曹學仁　趙文娟　周益林　段霞瑜　張　瑩　丁克堅

摘要采用拌種離體葉段法測定了我國9個省(市)的112個小麥白粉菌株對三唑酮的抗性。結(jié)果表明，供試菌株的平均EC2007年我為57.25mg/L，平均抗性水平為27.39倍，其中86.61％供試菌株已經(jīng)產(chǎn)生抗性，抗藥性比敏感菌株高出10～40倍的菌株占47.32％，四川、山東、甘肅和貴州等地菌株的抗性高于其他地區(qū)。此結(jié)果可為三唑類殺菌劑在我國的推廣應(yīng)用和制定合理的抗藥性治理措施提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞小麥白粉菌；三唑酮；抗藥性

中圖分類號S 435.121.46，S 481.4

由布氏白粉菌(Blumeria graminis f.sp.triti-ci)引起的小麥白粉病是威脅小麥生產(chǎn)的主要病害之一。一直以來，種植抗病品種和使用殺菌劑是防治該病害的兩個主要措施。然而，雖然目前已經(jīng)命名的抗白粉病基因有33個，但是我國真正引入到實際生產(chǎn)中的抗白粉病基因卻只是其中的少數(shù)幾個(Pm2、Pm4、Pm6、Pm8和Pm21等)，且有部分基因已喪失抗性如Pm8。因此，在當今乃至今后一個時期內(nèi)應(yīng)用化學農(nóng)藥依然是防治小麥白粉病的主要措施。生產(chǎn)上用于防治小麥白粉病的藥劑主要是甾醇生物合成抑制劑，而且90％以上是脫甲基抑制劑的三唑類。由于白粉菌變異快、產(chǎn)孢量大、傳播迅速、生活周期短，加上三唑類殺菌劑較長的持效期為病菌提供選擇機會，因此長期、大面積、單一使用能夠增大藥劑對病菌的選擇壓力，產(chǎn)生抗藥性。早在20世紀90年代初，山東沿海地區(qū)的小麥白粉菌株對三唑酮的抗性水平達4～7倍。近年來的研究結(jié)果表明：小麥白粉菌對三唑酮的敏感性下降，病菌的抗性頻率逐年增加。因此，對小麥白粉菌的抗性情況進行及時監(jiān)測，明確其抗性水平、分布及變化動態(tài)，能夠為農(nóng)藥的合理使用和控制抗藥性的進一步發(fā)展提供理論依據(jù)。本研究采用拌種離體葉段法對2007年我國部分主要麥區(qū)小麥白粉菌的群體抗藥性進行了測定。

1材料和方法

1.1供試材料

供試藥劑：20％的三唑酮乳油為97％的三唑酮原藥配制而成，由中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所農(nóng)藥使用組提供。供試小麥品種為京雙16。供試菌株于2007年采自我國部分小麥主要產(chǎn)區(qū)的9個省市：北京、湖北、四川、河南、河北、甘肅、貴州、陜西和山東。

1.2試驗方法

首先對采自9省市的小麥白粉病菌標樣進行純化，共獲得112個單孢堆分離物，將純化好的菌株接種于健康盆栽幼苗上，待長到可見侵染點時剪成葉段，轉(zhuǎn)移至水瓊脂培養(yǎng)基(含苯并咪唑60mg/L)上，然后在(17±1)℃的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至充分發(fā)病，收集白粉菌的分生孢子粉用于接種。

采用藥劑拌種的方法進行抗藥性測定，拌種用的藥劑濃度分別為0、12.5、25、50、100、200mg/L和400mg/L。按確定的藥劑處理濃度，每10g小麥種子拌藥1mL。充分搖勻后晾干，播于花盆中，罩上玻璃罩隔離培養(yǎng)，待一心一葉時，在超凈臺上從小麥苗的第1片葉上剪取長度為3cm的葉段，按拌種濃度高低順序排列于含苯并咪唑60mg/L的培養(yǎng)基上。然后將收集到的病菌孢子粉在沉降塔內(nèi)進行接種，接種后把培養(yǎng)皿放入(17±1)℃的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每個菌株重復(fù)4次。

1.3調(diào)查記錄

接種后第8天，用5～10倍放大鏡觀察葉段上的侵染點，記錄不同藥劑濃度處理葉段上的侵染點數(shù)，作為統(tǒng)計分析的原始數(shù)據(jù)。

1.4數(shù)據(jù)分析

抑制中濃度(EC₅₀)的計算：根據(jù)公式(1-處理每葉段平均侵染點數(shù)/對照每葉段平均侵染點數(shù))×100％，算出各處理的抑制百分率，利用“幾率與死亡百分率”表，將抑制百分率換算成幾率值(y)，用各處理濃度的對數(shù)(z)和幾率值(y)做回歸分析，得出回歸方程y=ax+b，y=5時的x反對數(shù)值即為有效抑制中濃度EC₅₀。

抗性水平一供試菌株EC₅₀/敏感菌株EC₆₀，由于在自然界中很難采集到未用藥前的敏感對照菌株，所以本文將2000年所測菌株中最敏感菌株的EC₅₀(2.09mg/L)作為敏感基線。當菌株的抗性水平達到5倍，則表明有抗性產(chǎn)生，抗性水平大于5倍的菌株在整個群體中所占的比例即為病菌的抗性頻率。

2結(jié)果與分析

測定了我國9個省(市)112個白粉菌株對三唑酮的敏感性，結(jié)果見表1。從中可以看出，112個小麥白粉菌株的平均EC₅₀為57.25 mg/L，平均抗性水平則達到了27.39倍，表明當前我國小麥白粉菌的抗性水平較高。不同地區(qū)的菌株對三唑酮的敏感程度存在差異，其中湖北、河南等地的白粉菌的敏感性高，平均EC₅₀均低于30mg/L，兩地平均抗性水平也都低于15倍；其次為陜西、河北和貴州、北京，四川、甘肅及山東的敏感性最低，平均EC₅₀分別高達72.05、75.8mg/L和116.86mg/L。同時，同一個地區(qū)的不同菌株之間的敏感性也存在很大差異，以北京為例，EC₅₀的最低值是7.14mg/L，而最大值則高達405.48mg/L。

根據(jù)公式計算抗性水平結(jié)果見表2，結(jié)果表明，86.61％的供試菌株已經(jīng)對三唑酮產(chǎn)生抗性，其中抗性水平最高的菌株來自于山東，達到了204.28倍。我國湖北和河南小麥白粉菌的抗性水平相對較低，抗性水平小于10倍的菌株頻率大于60％，且兩地都沒有發(fā)現(xiàn)抗性水平大于40倍的菌株。而四川、山東、甘肅和貴州等地70％以上菌株的抗性水平大于10倍，抗性頻率也都在80％以上，其中山東和貴州兩地的抗性頻率達100％。從抗性水平的頻率分布也可以看出(圖1)，約50％菌株對三唑酮的抗性水平在10～40倍之間，抗性水平大于40倍的菌株也接近15％，這表明大部分菌株對三唑酮的抗性較高。

3結(jié)論與討論

一直以來，由德國Bayer公司于20世紀70年代初研制的三唑酮是國內(nèi)外防治小麥白粉病的一種主要藥劑。早在20世紀80年代初，國外就有小麥白粉菌對其產(chǎn)生抗藥性的報道，荷蘭1982年就發(fā)現(xiàn)使用三唑酮地區(qū)的小麥白粉菌株對三唑酮的敏感性降低，此時三唑類殺菌劑在荷蘭僅使用了4年；Miroslav等人研究表明1993年捷克小麥白粉菌對三唑酮的平均抗性水平達29倍，斯洛伐克和匈牙利東部地區(qū)小麥白粉菌群體對三唑酮的抗性水平也比較高。我國于20世紀90年代初在山東發(fā)現(xiàn)了抗藥性菌株，并且抗藥性有逐漸加強的趨勢。本實驗室從1995年起就開展了小麥白粉菌對三唑酮的抗藥性監(jiān)測工作。2007年我國部分麥區(qū)的小麥白粉菌對三唑酮的抗性監(jiān)測結(jié)果表明，在分離出的112個菌株中，已經(jīng)產(chǎn)生抗性的菌株所占比例為86.61％，平均抗性水平達27.39倍。從整體抗性水平頻率分布來看，供試菌株中表現(xiàn)中抗所占比例最高，這與2002年和2004年對病菌群體抗藥性監(jiān)測的結(jié)果比較相近，3年抗性水平大于10倍的菌株占供試菌株的61％～87％。2002年病菌抗藥性監(jiān)測結(jié)果表明，山東、四川兩地的抗性較高，平均抗性水平均超過40倍；2004年監(jiān)測的結(jié)果也表明四川、甘肅和山東的抗性較高，2007年則以四川、山東、甘肅和貴州等地菌株對三唑酮的抗性較高，因此四川、山東和甘肅三地小麥白粉菌對三唑酮的抗性一直維持在較高水平，這可能與這些地區(qū)小麥白粉病發(fā)病較重、用藥多有關(guān)。2007年病菌群體抗藥性監(jiān)測的結(jié)果與2001年相比，盡管抗性水平有所增加，但兩年度湖北、河南的抗性水平均相對較低，表明這兩地仍是我國麥區(qū)抗性較低的地區(qū)。從我國部分麥區(qū)自1996年病菌群體平均抗藥性水平的變化情況(表3)可以看出，年度之間小麥白粉菌的平均抗性水平變化較大，有的年份高，如1996、1997、1998、1999、2002和2004年，平均抗性水平均超過30倍；有的年份相對較低，2001年僅達16.08倍，但也達到中抗水平。同時，不同地區(qū)的抗性變化也存在差異，有些地區(qū)如北京抗性有上升趨勢，有些地區(qū)如河北則表現(xiàn)出下降趨勢。但是整體來說，小麥白粉菌對三唑酮的抗性一直維持在一個較高的水平。

當前在我國由于三唑酮仍然是防治小麥白粉病的主要藥劑，因此對其抗藥性進行動態(tài)監(jiān)測是非常必要的。在監(jiān)測數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，應(yīng)注意在生產(chǎn)中科學使用三唑類藥劑，避免長期單一使用，建議三唑酮與其他藥劑混用或交替使用。同時，應(yīng)加快開發(fā)作用機理不同的其他藥劑，以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生和迅速上升。