摘　要：目的：觀察抗血栓藥材有效部位的活血化瘀作用。方法：采用小鼠腦偏癱、血小板聚集、纖溶法、玻璃毛細(xì)管法、高脂血癥模型等實驗方法，測定藥物對小鼠腦血栓的保護率，血小板聚集抑制率、纖溶率、凝血時間及血脂水平的影響。結(jié)果：甜茶藤、榕樹須、黃杞葉、首烏藤等有效部位抗血栓效果較好；榕樹須、黃杞葉和甜茶藤有一定的抗血小板聚集作用；全部水洗脫物在一定劑量范圍內(nèi)對大鼠血漿纖維蛋白均具有一定的纖溶作用；榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等能明顯延長凝血時間，并能明顯降低TC和TG水平。揭示榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等具有較好的抗離血栓、抗血小板聚集、抗凝血和降脂作用。結(jié)論：為進一步分離有效成分提供了科學(xué)依據(jù)。
　　關(guān)鍵詞：抗血栓藥材；有效部位；篩選實驗
　　中圖分類號：R965．1　文獻標(biāo)識碼：A
　　文章編號：1007—2349(2007)02—0034－02
　　廣西許多特色中草藥在民間應(yīng)用證實具有活血化瘀作-用，對血栓性疾病有良好的治療效果。在我們前期篩選研究中，已觀察到柿子葉、兩面針、黃杞葉等水提物和醇提物具有抗腦血栓、降低血粘度、抑制血小板聚集等作用[1～2]。我們對初篩有效的提取物經(jīng)大孔樹脂做了進一步的分離提取，得到了許多不同的有效部位，繼續(xù)進行抗血栓、抗凝、溶纖和降血脂等篩選試驗。現(xiàn)將實驗結(jié)果報告如下。
　　
　　1 實驗材料
　　
　　1．1 藥物　黃皮葉(Clausena lansium)、黃杞葉(Engelhardtiaroxburghiana Wall．)、榕樹須(Ficus microcarpa L)、甜茶藤(Ampelopsis grossedentata)、大果山楂葉(Crataegusscabrifolia)、首烏藤(Polygonum multiflorum Thunb．)、兩面針(Zanthoxylum mitidum)等藥材水提物經(jīng)過大孔樹脂過濾，水洗脫得有效部位，由廣西中醫(yī)藥研究所化學(xué)室提供。阿司匹林腸溶片，湖南南亞大制藥有限公司生產(chǎn)，批號：20060124。鹽酸腎上腺素注射液，廣州明興制藥廠產(chǎn)品，批號MBS001。復(fù)方丹參注射液，江蘇康恬制藥有限公司生產(chǎn)，批號：060105。洛伐他汀膠囊為揚子江藥業(yè)集團有限公司產(chǎn)品。復(fù)方丹參片，天津天士力制藥股份有限公司．批號：2006304。
　　1．2試劑　膠原蛋白為Worthington biochemical corporation產(chǎn)品：腺苷——二磷酸鈉鹽(ADP)，中國醫(yī)藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司，批號：20040510。含鈣凝血酶干粉，上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號：20060510。血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)檢測試劑盒均為四川省麥克科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品。
　　1．3動物 昆明種小鼠，體重18～22g；Wistar大鼠，體重200～250g，雌雄各半，均為清潔級動物，由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號：SCXK桂2003～0003。
　　1.4儀器　BS631型血小板聚集儀，北京生化儀器廠生產(chǎn)。722型光柵分光光度計，上海分析儀器三廠產(chǎn)品。電熱恒溫水浴箱，上海醫(yī)療器械七廠生產(chǎn)。
　　
　　2方法與結(jié)果
　　
　　2．1抗腦血栓實驗[3]。取小鼠100只，隨機分為生理鹽水組、陽性藥阿司匹林(80mg／kg)組和各藥材水洗脫物組，每組10只。各藥物組每天灌胃給藥1次，生理鹽水組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)5d。于末次給藥后1h，小鼠尾靜脈注射膠原蛋白及腎上腺素聯(lián)合誘導(dǎo)劑(膠)原蛋白90ug／只，腎上腺素9ug／只)。注射后觀察15min內(nèi)小鼠偏癱的未恢復(fù)數(shù)，計算藥材對小鼠腦血栓的保護率。結(jié)果見表1。
　　
　　結(jié)果表明：甜茶藤、榕樹須、黃杞葉、首烏藤等抗血栓效果較好，其次是黃皮葉、山楂葉、兩面針。提示這些有效部位具有一定的抗小鼠腦血栓作用。
　　2．2對體外ADP誘導(dǎo)大鼠血小板聚集的影響[4]　取體重200～250g大鼠，用3％戊巴比妥鈉0．1ml／100g體重腹腔注射麻醉后，剖開腹腔，從腹主動脈取血，注入盛有3．8％枸櫞酸鈉溶液試管中，輕輕搖勻，以100r／min離心5min，吸取上清液為富血小板血漿(PRP)，剩余血繼續(xù)以3000r／min離心10min，吸取上清液為貧血小板血漿(PPP)。將BS631型血小板聚集儀打開，預(yù)熱30min后，用PRP調(diào)零(0％)，用PPP調(diào)幅度(100％)。測定時對照管取PRP0．4ml及生理鹽水20ul，給藥管取0．4mlPRP及藥液20ul(大劑量)、10ul(小劑量)放入比濁管中，在37℃恒溫及1300r／min攪拌條件下加入ADP50ul(50ug／ml)，用自動平衡儀以20mm／min紙速記錄對照管和給藥管血小板聚集曲線，根據(jù)所記錄的曲線計算血小板聚集百分?jǐn)?shù)(％)。結(jié)果見表2。
　　
　　結(jié)果表明：榕樹須、黃杞葉和甜茶藤具有一定的抗血小板聚集作用，其他藥材洗脫物無明顯影響。
　　2．3藥物對體外大鼠血漿纖維蛋白溶解的影響　采用200～300g大鼠，用3％戊巴比妥鈉0．1ml／100g體重腹腔注射麻醉后，剖開腹腔，從腹主動脈取血10ml(血液與0．1mol／L草酸鈉之比為9：1)，輕輕搖勻，以1500r／min離心10min，吸取上清液為大鼠草酸鈉血漿，取試管吸取大鼠草酸鈉血漿0．1ml，再加入含鈣凝血酶液0．1ml立即搖勻，待血漿凝塊形成后，加入稀釋好的藥液0．2ml于血漿凝塊上，每個樣品做5個濃度(對倍稀釋)，每個濃度做兩個重復(fù)管，置37℃恒溫24h，檢查血漿凝塊溶解變化情況。結(jié)果見表3。
　　
　　結(jié)果表明：全部水洗脫物在一定劑量范圍內(nèi)對大鼠血漿纖維蛋白均具有一定的纖溶作用。
　　2．4對小鼠凝血時間的影響[5] 取小鼠i00只，隨機分為對照組，陽性藥復(fù)方丹參片組，各藥材水洗脫物組，每組10只。連續(xù)灌胃給藥7d，末次給藥后40min，用內(nèi)徑為1mm的玻璃毛細(xì)管插入小鼠眼眶靜脈叢中取血，至毛細(xì)玻璃管血柱5cm為止，每隔30s折斷毛細(xì)玻璃管一小段，同時用肉眼觀察血柱是否移動，檢查有無凝血絲出現(xiàn)，以毛細(xì)管采血到凝血絲出現(xiàn)的時間為凝血時間，并進行組間T檢驗。結(jié)果見表4。
　　
　　與空白對照組比較:P<0.05
　　結(jié)果表明，榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等能明顯延長凝血時間，具有一定的抗凝作用。
　　2．5對高脂血癥小鼠血脂的影響[6]動物高脂血癥模型制備：取1～2日新鮮雞蛋，去除蛋清，加生理鹽水?dāng)嚢杈鶆蚺涑?5％蛋黃乳液，于末次用藥后2h，除對照組外，每鼠腹腔注射0．5ml蛋黃乳液。
　　取小鼠110只，隨機分為空白對照組，高脂模型組，陽性藥洛伐他汀組，以及各藥材水洗脫物組，每組10只。給藥組每天灌胃給藥1次，對照組和模型組給予等體積的蒸餾水，連續(xù)10d。于末次給藥后2h，除對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射75％蛋黃乳液0．5ml／只，造成實驗性高血脂癥。腹腔注射蛋黃乳液后禁食18～20h，摘除眼球取血，分離血清，按試劑盒方法檢測血清TC、TG的含量。結(jié)果見表5。
　　
　　結(jié)果表明：榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等能明顯降低TC和TG水平，具有一定的降脂作用。
　　
　　3小結(jié)與討論
　　
　　實驗研究表明，榕樹須、黃杞葉、甜茶藤等7種藥材水洗脫物在5種動物模型中，甜茶藤、榕樹須、黃杞葉、首烏藤等抗血栓效果較好，其次是黃皮葉、山楂葉、兩面針、榕樹須、黃杞葉和甜茶藤具有一定的抗血小板聚集作用；全部水洗脫物在一定劑量范圍內(nèi)對大鼠血漿纖維蛋白均具有一定的纖溶作用；榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等能明顯延長凝血時間，并能明顯降低高脂血癥小鼠TC和TG水平。綜上所述，榕樹須、山楂葉、黃杞葉、甜茶藤等具有較好的抗腦血栓、抗血小板聚集、抗凝血和降脂作用，為進一步分離提取有效成分提供了科學(xué)依據(jù)。
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