何永恒　劉　麗

摘 要：目的：評(píng)價(jià)花椒微米粉末、防風(fēng)微米粉末對(duì)肛腸病術(shù)后疼痛的鎮(zhèn)痛效果及安全性，并對(duì)其鎮(zhèn)痛作用機(jī)理進(jìn)行初探。方法：分別采用小鼠熱板法及小鼠醋酸扭體法實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察實(shí)驗(yàn)藥物的整體鎮(zhèn)痛效果；建立小鼠肛腸病術(shù)后疼痛模型，采取酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定該模型小鼠血清中前列腺素E2（PGE2）和β-內(nèi)啡肽（β-EP）水平，初探微米粉末的鎮(zhèn)痛機(jī)制；以急性皮膚粘膜刺激實(shí)驗(yàn)觀察藥物外用的毒性與不良反應(yīng)。結(jié)果與結(jié)論：先秦及秦漢時(shí)期原創(chuàng)性單味中藥微米粉末—花椒微米粉末及防風(fēng)微米粉末對(duì)肛腸病術(shù)后鎮(zhèn)痛是安全有效的，其鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與降低血清中PGE2含量，提高β-EP含量有關(guān)。

關(guān)鍵詞：先秦；秦漢；原創(chuàng)性；單味；鎮(zhèn)痛；微米粉末；肛腸病術(shù)后；實(shí)驗(yàn)研究

中圖分類(lèi)號(hào)：R243.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）02-0029-03

清?孫星衍《神農(nóng)本草經(jīng)?卷三?下經(jīng)?蜀椒》：“蜀菽，味辛，溫，主……痹痛……”。清?孫星衍《神農(nóng)本草經(jīng)?卷一?上經(jīng)?防風(fēng)》：“防風(fēng)，味苦，溫，無(wú)毒，主大……疼痹（《御覽》作痛）……”。

1 材料與方法

（1）清潔級(jí)昆明種小白鼠，雌雄不限，體重為18~22g(由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，動(dòng)物合格證：scxk（湘）2004-0005。

（2）實(shí)驗(yàn)器材包括三用恒溫水箱（浙江省余姚市檢測(cè)儀表廠生產(chǎn)，浙制02810175），高速離心機(jī)（長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司生產(chǎn)，TG16-Ⅱ），AO-820組織切片機(jī)（美國(guó)生產(chǎn)，湖南中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室提供），400倍奧林巴斯光學(xué)顯微鏡（日本生產(chǎn)，湖南中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室提供），Thermo multiskanink3酶標(biāo)儀（美國(guó)熱電-芬蘭雷勃酶標(biāo)儀MK3）。

（3）實(shí)驗(yàn)藥物包括花椒微米粉末（D50=16.89μm，D90=57.94μm），防風(fēng)微米粉末（D50=7.71μm，D90=32.79μm），由湖南中醫(yī)藥大學(xué)教育部工程技術(shù)研究中心提供。

（4）實(shí)驗(yàn)試劑包括阿司匹林原料藥（山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H37020354，批號(hào)：07200），鹽酸曲馬多原料藥（中國(guó)科學(xué)院分裝，標(biāo)準(zhǔn)：EP 5.0，批號(hào)：070227），PGE2 ELISA試劑盒 （上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司進(jìn)口分裝，批號(hào)：0711111），β-內(nèi)啡肽 ELISA試劑盒（BPB Biomedicals，Inc.USA，湖南晶科生物試劑有限公司原裝進(jìn)口，批號(hào)：70621S），冰醋酸溶液（上海試劑一廠生產(chǎn)，批號(hào)：AR500mL 050906），分析純，臨用時(shí)以蒸餾水配成0.6％濃度。

（5）實(shí)驗(yàn)用藥計(jì)算參照《中華人民共和國(guó)藥典》（2005版），花椒臨床常用量為5g，防風(fēng)臨床常用量為10g，所有實(shí)驗(yàn)藥物劑量均以其臨床常用量為基準(zhǔn)，參照文獻(xiàn)［1］方法計(jì)算。

（6）小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)：按文獻(xiàn)［1］方法取合格小鼠（雌性）180只，隨機(jī)分為空白組、花椒低劑量組、花椒中劑量組、花椒高劑量組、防風(fēng)低劑量組、防風(fēng)中劑量組、防風(fēng)高劑量組、阿司匹林組、鹽酸曲馬多組，觀測(cè)指標(biāo)及給藥方法同文獻(xiàn)［2］所述。各組用藥量：空白組：生理鹽水（1mL/只）；花椒低劑量組：0.015g/只；花椒中劑量組：0.03g/只；花椒高劑量組：0.06g/只；防風(fēng)低劑量組：0.03g/只；防風(fēng)中劑量組：0.06g/只；防風(fēng)高劑量組 0.12g/只；阿司匹林組：0.0016g/只；鹽酸曲馬多組：0.0002g/只。

（7）小鼠扭體法實(shí)驗(yàn)：按文獻(xiàn)［1］方法將小鼠162只隨機(jī)分為9組，各組分組及用藥量同小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)，主要觀察指標(biāo)為扭體次數(shù)、扭體抑制率，給藥方法同文獻(xiàn)［1］所述。

（8）肛腸病術(shù)后疼痛模型實(shí)驗(yàn)：參考Milligan-Morgan痔手術(shù)操作方法［4］ 造模，在尾底近端皮膚與粘膜交界處，作尖端向外的倒V字形切口，保持創(chuàng)面約0.5cm×0.5cm大小。隨機(jī)選取90只造模成功小鼠，分為模型對(duì)照組、花椒高劑量組、防風(fēng)高劑量組、阿司匹林組、鹽酸曲馬多組與未造模的正常對(duì)照組，共6組，分別給藥如下：正常對(duì)照組：適量面粉；模型對(duì)照組：適量面粉；花椒高劑量組：0.06g/只；防風(fēng)高劑量組：0.12g/只；阿司匹林組：0.0016g/只；鹽酸曲馬多組：0.0002g/只。給藥方式均為用無(wú)菌棉簽粘取各藥粉均勻涂于創(chuàng)面，以紗布覆蓋，膠布固定，連續(xù)給藥3天，每天兩次。

（9）小鼠血清中PGE2和β-EP測(cè)定：分別采集肛腸病術(shù)后疼痛模型實(shí)驗(yàn)中各組小鼠眼眶靜脈血，分離血清，測(cè)定PGE2和β-EP值（采用ELISA法）。

（10）急性皮膚粘膜刺激性實(shí)驗(yàn)：按文獻(xiàn)［3］方法將昆明種小鼠64只隨機(jī)分為花椒高劑量組（0.06g/只）、防風(fēng)高劑量組（0.12g/只）。每組中隨機(jī)選取一半小鼠保持皮膚完好不受損傷，另外一半小鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)用75%酒精消毒皮膚，無(wú)菌16號(hào)針頭將完好皮膚劃#號(hào)，滲血為度，用藥方法及觀察方法同文獻(xiàn)［5］所述。

（11）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：計(jì)量資料以±S表示，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 小鼠熱板法

從表1可知，花椒、防風(fēng)各組與空白組比較，痛閾提高率有明顯差異（P<0.05），且花椒在痛閾提高率上具有量效關(guān)系；花椒高劑量組與鹽酸曲馬多組比較，痛閾提高率無(wú)明顯差異（P＞0.05）；防風(fēng)中劑量組與阿司匹林組比較，痛閾提高率有明顯差別（P<0.05）。br>

2.2 小鼠扭體法

從表2可知，花椒、防風(fēng)各組與空白組比較，抑制率有明顯差異（P<0.05）；花椒高劑量組與鹽酸曲馬多組比較，抑制率無(wú)明顯差異（P＞0.05）；防風(fēng)高劑量組與阿司匹林比較，抑制率無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

2.3 肛腸病術(shù)后疼痛模型實(shí)驗(yàn)

從表3可知，花椒、防風(fēng)與正常對(duì)照組比較，PGE₂和β-EP（OD值）有明顯差異（P<0.05）；花椒組與阿司匹林組比較，PGE₂和β-EP（OD值）有明顯差異（P<0.05），與鹽酸曲馬多組比較，PGE₂和β-EP（OD值）無(wú)差異（P＞0.05）；防風(fēng)組與阿司匹林組比較，PGE₂和β-EP（OD值）無(wú)差異（P＞0.05）。

2.4 急性皮膚粘膜刺激性實(shí)驗(yàn)

由表4、表5可知，用藥前后小鼠體重相當(dāng)，前后比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），肉眼觀察小鼠皮膚毛發(fā)、眼、粘膜、呼吸狀況、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等動(dòng)物的全身情況均未見(jiàn)中毒表現(xiàn)，可認(rèn)為花椒微米粉末與防風(fēng)微米粉末用于皮膚粘膜外用是安全的。

3 討論

花椒在臨床上多入煎劑使用，但也有通過(guò)粘膜吸收的報(bào)道，歷史上就有通過(guò)口腔粘膜及牙周組織吸收治療牙痛的記載。現(xiàn)代研究有通過(guò)鼻粘膜吸收花椒粉末，治療變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的報(bào)道［4］，治療時(shí)直接經(jīng)鼻孔吸入少許藥粉或用消毒棉簽蘸取藥粉少許供鼻孔吸入，收到明顯效果。臨床還有通過(guò)皮膚、粘膜，甚至組織潰瘍面吸收的報(bào)道，如李真、周書(shū)平［5］等用花椒、食鹽水熏洗坐浴治療肛管疾患術(shù)后，其研究認(rèn)為，花椒、食鹽熏蒸，能使局部血管擴(kuò)張而減輕充血，麻木感覺(jué)神經(jīng)而減輕疼痛，取得了良好的臨床效果；周正山［6］用花椒水浸泡治療下肢靜脈曲張潰瘍56例，其中輕度者10天治愈，中度一般7天好轉(zhuǎn)，重度10天好轉(zhuǎn)，有效率100％。以上報(bào)道均與本次實(shí)驗(yàn)在用藥方式上有類(lèi)似之處，為本次實(shí)驗(yàn)提供了有力的證據(jù)。

臧林泉等［7］試驗(yàn)分析證實(shí)，花椒種籽油由棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸及在該種籽油中未見(jiàn)報(bào)道的十七碳烯酸組成，主要成分油酸、亞油酸、亞麻酸，混合含量高達(dá)57.549%~87.907%。王軍、梁穎［8］等研究表明α-亞麻酸能顯著抑制大鼠PGE₂的產(chǎn)生，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用；本次實(shí)驗(yàn)研究表明，花椒能明顯提高小鼠血清中β-EP的含量，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。

花椒的主要鎮(zhèn)痛成分有花椒酰胺［9］、香豆素類(lèi)單體化合物香柑內(nèi)酯［10］、hydroxy-α-，β-，γ-sanshool、hydroxy α- sanshool、hydroxy-γ-sanshool［11］，其主要鎮(zhèn)痛機(jī)制與中樞去甲腎上腺素能α-受體有關(guān)。王東吉［12］等為了探討花椒的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制，應(yīng)用電生理學(xué)方法觀察了不同濃度的花椒浸液對(duì)蟾蜍離體神經(jīng)干C類(lèi)纖維動(dòng)作電位幅度和傳導(dǎo)速度的影響，結(jié)果表明不同濃度的花椒浸液對(duì)蟾蜍離體神經(jīng)干C類(lèi)纖維動(dòng)作電位幅度和傳導(dǎo)速度均有明顯的抑制作用，且隨著花椒浸液濃度的增高，動(dòng)作電位消失增快，兩者之間呈顯著負(fù)相關(guān)。

防風(fēng)的主要鎮(zhèn)痛成分有色酮類(lèi)、香豆素、聚乙炔和1-甘油酯類(lèi)化合物，divarieatol(8)和(3s)-hydroxydeltoin(12)等，作用最強(qiáng)的是色酮類(lèi)，其鎮(zhèn)痛機(jī)理包括抗炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用和對(duì)肝臟代謝酶的抑制作用(延長(zhǎng)戊巴比妥誘導(dǎo)的催眠反應(yīng))等［13］。升麻甙(prim-o-glucosylcimifugin)和5-O-甲基維斯阿米醇甙(4，-o-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol)是從防風(fēng)中提取的2種色原酮甙類(lèi)成分，兩者的作用與強(qiáng)痛定50mg.kg-1組相似。

應(yīng)用小鼠甩尾法(溫浴法)研究結(jié)果表明，升麻甙50mg.kg-1和100mg?kg-1及52O2甲基維斯阿米醇甙25mg?kg-1給小鼠肌肉注射，均有明顯的鎮(zhèn)痛作用?？诜里L(fēng)水煎液40g/kg-1，亦可降低由醋酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，升高用熱板法測(cè)定的痛閾［14］。因此，防風(fēng)有非常明確的鎮(zhèn)痛作用。

防風(fēng)揮發(fā)油對(duì)多種炎癥有顯著的抑制作用，并能減少炎癥介質(zhì)PGE₂的含量；防風(fēng)在多個(gè)復(fù)方中能提高β-EP的含量，在本次實(shí)驗(yàn)研究中亦表明有此作用。

總之，本次實(shí)驗(yàn)研究證明，花椒、防風(fēng)微米粉末確有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且花椒的鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于防風(fēng)。

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（責(zé)任編輯：陳涌濤）