李惠敏 黃丹瑩
[摘要] 目的:建立田大夫婦科膠囊的質量標準。方法:采用TLC法對處方中延胡索進行定性鑒別,并用HPLC法對處方中三七進行含量測定。結果:薄層色譜斑點清晰,專屬性強;在11.54~577.00 μg/ml范圍內呈良好線性關系(r=0.999 8);平均回收率99.71%,RSD=1.70%(n=9)。結論:該方法準確靈敏、簡便、重復性好,能有效控制該制劑的質量。
[關鍵詞] 田大夫婦科膠囊質量標準;TLC;HPLC;人參皂苷Rg1;
[中圖分類號] R927.1
[文獻標識碼] A
[文章編號] 1674-4721(2009)08(a)-050-02
田大夫婦科膠囊是由三七,延胡索,川芎,五靈脂等10味中藥組成的中藥復方制劑,適用于氣滯血瘀,癥瘕積聚,經期腹痛,月經失調。為了更好控制該制劑的質量,本文分別對處方的延胡索進行鑒別及三七進行含量測定,所實驗的質量標準方法操作簡便、結果準確,適合作為法定質量標準。
1 材料、儀器和試藥
1.1 材料
田大夫婦科膠囊及其陰性對照均由惠州市九惠制藥有限公司提供;延胡索對照藥材(批號:120928-200604),延胡索乙素對照品(批號:0726-200208),人參皂苷Rg1對照品(批號:110203-200726)均購于中國藥品生物制品檢定所。
1.2 儀器及試劑試藥
KQ-250超聲波清洗器:昆山市超聲儀器有限公司;YB-Z真空恒溫干燥箱:天津藥典標準儀器廠;瑞士Mettler AE-240及AE-200電子分析天平;Agilent 1100 Series高效液相色譜儀;CAMAG PEPROSTAR3 薄層色譜成像系統(tǒng)。
硅膠預制板:煙臺市化學工業(yè)研究所;水為雙蒸水,乙腈為色譜純,其他試劑、試藥均為分析純。
2 測定方法與結果
2.1 延胡索薄層色譜鑒別
取本品內容物1 g,加甲醇50 ml,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水10 ml使溶解,用濃氨溶液調至堿性(pH:9~10),用乙醚振搖提取3次,每次10 ml,合并乙醚液,揮干,殘渣加甲醇1 ml溶解,作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材1 g,同法制成對照藥材液。再取延胡索乙素對照品,加甲醇制成每1毫升含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述三種溶液各4 μl,分別點于同1個1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(9∶2)為展開劑,展開,展至約10 cm,取出,晾干,置碘缸中約3 min后取出,揮盡板上吸附的碘后,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應位置上,顯相同顏色熒光斑點,陰性對照無干擾。見圖1。
2.2 三七含量測定
2.2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)為流動相;檢測波長為203 nm;進樣量為10 μl;流速為1.0 ml/min。在此條件下人參皂苷Rg1與其他組分分離度大于1.5,理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算不低于3 000。
2.2.2 供試品溶液制備 取裝量差異項下內容物,混勻,取約2 g,精密稱定,置索氏提取器中,加三氯甲烷適量,加熱回流3 h,棄去三氯甲烷液,藥渣揮盡溶劑,連同濾紙筒移入100 ml離心管中,精密加水飽和的正丁醇50 ml,稱定重量,密塞,放置過夜,超聲處理1 h,放冷,用水飽和的正丁醇補足減失的重量,濾過,棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液20 ml,蒸干,殘渣加甲醇溶解并轉移至5 ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,即得[1]。
2.2.3 對照品溶液及陰性對照溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量,加甲醇制成每1毫升含人參皂苷Rg 10.2 mg的溶液,即得。取缺三七樣品,稱取相當于供試品的量,按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。
2.2.4 準確度試驗 精密稱取對照品0.050 60 g,置50 ml量瓶,加甲醇使溶解,稀釋至刻度,搖勻,作為加樣回收用人參皂苷Rg1對照品貯備液(每1毫升含人參皂苷Rg 11.012 mg)。加樣回收供試品溶液的制備:精密稱取田大夫婦科膠囊(批號20080402,平均裝量0.415 1 g,含量0.48 mg/粒)供試品約1.0 g,分別置索氏提取器中,加三氯甲烷適量,加熱回流3 h,棄去三氯甲烷液,藥渣揮盡溶劑,連同濾紙筒移入100 ml離心管中,精密加入上述加樣回收用對照品貯備液2 ml,精密加水飽和的正丁醇50 ml,稱定重量,密塞,放置過夜,超聲處理1 h,放冷,再稱定重量,用水飽和的正丁醇補足減失的重量[2],濾過,棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液20 ml,蒸干,殘渣加甲醇溶解并轉移至5 ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。結果平均回收率為99.71%,RSD=1.70%(n=9)。
2.2.5 精密度 分別由3名檢驗員在不同時間,用同一臺設備,按含量測定方法測定同一批號田大夫婦科膠囊,結果平均值為0.48 mg/粒,RSD為0.9%。
2.2.6 專屬性 精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl,分別注入高效液相色譜儀[3],按含量測定方法測定。結果未見陰性對照溶液對試驗有干擾。
2.2.7 線性 精密稱取人參皂苷Rg1對照品0.011 54 g至20 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品貯備液(577 μg/ml)。濃度1~3:精密吸取1 ml貯備液置50、20、10 ml量瓶中,加甲醇至刻度;濃度4~7:精密吸取1、2、3、4 ml貯備液置5 ml量瓶中,加甲醇至刻度;濃度8:貯備液[4]。以上8個濃度溶液注入液相色譜儀,以峰面積為縱坐標、人參皂苷Rg1濃度(μg/ml)為橫坐標,在11.54~577.00 μg/ml范圍內,得回歸方程為:Y=3.458,X=-3.733 4,r=0.999 8。
2.2.8 耐用性 取同一供試品溶液,使用不同色譜柱(Kromasil 100-5C18 250 mm×4.6 mm、phenomenex Gemini C18 250 mm×4.60 mm 5 μm、Venusil XBP-C18 4.60 mm×150 mm,5 μm),按擬定方法進行含量測定,結果不同色譜柱測得結果RSD為1.4%,表明人參皂苷Rg1含量測定結果不受色譜柱影響[5]。
2.2.9 供試品含量測定 取不同批號的田大夫婦科膠囊3批,按擬定含量測定方法測定人參皂苷Rg1的含量,結果批號20080402含量為0.482 mg/粒,批號20080505含量為0.615 mg/粒,批號20080507含量為0.750 mg/粒。
3 討論
3.1 測定波長的選擇
采用《中國藥典》2005年版(一部)三七藥材[含量測定]項下測定波長203 nm為本品測定波長。
3.2 提取方法與時間的選擇
曾嘗試11種提取方法,但以本文采用方法較為理想。分別考察超聲處理10、30、60 min提取效果,試驗結果表明超聲30 min以上樣品的含量較超聲10 min的要高,為使提取完全,選擇了提取方式為超聲60 min。
[參考文獻]
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