李治瀅　陳有為　楊麗源　李紹蘭　吳少華　

摘要從藥用植物烏頭的側(cè)根、莖、葉、花中分離獲得內(nèi)生真菌164株，將其中的151株根據(jù)顯微形態(tài)觀察進行分類鑒定，它們歸屬于6個目、9個科、23個屬，其中毛霉屬、黑孢屬、頭孢霉屬、芽枝霉屬和交鏈孢屬為該植物內(nèi)生真菌的優(yōu)勢屬，表明藥用植物烏頭不同部位內(nèi)生真菌在種群、數(shù)量及分布上具有多樣性特征，在側(cè)根上分布得最多。

關(guān)鍵詞烏頭；內(nèi)生真菌；分離；分類鑒定 ；多樣性

中圖分類號R282.5文獻標識碼A文章編號 1007-5739（2009）07-0007-02

烏頭（Aconitum Carmichaeli Debx．）為毛莨科（Ranunculaceae）烏頭屬（Aconitum L.）多年生草本植物。該植物全株有毒，母根為川烏，母根上所附生的側(cè)根為附子。主產(chǎn)四川、陜西，云南、貴州、河北、湖南、湖北、江西、甘肅等省也有栽培。烏頭含有多種生物堿，具有抗炎、免疫抑制、麻醉止痛、抗腫瘤、強心、降血壓、擴血管等作用[1]。在農(nóng)業(yè)上有殺蟲作用[2] 。

目前，國內(nèi)外對植物內(nèi)生真菌的研究報道較多，許多來自植物的天然化合物與植物的內(nèi)生真菌有密切的關(guān)系，甚至也是內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物[3]。對烏頭的研究報道較多的是它的藥效、藥用成分的分離提取、毒性、種植、田間管理和病蟲害的防治等[4-6]。筆者對烏頭植物內(nèi)生真菌作了系統(tǒng)的研究，從內(nèi)生真菌的分離、分類鑒定到活性物質(zhì)的篩選和分離提取，以期為研究烏頭植物內(nèi)生真菌提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試植物。烏頭樣品采自昆明市云南大學微生物所栽培的烏頭植物。

1.1.2培養(yǎng)基。①分離培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基），使用前1mL培養(yǎng)基中加80IU的青霉素，以抑制細菌生長。②分類鑒定培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基和促孢培養(yǎng)基（KH₂PO₄，MgSO₄·7H₂O，KNO₃，KCl，葡萄糖，蔗糖）。

1.2試驗方法

1.2.1內(nèi)生真菌的分離培養(yǎng)。首先用自來水沖洗烏頭植物表面的泥沙，去除母根，接著進行表面消毒、分離和培養(yǎng)。方法參照文獻[7]。

1.2.2內(nèi)生真菌的分類鑒定。采用插片培養(yǎng)方法，對分離獲得的內(nèi)生真菌進行顯微形態(tài)特征的觀察、分類鑒定。分類檢索參照文獻[8，9]。

2結(jié)果與分析

2.1烏頭植物內(nèi)生真菌的種群組成

從烏頭植物中分離獲得內(nèi)生真菌164株，將其中的151株根據(jù)顯微形態(tài)觀察進行分類鑒定，歸屬于6個目9個科23個屬（見表１）。

從表１可以看出，在分離獲得的烏頭植物內(nèi)生真菌中，以毛霉屬（Mucor）、黑孢屬（Nigrospora）、頭孢霉屬（Cephalosp-orium）、芽枝霉屬（Cladosporium）和交鏈孢屬（Alternaria）較多，這５個屬為烏頭植物內(nèi)生真菌的優(yōu)勢屬。其次是木霉屬（Trichoderma）和曲霉屬（Aspergillus）。剛毛孢屬（Pleiochaeta）、頭囊聚孢霉屬（Cephaliophora）、假絲酵母菌屬（Candida）和小克銀漢霉屬（Cunninighamella）最少，均只有1株。

2.2烏頭植物不同部位內(nèi)生真菌的種群分布

在分離獲得的164株烏頭植物內(nèi)生真菌中，側(cè)根上分離的內(nèi)生真菌在數(shù)量和種群上都是最多的，有78株（占總菌株的47.56%）16個屬（占23個屬的69.57%）；其次是莖部分離的有54株（占32.93%）15個屬（占65.22%）；葉部和花上分離的內(nèi)生真菌在數(shù)量和種群上都較少，分別為17株（占10.37%）和15株（占9.15%），均是7個屬（占30.43%）（見表2）。

從表2可以看出，在側(cè)根部位分離的內(nèi)生真菌種群中，毛霉屬和木霉屬為其優(yōu)勢屬種，分別為15株和9株，各占側(cè)根部內(nèi)生真菌的19.23%和11.54%；黑孢屬和芽枝霉屬為莖部內(nèi)生真菌的優(yōu)勢屬種，分別為13株（占莖部內(nèi)生真菌的24.07%）和9株（占16.67%）；葉部內(nèi)生真菌的優(yōu)勢屬種是黑孢屬和盤多毛孢屬（Pestalotia），分別有6株（占葉部總菌株數(shù)的35.29%）和3株（占17.65%）；芽枝霉屬和毛霉屬為花部內(nèi)生真菌的優(yōu)勢屬種，均為3株，占花部內(nèi)生真菌總數(shù)的20.00%。

從表2還可以看出，毛霉屬、盤多毛孢屬、組絲核菌屬（Phacodiun）和黑孢屬在烏頭植物各部位都有分布；交鏈孢霉屬在側(cè)根、莖和花上有分布，而在葉上沒有分布；球殼孢屬（Sphaeropsis）除了在花上沒有分離獲得外，在烏頭植物的其他部位均可分離獲得；假絲酵母菌屬、木霉屬、鐮孢霉屬（Fusarium）、卷枝霉屬（Pireella）、根霉屬（Rhizopus）、葡萄孢屬（Botrytis）和小克銀漢霉屬只在側(cè)根部有分布；而剛毛孢屬和束絲菌屬（Ozonium）只在莖部才有分布；頭囊聚孢霉屬只在花上分離得到。

3結(jié)論與討論

（1）毛霉屬不僅是烏頭植物內(nèi)生真菌的優(yōu)勢種群，同時也是附子植物側(cè)根部和花部內(nèi)生真菌的優(yōu)勢屬種；而黑孢屬既是烏頭植物內(nèi)生真菌的優(yōu)勢種群，又是其莖、葉部位的優(yōu)勢屬種；芽枝霉屬則是烏頭植物及其莖、花部的優(yōu)勢種群。

（2）在烏頭植物側(cè)根、莖、葉和花等部位分離獲得的內(nèi)生真菌在數(shù)量和種群分布上存在差異，在側(cè)根部位分離獲得的內(nèi)生真菌最多，其次是莖部，在葉和花上分離獲得的內(nèi)生真菌較少，側(cè)根部和莖部的內(nèi)生真菌種群明顯多于葉部和花部。這表明烏頭植物不同部位內(nèi)生真菌在種群、數(shù)量及分布上具有多樣性特征。

（3）烏頭植物的側(cè)根就是藥用附子，本次烏頭植物內(nèi)生真菌的分離結(jié)果表明，無論在內(nèi)生真菌的數(shù)量還是在種群分布上，都是側(cè)根上分布的最多。這可能與附子中含有的藥用成分及含量有關(guān)。對以后研究烏頭植物內(nèi)生真菌的代謝產(chǎn)物及分離提取有活性物質(zhì)有指導性的作用。

4參考文獻

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[2] 陳小平，崔永三，趙博光.毛茛科殺蟲植物——烏頭[J].中國森林病蟲，2006，25（6）：26-28．

[3] 舒瑩，郭順星，張東明，等.植物內(nèi)生真菌活性成分的研究[J].中草藥，2005，36（5）：772-776.

[4] 曹小玉，劉川，彭成.90年以來附子研究的文獻定量分析[J].成都中醫(yī)藥大學學報，2004，27（3）：58-59．

[5] 陳信義，李峨，侯麗，等.烏頭類生物堿研究進展與應用前景評述[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2004，11（10）：922-923．

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[8] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海：上?？茖W技術(shù)出版社，1979．

[9] H.L巴尼特，B.B亨特.半知菌屬圖解[M].沈崇堯，譯.北京：科學出版社，1977．