基于代謝組學(xué)探討益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方對(duì)肝硬化輕微型肝性腦病腸道代謝物的影響

摘要：目的 通過(guò)腸道代謝組學(xué)探討益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方對(duì)肝硬化輕微型肝性腦?。∕HE）的作用。方法 選取2024年3月—2024年5月于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院住院且經(jīng)肝性腦病心理測(cè)量評(píng)分診斷為MHE的肝硬化患者（n=11）作為研究對(duì)象，同時(shí)招募健康患者家屬作為對(duì)照組（n=11）。通過(guò)采集對(duì)照組及益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后MHE患者的糞便進(jìn)行代謝組學(xué)分析，探索MHE患者的腸道代謝物特征，并通過(guò)人群隊(duì)列探討益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方對(duì)MHE患者腸道代謝的影響。計(jì)數(shù)資料兩組間比較采用Fisher精確檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)，同一組內(nèi)治療前后的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組間及同組內(nèi)治療前后的比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。結(jié)果 MHE組與對(duì)照組共檢測(cè)出29種差異代謝物，差異代謝物主要為氨基酸類、有機(jī)酸類、有機(jī)胺類、碳水化合物類、脂肪酸類和維生素類，MHE組明顯上調(diào)12種，下調(diào)17種，主要富集在鳥氨酸代謝通路、支鏈氨基酸代謝通路和芳香氨基酸代謝通路。MHE患者經(jīng)益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后共檢測(cè)出80種差異代謝物，差異代謝物主要為碳水化合物類、有機(jī)酸類和氨基酸類，中藥治療后上調(diào)56種，下調(diào)24種，差異通路也主要富集在鳥氨酸代謝通路、支鏈氨基酸代謝通路和芳香氨基酸代謝通路。

結(jié)論 益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方可能通過(guò)調(diào)節(jié)MHE患者的腸道代謝發(fā)揮治療作用。

關(guān)鍵詞：肝硬化；肝性腦??；益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方；中醫(yī)藥療法；代謝組學(xué)

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（82104781）；北京市屬醫(yī)院科研培育計(jì)劃（PZ20241802）；北京市醫(yī)院管理中心“登峰”人才培養(yǎng)計(jì)劃（DFL20191803）；高層次公共衛(wèi)生技術(shù)人才建設(shè)項(xiàng)目培養(yǎng)計(jì)劃（學(xué)科帶頭人-02-16）

Effect of Yiqi Yangyin Jiedu Huayu prescription on intestinal metabolites in liver cirrhosis with minimal hepatic encephalopathy：A study based on metabolomics

JIANG Tingting，ZHANG Qun，WANG Xianbo，JIANG Yuyong，LIU Xiaoli，YU Hao，YANG Zhiyun

Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Beijing Ditan Hospital，Capital Medical University，Laboratory for Clinical Medicine，Capital Medical University，Beijing 100015，China

Corresponding author：YANG Zhiyun，yangzhiyun2016@163.com （ORCID：0000-0002-1522-0749）

Abstract：Objective To investigate the effect of Yiqi Yangyin Jiedu Huayu prescription on minimal hepatic encephalopathy in liver cirrhosis based on intestinal metabolomics. Methods A total of 11 patients with liver cirrhosis who were hospitalized in Beijing Ditan Hospital，Capital Medical University，from March to May 2024，and were diagnosed with MHE based on psychometric hepatic encephalopathy score were enrolled as subjects，and 11 healthy family members of the patients were enrolled as control group. Fecal samples were collected for metabolomics analysis from the control group and the patients with MHE before and after treatment with Yiqi Yangyin Jiedu Huayu prescription，and a population cohort study was conducted to investigate the effect of Yiqi Yangyin Jiedu Huayu prescription on intestinal metabolism of patients with MHE. The Fisher’s exact test was used for categorical data between two groups；the independent samples t-test was used for comparison of normally distributed continuous data between two groups，the paired t-test was used for comparision before and after treatment within the same group，and the Wilcoxon rank-sum test was used for comparison of non-normally distributed continuous data between two groups. Results A total of 29differentially expressed metabolites were detected between the MHE group and the control group，mainly amino acids，organic acids，organic amines，carbohydrates，fatty acids，and vitamins，and there were 12 upregulated metabolites and 17 downregulated metabolites in the MHE group，which were mainly enriched in the metabolic pathways of ornithine，branched-chain amino acid，and aromatic amino acid. After the treatment with Yiqi Yangyin Jiedu Huayu prescription，80 differentially expressed metabolites were detected in the patients with MHE，mainly carbohydrates，organic acids，and amino acids，and there were 56 upregulated metabolites and 24 downregulated metabolites，which were mainly enriched in the metabolic pathways of ornithine，branched-chain amino acid，and aromatic amino acid. Conclusion Yiqi Yangyin Jiedu Huayu prescription can exert a therapeutic effect on patients with MHE by regulating intestinal metabolism.

Key words：Liver Cirrhosis；Hepatic Encephalopathy；Yiqi Yangyin Jiedu Huayu Prescription；Traditional Chinese Medicine Therapy；Metabolomics

Research funding：National Natural Science Foundation of China （82104781）；Research and Cultivation Program of Beijing Municipal Hospital （PZ20241802）；Beijing Hospital Management Center “Peak” talent training program （DFL20191803）；High-level Public Health Technical Personnel Construction Project Training Program （Discipline Leader-02-16）

肝性腦病（HE）是肝硬化失代償期最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，嚴(yán)重HE一旦發(fā)生，則預(yù)后不良，病死率高［1］。輕微型肝性腦?。╩inimal hepatic encephalopathy，MHE）是HE的早期階段，因此，盡早控制MHE是防止嚴(yán)重HE發(fā)生的關(guān)鍵。目前MHE的西醫(yī)治療［2］與HE的治療方法相似，中醫(yī)則主要是以“醒腦通腑開竅”［3］作為理論基礎(chǔ)治療MHE，既往臨床研究證實(shí)了灌腸方對(duì)于MHE患者降低血氨、改善神志方面顯示了良好的療效［4］；也證明了口服益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方可以明顯改善MHE患者的神經(jīng)智能測(cè)試評(píng)分并降低血氨［5］，但是關(guān)于中藥治療MHE的作用機(jī)制研究很少。根據(jù)“腸-肝軸”理論［6］，肝硬化HE與腸道菌群關(guān)系密切，腸道菌群的結(jié)構(gòu)和功能改變、腸屏障受損以及小腸細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)均可以導(dǎo)致血氨及腸道毒素增加，系統(tǒng)性炎癥加重，這些毒素通過(guò)腸肝循環(huán)再次造成肝損傷，肝臟解毒功能下降，更多的血氨及腸道毒素通過(guò)血腦屏障入腦，加重了神經(jīng)炎癥和腦水腫。因此，探討益氣養(yǎng)陰扶正解毒化瘀方對(duì)于腸道代謝的影響，有助于探索中醫(yī)藥治療MHE的作用機(jī)制。本研究擬通過(guò)探索益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方對(duì)于MHE腸道代謝的影響，探討中藥治療MHE的可能作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 本研究選取 2024年 3月—2024年 5月于本院住院且經(jīng)肝性腦病心理測(cè)量評(píng)分（psychometric hepatic encephalopathy score，PHES）診斷為 MHE 的 11 例肝硬化患者（MHE組）作為研究對(duì)象，同時(shí)招募11例健康患者家屬（無(wú)基礎(chǔ)肝病及各種高血壓、糖尿病、冠心病、腸道疾病等且BMI正常）作為對(duì)照組。

1.2 肝硬化MHE診斷標(biāo)準(zhǔn) 參考《肝硬化肝性腦病診療指南》［2］及 2014年美國(guó)肝病學(xué)會(huì)和歐洲肝病學(xué)會(huì)指南［7］，使用PHES測(cè)試作為診斷MHE的金標(biāo)準(zhǔn)：PHES測(cè)試中的數(shù)字連接試驗(yàn)（NCT-A）、數(shù)字符號(hào)試驗(yàn)（DST）同時(shí)陽(yáng)性可診斷MHE［8］。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）結(jié)合生化學(xué)、影像學(xué)及臨床癥狀，除酒精性肝硬化及肝豆?fàn)詈俗冃砸酝獾母斡不颊?；?）經(jīng)PHES測(cè)試診斷為MHE患者；（3）中醫(yī)辨證為氣陰兩虛血瘀證者；（4）BMI 在正常范圍內(nèi)；（5）之前未經(jīng)過(guò)MHE的營(yíng)養(yǎng)治療和藥物治療。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）5年內(nèi)有過(guò)胃腸道大手術(shù)及腸道切除手術(shù)者；（2）炎癥性腸病，腸易激綜合征者；（3）持久性、傳染性胃腸炎，結(jié)腸炎，慢性腹瀉原因不明者；（4）慢性便秘者；（5）胃腸道出血及存在歷史性胃腸道疾病者；（6）近期使用含堿式水楊酸鉍或其他類似藥物成分的藥物者；（7）取樣前1個(gè)月內(nèi)使用過(guò)抗生素者；（8）生理期女性。

1.5 研究方法

1.5.1 試劑 益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方（超純水濃縮至42%；沙參15 g，麥冬15 g，大黃15 g，厚樸15 g，枳實(shí)15 g，赤芍15 g，石菖蒲15 g）（北京康仁堂藥業(yè)有限公司）；高純度鹽酸甲氧胺、脂肪酸甲酯、無(wú)水吡啶、無(wú)水硫酸鈉（美國(guó)圣路易斯公司）；MSTFA（1% TMCS）、甲醇、氯仿、二氯甲烷、己烷、丙酮、乙腈（美國(guó)費(fèi)爾勞恩公司）。

1.5.2 糞便采集方法 分別采集對(duì)照組患者、MHE組患者及其經(jīng)益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療12周后的糞便。盡量在同一時(shí)間采樣（考慮人腸道微生物的節(jié)律性變化），按照以下程序進(jìn)行糞便樣本的采集：（1）排盡尿液；（2）排便；（3）取樣；（4）轉(zhuǎn)運(yùn)和冷藏。

1.5.3 代謝組學(xué)檢測(cè)的樣本制備 采集的糞便樣本標(biāo)記后凍存于?80 ℃的低溫冰箱中，將樣品在冰浴上解凍，取50 mg糞便樣品到1.5 mL離心管中，加入10 μL內(nèi)標(biāo)，輕微混勻，加入175 μL預(yù)冷的甲醇/氯仿（3∶1混合液）進(jìn)行提取。將混合物在14 000×g和4 ℃下離心20 min，并在?20 ℃的冰箱中靜置20 min，將上清液小心地轉(zhuǎn)移至自動(dòng)進(jìn)樣玻璃瓶中。放到真空離心濃縮儀中濃縮5 min以除去氯仿，然后轉(zhuǎn)移入低溫冷凍干燥機(jī)完全凍干。加入50 μL的甲氧胺吡啶溶液，在30 ℃孵育2 h之后，加入50 μL的MSTFA于37.5 ℃孵育1 h。

1.5.4 代謝組學(xué)檢測(cè) 本項(xiàng)目在委托上海麥特繪普公司基于氣相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜（GC-TOF/MS）的非靶向代謝學(xué)的技術(shù)平臺(tái) XploreMET 上檢測(cè)，采用了 Agilent7890B氣相色譜儀，飛行時(shí)間質(zhì)譜系統(tǒng)（美國(guó)力可公司）。

1.5.6 GC-TOF/MS 代謝組學(xué)數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用XploreMET軟件（V3.0，Metabo-Profile，China）對(duì) GC-MS的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，然后用JiaLab代謝物庫(kù)進(jìn)行定性。（1）單變量統(tǒng)計(jì)分析，包括t檢驗(yàn)、Wilcoxon檢驗(yàn)等。（2）多元統(tǒng)計(jì)分析，如主成分分析（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘判別分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）、正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）法等。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用 SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料兩組間比較采用Fisher精確檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以 x ˉ ±s表示，兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)，同組內(nèi)治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P 25 ～P 75 ）表示，兩組間及同組內(nèi)治療前后比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基線特征 如表1所示，對(duì)照組均為患者家屬（生活及飲食習(xí)慣基本相同），與MHE組相比，年齡、性別和BMI 差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 值均gt;0.05）；與對(duì)照組相比，MHE組的NCT-A用時(shí)明顯延長(zhǎng)（Plt;0.05），DST得分明顯減少（Plt;0.05）。MHE組患者病因?yàn)镠BV感染6例，HCV感染2例，自身免疫相關(guān)肝病3例；Child-Pugh分級(jí)為B級(jí)3例和C級(jí)8例；MELD評(píng)分（18.90±5.36）分。

2.2 MHE患者腸道微生物代謝分析

2.2.1 MHE患者腸道微生物代謝分類 MHE組和對(duì)照組腸道代謝物共檢測(cè)出235種。MHE組主要組成有氨基酸類41.79%，脂肪酸類15.70%，碳水化合物類16.24%，有機(jī)胺類8.96%，有機(jī)酸類8.58%，脂類4.00%，其他9.69%。對(duì)照組主要組成有氨基酸類36.64%，脂肪酸類22.72%，碳水化合物類16.88%，有機(jī)胺類8.29%，有機(jī)酸類3.02%，脂類 5.8%，其他 1.57%。Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)結(jié)果顯示，MHE組腸道代謝物中的有機(jī)酸類明顯上升，類苯基丙烷酸類、酚類、維生素類、咪唑類、膽汁酸類明顯下降（P值均lt;0.05）（圖1）。

2.2.2 MHE患者腸道差異性代謝物分析

2.2.2.1 腸道差異性代謝物單維統(tǒng)計(jì)分析 通過(guò)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)來(lái)比較兩組的差異代謝物，基于單維統(tǒng)計(jì)分析篩選出的41種差異代謝物通過(guò)火山圖顯示［閾值設(shè)定：| | log 2 FC gt;0（FC，組間變化倍數(shù)）］，與對(duì)照組相比，MHE組上調(diào)代謝物19種，下調(diào)代謝物22種（P值均lt;0.05）（圖2）。

2.2.2.2 腸道差異性代謝多維統(tǒng)計(jì)分析 基于OPLS-DA模型對(duì)MHE組和對(duì)照組的差異代謝物進(jìn)行多維統(tǒng)計(jì)分析，采用火山圖［閾值設(shè)定：代謝物對(duì)樣本分類的貢獻(xiàn)（variable importance in projection，VIPgt;1）］來(lái)展示篩選的差異性代謝物，總共篩到差異代謝物87種（圖3）。

2.2.2.3 潛在差異性代謝物的篩選 通過(guò)對(duì)腸道差異性代謝單維統(tǒng)計(jì)分析和多維統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果取交集，對(duì)MHE組患者潛在代謝產(chǎn)物進(jìn)行篩選，篩選標(biāo)準(zhǔn)如下：（1）單維分析Plt;0.05，| | log 2 FC gt;0；（2）多維分析VIPgt;1，共篩選了29種潛在的代謝標(biāo)志物。如表2所示，MHE組明顯上調(diào)的代謝物有核糖核酸、乳果糖、乳酸、尿素、檸蘋酸、木糖內(nèi)酯、鳥氨酸、酪胺、甲基丙二酸、異麥芽糖和苯基乙胺、2，3-丁二醇12種；如表3所示，下調(diào)的代謝物有咪唑丙烯酸、甘油酸、酮亮氨酸、2-油酸單甘油酯、肌氨酸、二氯乙酸、核糖、神經(jīng)酸、煙酸、己二酸、亞精胺、3- （3-羥基苯基）-3-羥基丙酸、亞油酸、油酸、α-生育酚、δ-生育醇和γ-生育酚17種，主要為氨基酸類、有機(jī)酸類、有機(jī)胺類、碳水化合物類、脂肪酸類、維生素類。

2.2.2.4 差異性代謝物通路富集分析 對(duì)29種差異代謝物進(jìn)行通路分析，最主要的代謝通路包括：亞精胺和精胺生物合成、尿素循環(huán)、甘氨酸和絲氨酸代謝、D-精氨酸和D-鳥氨酸代謝、蛋氨酸代謝、維生素K代謝、a亞麻酸和亞油酸、精氨酸和脯氨酸代謝、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解、甘油酯代謝、磷酸戊糖通路、氨循環(huán)通路、糖原異生、煙酸和煙酰胺代謝、丙酸代謝、組氨酸代謝、丙酮酸代謝、瓦格納效應(yīng)、膽汁酸生物合成、酪氨酸代謝。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)這些通路主要富集在鳥氨酸循環(huán)、支鏈氨基酸和芳香氨基酸代謝通路中，提示上述通路是MHE患者最重要的代謝通路（圖4）。

2.3 益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方對(duì)MHE患者的影響

2.3.1 益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后肝功能比較 11例MHE 患者經(jīng)益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療后肝功能指標(biāo)（ALT、AST、TBil）、血氨指標(biāo)（NH 3 ）、Child-Pugh 評(píng)分和MELD評(píng)分均較治療前有明顯好轉(zhuǎn)（P值均lt;0.05）。益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前MHE患者的NCT-A用時(shí)較治療后明顯縮短（Plt;0.05），MHE患者的DST得分較治療前明顯增加（Plt;0.05）（表4）。

2.3.2 益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后腸道代謝物組成的比較 MHE患者治療前后共檢測(cè)出164種腸道代謝物，從PCA分析（圖5）及PLS-DA分析（圖6）可見兩組代謝物分離良好，提示兩組治療前后代謝物存在明顯差異。治療前代謝物的主要組成為氨基酸類52.89%，有機(jī)酸類20.8%，碳水化合物類0.88%、有機(jī)胺類14.46%，無(wú)機(jī)氧化類 6.58%，脂肪酸 2.81%，其他 1.9%；治療后代謝物的主要組成為氨基酸類20.48%，有機(jī)酸類 28.09%，碳水化合物類34.17%、有機(jī)胺類3.22%，無(wú)機(jī)氧化類6.11%，醇類5.22%，其他2.71%。Wilcoxon秩和檢驗(yàn)結(jié)果顯示，與治療前相比，治療后MHE患者的醇類、碳水化合物類、內(nèi)酯類、核苷酸類、有機(jī)酸類、酚類、苯丙酸類、吡啶類明顯上升，而有機(jī)胺類、氨基酸類、苯類、脂肪酸類、吲哚類、多肽類、吡咯烷類明顯下降（圖7）。

2.3.3 益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后腸道差異性代謝物分析 通過(guò)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)來(lái)比較兩組的差異代謝物，基于單維統(tǒng)計(jì)分析總共篩選出的126種差異代謝物，通過(guò)火山圖可見，與治療前相比，治療后MHE上調(diào)代謝物 85種，下調(diào)代謝物 41種（閾值設(shè)定：| | log 2 FC gt;0）（圖8）?；贠PLS-DA模型對(duì)MHE患者治療前后的差異代謝物進(jìn)行多維統(tǒng)計(jì)分析，共篩選到差異代謝物81種（圖9）。

2.3.4 益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療的潛在代謝標(biāo)志物篩選 通過(guò)對(duì)益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后腸道差異性代謝物的單維統(tǒng)計(jì)和多維統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果取交集，對(duì)MHE潛在代謝產(chǎn)物進(jìn)行篩選（篩選標(biāo)準(zhǔn)同2.3.4）。共篩選了80種潛在的代謝標(biāo)志物，經(jīng)過(guò)益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療后56種代謝物上調(diào)，而24種代謝物下調(diào)。應(yīng)用熱圖（圖10）對(duì)兩組差異性代謝物進(jìn)行對(duì)比分析顯示碳水化合物類、有機(jī)酸類明顯上升，氨基酸類明顯下降。而散點(diǎn)圖具體展示了經(jīng)益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療后上調(diào)的56種差異性代謝物和24種下調(diào)的差異性代謝物（圖11）。

2.3.5 益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后的差異性代謝物通路分析 對(duì)80種益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后的差異代謝通路進(jìn)行分析，益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方代謝通路主要富集在半乳糖代謝、谷胱甘肽代謝、同型半胱氨酸降解、乳糖降解、甘氨酸和絲氨酸代謝、丙氨酸循環(huán)、甲基組氨酸代謝、尿素循環(huán)、蛋氨酸代謝、丙氨酸代謝、淀粉和蔗糖代謝、谷氨酸代謝、甜菜堿代謝、甘油酯代謝、蘋果酸-天門冬酸穿梭、半胱氨酸代謝、丙酸代謝、海藻糖降解、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解、苯丙氨酸、酪氨酸代謝等通路（圖 12），這些通路主要富集在鳥氨酸代謝、支鏈和芳香氨基酸代謝通路中，與MHE患者特異性代謝通路相似，故益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方很有可能通過(guò)改善鳥氨酸代謝及支鏈氨基酸和芳香氨基酸代謝等途徑達(dá)到治療MHE的作用。

3 討論

HE是發(fā)生在嚴(yán)重肝病基礎(chǔ)上，以代謝紊亂為主要病理基礎(chǔ)的神經(jīng)精神異常綜合征，是肝疾病常見的并發(fā)癥及死亡原因之一［9］，嚴(yán)重影響了肝病患者及監(jiān)護(hù)人的生活質(zhì)量［10］，認(rèn)知功能損害造成的醫(yī)療相關(guān)資源消耗遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了其他肝硬化并發(fā)癥［11］。近些年來(lái)，中醫(yī)藥治療MHE取得了良好的療效［12-14］，然而機(jī)制目前尚不明確，本試驗(yàn)開展了中醫(yī)藥對(duì)于MHE腸道代謝作用的研究，旨在探索中醫(yī)藥治療MHE的可能作用機(jī)制，為更好地發(fā)揮中醫(yī)藥治療MHE的作用奠定理論基礎(chǔ)。

腸道微生態(tài)系統(tǒng)是由腸道菌群和腸道微環(huán)境構(gòu)成的龐大復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)［15］。腸道菌群的結(jié)構(gòu)和功能常常會(huì)受到腸道微環(huán)境等因素的影響，因此本試驗(yàn)在臨床中選取了MHE患者服用中藥前后的糞便樣本進(jìn)行對(duì)比研究。研究發(fā)現(xiàn)，MHE患者的腸道代謝物與正常人相比具有明顯異常。經(jīng)過(guò)單維和多維統(tǒng)計(jì)分析，MHE組和對(duì)照組共篩選出29種潛在的代謝標(biāo)志物，這些差異性代謝物的主要代謝通路富集在鳥氨酸循環(huán)、支鏈氨基酸和芳香氨基酸中。肝臟是鳥氨酸循環(huán)重要的代謝器官，在肝損傷嚴(yán)重引起肝功能明顯下降時(shí)，肝臟無(wú)法正常通過(guò)鳥氨酸循環(huán)進(jìn)行解毒，故導(dǎo)致血氨增高，使星狀膠質(zhì)細(xì)胞合成谷氨酰胺增加，導(dǎo)致細(xì)胞變性、腫脹及退行性變，同時(shí)可直接影響假性神經(jīng)遞質(zhì)，引發(fā)神經(jīng)認(rèn)知功能障礙［16］。肝功能嚴(yán)重受損時(shí)，肝臟代謝芳香氨基酸的能力下降，芳香氨基酸主要包括酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸，增多的苯丙氨酸和酪氨酸生成苯乙醇胺和羥苯乙醇胺即假性遞質(zhì)，也是導(dǎo)致HE發(fā)生的機(jī)制之一。支鏈氨基酸包括亮氨酸、纈氨酸和異亮氨酸，是人體必需的氨基酸，這幾種氨基酸可以通過(guò)血流進(jìn)入大腦，降低大腦5-羥色胺的產(chǎn)生，支鏈氨基酸支持大腦合成谷氨酰胺，促進(jìn)氨的解毒代謝，而且還可以減少過(guò)多的芳香族氨基酸進(jìn)入大腦［17-18］。通過(guò)對(duì)益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方治療前后的腸道代謝物通路分析，發(fā)現(xiàn)MHE患者治療前后差異性代謝物通路與MHE患者特異性代謝通路在鳥氨酸、支鏈氨基酸、芳香氨基酸代謝方面有交集，說(shuō)明益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方有可能是通過(guò)鳥氨酸、支鏈氨基酸和芳香氨基酸代謝通路發(fā)揮了改善MHE的作用。

MHE由于起病隱匿，臨床中往往不易發(fā)現(xiàn)，然而一旦進(jìn)展為顯性HE，則預(yù)后不良，因此早期診斷、早期治療MHE至關(guān)重要。中醫(yī)藥在MHE的治療中發(fā)揮了良好的作用，腸道微生態(tài)與MHE有著密不可分的聯(lián)系，通過(guò)探索腸道代謝物的變化有助于探討中醫(yī)藥治療MHE的作用機(jī)制，更好地發(fā)揮中醫(yī)藥治療MHE的作用。本研究首次通過(guò)人群隊(duì)列驗(yàn)證了益氣養(yǎng)陰解毒化瘀方可能通過(guò)調(diào)節(jié)MHE患者的相關(guān)代謝發(fā)揮了治療作用，但是研究仍然具有一定的局限性，代謝組學(xué)研究在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)固定的樣本量計(jì)算公式，本研究屬于小規(guī)模的探索性研究，實(shí)驗(yàn)樣本量仍然較少，目前基于樣本量限制，無(wú)法進(jìn)一步針對(duì)病因進(jìn)行分層分析，腸道菌群仍可能受到食物、藥物及環(huán)境等多種因素的影響，MHE的腸道機(jī)制仍需要開展大規(guī)模的臨床試驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探索診斷及治療MHE的腸道生物標(biāo)記，為早期診斷及治療MHE提供思路。

倫理學(xué)聲明：本研究方案于2024年3月7日經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，批號(hào)：京地倫科字（2024）第（015）-01號(hào)，所有入組患者及家屬均簽署知情同意書。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：姜婷婷、張群、江宇泳、王憲波負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，資料分析，撰寫論文；于浩、劉曉利參與收集數(shù)據(jù)，修改論文；楊志云負(fù)責(zé)擬定寫作思路，指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。

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收稿日期：2024-07-08；錄用日期：2024-08-12

本文編輯：王瑩

引證本文：JIANG TT， ZHANG Q， WANG XB， et al. Effect of Yiqi Yangyin Jiedu Huayu prescription on intestinal metabolites in liver cirrhosis with minimal hepatic encephalopathy： A study based on metabolomics[J]. J Clin Hepatol， 2025， 41（3）：469-477.

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