固相萃取-氣相色譜法同時(shí)測定花生中18種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留

朱臻怡 馮 民 何 健 熊華萱 曾 義

(淮安出入境檢驗(yàn)檢疫局，淮安 223001)

有機(jī)氯農(nóng)藥為廣譜殺蟲劑，在花生種植中被廣泛使用，在環(huán)境中容易造成殘留進(jìn)入食物鏈中而影響人體健康。隨著農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留問題的日趨嚴(yán)重和食品安全問題的國際化，發(fā)達(dá)國家和組織對花生中農(nóng)藥殘留紛紛制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)?；ㄉ鳛槲覈趪H市場中具有相對競爭優(yōu)勢的農(nóng)產(chǎn)品，其出口遭受到了一系列的SPS措施的阻礙，其中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)日趨嚴(yán)格，檢測項(xiàng)目不斷增加[1-3]。因此花生中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢測對于保障人們飲食健康及我國花生進(jìn)出口貿(mào)易具有重要意義。

目前在我國有機(jī)氯農(nóng)藥已被定為出口花生殘留監(jiān)控的項(xiàng)目。對于有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留分析，國內(nèi)外報(bào)道較多。國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)采用GC/ECD測定[4,5]，該法靈敏度高，定量準(zhǔn)確，能夠同時(shí)檢測14種和10種有機(jī)氯農(nóng)藥，但前處理自動控制程度低，提取凈化效率不高，速度慢，試劑消耗量大。農(nóng)業(yè)部制定了蔬菜和水果中有機(jī)氯農(nóng)藥多殘留檢測方法[6]。但到目前為止，國內(nèi)外尚未有花生中有機(jī)氯農(nóng)藥多殘留分析方法的報(bào)道。筆者利用氣相色譜(GC/ECD)技術(shù)對花生中18種有機(jī)氯農(nóng)藥同時(shí)測定，以乙腈提取，液-液分配和固相萃取凈化的手段，有效地降低了花生本底干擾，提高了檢測靈敏度，可滿足殘留檢測和目前國外檢測限量(MRL)的需要，提高了目前花生中有機(jī)氯農(nóng)藥的多殘留檢測能力。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀： 6890N型，配有微池電子捕獲檢測器、氮磷檢測器和Agilent G2070AA化學(xué)工作站，美國Agilent公司；

電子天平：Mettler AE240型，瑞士梅特勒公司；

均質(zhì)機(jī)：NISSEI ACE型，日本精機(jī)制作所；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：R-201型，上海申科機(jī)械研究所；

正己烷、丙酮、乙腈：農(nóng)殘級，美國Tedia公司；

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：德國Ehrenstorfer博士實(shí)驗(yàn)室和農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所；

Florisil固相萃取小柱：1 000 mg，6 mL，美國Agilent公司。

1.2 氣相色譜分析條件

色譜柱：DB-1柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；檢測器：微池電子捕獲檢測器；載氣：高純氮?dú)猓髁繛? mL/min；檢測器補(bǔ)償氣：高純氮?dú)?流量為60 mL/min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測器溫度：320℃；柱溫：初始柱溫150℃，保持2 min，以6℃/min升至270℃，保持23 min；進(jìn)樣量：1.0 μL，采用分流閥關(guān)閉30 s的不分流進(jìn)樣方式。

1.3 樣品預(yù)處理

樣品經(jīng)花生粉碎機(jī)粉碎均勻。

(1)提取

準(zhǔn)確稱取樣品25 g(精確到0.01 g)于250 mL均質(zhì)杯中，加入50 mL乙腈，均質(zhì)2 min。在100 mL具塞量筒內(nèi)放5 g氯化鈉，放一鋪有濾紙的玻璃漏斗，過濾均質(zhì)好的樣品，過濾完全后蓋上塞子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置約10 min，讓乙腈相和水相分層。準(zhǔn)確吸取10 mL乙腈相溶液(上層)放入雞心瓶中，在50℃水浴上減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。

(2)凈化

用5 mL 10%正己烷-丙酮(體積比為9∶1)對Florisil固相萃取柱(1 g)預(yù)淋洗，再加5 mL正己烷，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即將雞心瓶中用2 mL正己烷溶解的樣品溶液加到已條件化的Florisil柱上，并用15 mL離心管接收洗脫液，靠重力過柱，逐滴流下，如果流速過慢適當(dāng)加壓，使溶液成滴連續(xù)流下。用5 mL 10%正己烷-丙酮(體積比為9∶1)洗雞心瓶，當(dāng)液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，加到柱上洗脫，再用5 mL 10%正己烷-丙酮(體積比為9∶1)洗雞心瓶重復(fù)洗脫一次，將15 mL離心管接收的洗脫液放在氮吹儀(水浴溫度55℃)上，通氮?dú)饩従徴舭l(fā)至5.0 mL，用正己烷準(zhǔn)確定容至5.0 mL，然后在旋渦混合器上混勻試管中的溶液，用于GC分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱

通過試驗(yàn)考察了DB-1、DB-170l、DB-5柱的分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DB-1對有機(jī)氯農(nóng)藥分離效果較好，因此實(shí)驗(yàn)選擇DB-1柱。

2.2 提取溶劑

花生中含有大量油脂，前處理難度較大。實(shí)驗(yàn)選擇不同的溶劑提取，由添加回收試驗(yàn)比較發(fā)現(xiàn)，乙腈的提取回收率較高，且測定干擾較少，因此選擇乙腈為提取液。

2.3 固相萃取條件

比較了Florisil固相萃取小柱、氧化鋁固相萃取小柱與硅膠固相萃取小柱3種正相固相萃取小柱。通過標(biāo)準(zhǔn)溶液過柱試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)3種萃取小柱中，F(xiàn)lorisil固相萃取小柱的回收率幾乎達(dá)到100%，而氧化鋁固相萃取小柱與硅膠固相萃取小柱的回收率僅達(dá)80%左右，因此選用Florisil固相萃取小柱作為凈化小柱。由于不同柱容量的固相萃取柱對花生的凈化效果影響很大，比較了200 mg/3 mL，500 mg/3 mL和1 000 mg/6 mL 3種不同柱容量的Florisil固相萃取柱，發(fā)現(xiàn)1 000 mg/6 mLFlorisil固相萃取柱在凈化花生提取液時(shí)具有較好的凈化效果，本底干擾在ECD信號中降至最低。

洗脫劑的選擇直接關(guān)系到測定結(jié)果的回收率，由于待測的18種有機(jī)氯農(nóng)藥的極性范圍較寬，單一溶劑不能將待測組分洗脫完全，通過試驗(yàn)比較了不同體積比的正己烷-丙酮溶液，發(fā)現(xiàn)當(dāng)正己烷與丙酮的體積比為9∶1時(shí)洗脫效果較好。對于濃度范圍在0.010～0.500 mg/L的有機(jī)氯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，10 mL左右的淋洗液用量回收率達(dá)到90%以上，因此柱凈化過程選擇10 mL正己烷-丙酮(體積比9∶1)洗脫液。

2.4 工作曲線、線性范圍與檢測限

根據(jù)已檢結(jié)果，選用3份陰性未加有機(jī)氯樣品進(jìn)行分析，以陰性樣品在保留時(shí)間前后0.5 min的噪音的標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍相應(yīng)值所對應(yīng)的濃度為方法的檢出限。分別取一定濃度的系列有機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行氣相色譜分析，以色譜峰面積(X)對標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(Y)作圖進(jìn)行線性回歸，各有機(jī)氯農(nóng)藥組分的線性方程、線性范圍與檢出限列于表1。

表1 各有機(jī)氯農(nóng)藥工作曲線方程、線性范圍和檢測限

2.5 單組分測試的添加回收率與精密度試驗(yàn)

選取花生陰性樣品，在其中分別添加一定濃度水平的18種有機(jī)氯農(nóng)藥單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，各水平平行測定5次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表2。各有機(jī)氯農(nóng)藥組分回收率均能滿足檢測要求。

2.6 多組分測試的添加回收率與精密度試驗(yàn)

在花生樣品中分別添加一定濃度水平的有機(jī)氯農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，各水平平行測定5次，測定結(jié)果列于表3。表3試驗(yàn)結(jié)果表明，方法平均回收率為71.28%～116.58%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.08%～18.16%?？瞻讟悠纷V圖和檢出限添加水平的18種有機(jī)氯農(nóng)藥譜圖分別見圖1、圖2。

由表2、表3結(jié)果可知，回收率與精密度數(shù)據(jù)符合國家規(guī)定殘留分析對準(zhǔn)確度與精密度的要求，從而說明該方法具有可靠性與可行性。

表2 單組分有機(jī)氯農(nóng)藥回收和精密度試驗(yàn)結(jié)果

表3 多組分有機(jī)氯農(nóng)藥回收和精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

圖1 花生空白色譜圖

為了了解影響方法回收率的主要因素，在方法的驗(yàn)證過程中應(yīng)用了“倒推式”驗(yàn)證方法，即通過添加回收試驗(yàn)，一次從方法的最后一個(gè)步驟到第一個(gè)步驟驗(yàn)證其回收率，從而分析出影響回收率的主要步驟，進(jìn)而有所側(cè)重地改善方法，以提高方法的回收率。通過多次驗(yàn)證試驗(yàn)，該方法中影響回收率的主要步驟在于樣品提取，因此，該方法通過減少提取步驟而提高了回收率。

1—五氯硝基苯； 2—林丹； 3—艾氏劑； 4—百菌清；5—毒死蜱； 6—三氯殺螨醇； 7—三唑酮； 8—P,P′-DDE； 9—狄氏劑； 10—異狄氏劑； 11—O,P′-DDT； 12—P,P′-DDD；13—P,P′-DDT； 14—甲氰菊酯； 15—氯氟氰菊酯； 16—氟氯氰菊酯； 17—氰戊菊酯； 18—溴氰菊酯

3 結(jié)語

采用固相萃取-氣相色譜法對花生中18種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行分析，有機(jī)氯農(nóng)藥組分在給定的色譜條件下得到了較好的分離。從線性范圍、檢測限、準(zhǔn)確度、精密度等方面進(jìn)行了優(yōu)化驗(yàn)證，該方法對實(shí)際樣品分析的檢出限為10 μg/kg(氟氯氰菊酯和溴氰菊酯的檢出限分別為50和100 μg/kg)，方法的準(zhǔn)確度與精密度符合相關(guān)要求。該方法具有靈敏、快速、簡便等特點(diǎn)，能夠滿足實(shí)際應(yīng)用的需要。

[1] 葛志榮，李元平，黃冠勝，等.食品中農(nóng)業(yè)化學(xué)品殘留限量[M].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)化出版社，2006.

[2] 林維宣.各國食品中農(nóng)藥獸藥殘留限量規(guī)定[M].大連：大連海事大學(xué)出版社，2002.

[3] 曾義，胡進(jìn)，余兵，等.出口食品的SPS措施遭遇及其對策[J].中國標(biāo)準(zhǔn)化，2005(12)：118-121.

[4] SN 0497-95 出口茶葉中多種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢驗(yàn)方法[S].

[5] GB/T 5009.146-2003 植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留的測定[S].

[6] NY/T 761 無公害食品 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定[S].