巧媛 王登惠）