康四和， 周 銳， 聶 晶

(湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，湖北武漢430064)

小兒消積止咳口服液由山楂、檳榔、枳實、枇杷葉等藥味組成，具有清熱理肺、消積止咳等作用，為山東魯南厚普制藥有限公司生產(chǎn)小兒用藥，原標準采用HPLC法測定枳實中辛弗林的含量。據(jù)文獻［1］報道，橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷等黃酮類成分是枳實中主要的活性成分，能抑制胃腸平滑肌收縮，緩解胃腸積滯。對枳實中橙皮苷、柚皮苷等成分研究文獻有報道［2-4］，但同時測定本品種中多種黃酮類成分含量，文獻尚未見報道。本實驗建立了HPLC法測定小兒消積止咳口服液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量。同時為了評價本品種不同批次樣品質量差異，本實驗對多批樣品測定結果進行了比較，具體實驗方法如下:

1 儀器與試藥

戴安Ultimate-3000高效液相色譜儀;大連依利特Hypersil ODS2液相色譜柱(200 mm×4.6mm;5μm);柚皮苷、橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:柚皮苷 110722-200610，橙皮苷110721-200613)，新橙皮苷對照品(上海融禾醫(yī)藥科技有限公司，批號:091225);乙腈為色譜純，水為重蒸水;其他試劑為分析純;小兒消積止咳口服液(山東魯南厚普藥業(yè)有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:大連依利特Hypersil ODS2色譜柱(200 mm×4.6 mm;5 μm);流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80);檢測波長:λ=283 nm;流速:1 mL/min;柱溫:35℃。

2.2 測定波長的選擇 取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷對照品適量，加甲醇溶解，在紫外檢測儀上于200～600 nm波長范圍內掃描，結果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分別在283 nm、284 nm、284 nm波長處有最大吸收，依據(jù)參考文獻［5］，選擇 λ283 nm作為測定波長。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷0.4 mg、橙皮苷0.1 mg、新橙皮苷0.4 mg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品，精密吸取1 mL，加甲醇至10 mL，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性干擾試驗 取不含枳實的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備，依法測定，結果陰性樣品在柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰相應的位置上無吸收峰，表明其他藥對測定無干擾。見圖1。

圖1 對照品、樣品和陰性樣品HPLC色譜圖

2.5 線性關系考察 精密稱取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷0.421 mg、橙皮苷0.102 2 mg、新橙皮苷0.440 mg的混合溶液，作為對照品溶液。分別精密吸取1、3、5、8、10、20 μL，注入高效液相儀，測定峰面積。以峰面積為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程:柚皮苷 Y=235.963 8X+4.603 7，r=0.999 0。橙皮苷 Y=321.514 1X+0.099 0，r=0.999 9。新橙皮苷 Y=272.508 4X+2.889 8，r=0.999 7。

結果表明柚皮苷對照品在0.042 1～0.842 μg、橙皮苷對照品在0.010 22～0.204 4 μg、新橙皮苷對照品在0.044 0～0.880 μg范圍內呈良好線性關系。

2.6 精密度試驗 精密吸取線性關系考察項下同一混合對照品溶液5 μL，重復進樣6次，測定峰面積，結果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰面積積分值RSD分別為0.52%、1.07%、0.27%，具有較好的精密度。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液(批號09103025)，分別于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 各測定1次，結果柚皮苷RSD=1.00%，橙皮苷RSD=0.78%，新橙皮苷RSD=1.15%，表明供試品溶液在24 h內基本穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 分別精密吸取同一批號(批號09103025)的樣品6份，每份1 mL，按供試品溶液制備方法制備，依法測定，結果樣品中柚皮苷的平均含量為4.094 mg/mL，RSD=0.71%;橙皮苷的平均含量為0.680 mg/mL，RSD=0.67%;新橙皮苷的平均含量為4.194 mg/mL，RSD=0.76%。表明本法重復性良好。

2.9 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品(批號09103025)6份，每份0.5 mL，分別精密加入柚皮苷對照品(0.616 8 mg/mL)3 mL，橙皮苷對照品(0.157 0 mg/mL)2 mL，新橙皮苷對照品(0.754 4 mg/mL)3 mL，精密加入甲醇至10 mL，搖勻，依法測定，計算回收率，結果見表1～3。由表可知，本法具有較好的回收率。

2.10 樣品含量測定 取樣品，精密吸取1 mL，按2.3.2項制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液及對照品溶液各5 μL，按2.1項色譜條件進行測定，測定結果見表4。

3 討論

3.1 化學成分是治療疾病的物質基礎，本實驗對該品種20批樣品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷3種成分的含量進行了測定，結果柚皮苷、新橙皮苷含量相對較高，平均分別為4.882 mg/mL、4.843 mg/mL，橙皮苷含量較低，平均為0.656 mg/mL。但部分批次含量差別較大，有的甚至超出均值一倍以上，說明本品種在藥材來源、生產(chǎn)工藝等方面有待加強控制，以保證產(chǎn)品質量的穩(wěn)定。

表1 柚皮苷回收率試驗結果

表2 橙皮苷回收率試驗結果

表3 新橙皮苷回收率試驗結果

表4 樣品含量測定結果(n=3)

3.2 本實驗曾采用甲醇—水系統(tǒng)作為流動相，結果樣品分離效果不太好。后改用乙腈—水—磷酸系統(tǒng)，能顯著的改善峰形，3種成分在同一色譜條件下較好地得到了分離，經(jīng)對流動相比例進行調整，考慮到分離效果及出峰時間因素，最后確定流動相為乙腈—0.1%磷酸溶液(20∶80)。

3.3 小兒消積止咳口服液原標準含量測定方法為采用HPLC法測定枳實中辛弗林的含量，該方法操作較為復雜，測定成分單一，本實驗建立了能夠同時測定樣品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷3種成分的含量測定方法，可以對本品種質量進行更全面的評價，體現(xiàn)了一法多測的分析理念。經(jīng)研究柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷在所選用條件下分離較好，檢測靈敏度高，測定專屬性強，陰性無干擾，可以更好地控制和評價該品種的質量。

［1］張尚英.枳實、枳殼類藥材質量分析的新進展［J］.海峽藥學，2004，16(5):13-14.

［2］李秀玲，李 龍，肖紅斌，等.反相高效液相法測定枳實、枳殼中橙皮甙和柚皮甙的含量［J］.色譜，2002，20(6):585-589.

［3］謝貞建，焦士蓉，李 愷，等.RP-HPLC法測定不同產(chǎn)地枳實中的柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷［J］.西華大學學報:自然科學版，2009，28(2):65-67.

［4］郭麗紅，鄭國鈞，苗愛東，等.高效液相色譜法測定解表清肺丸中柚皮苷、橙皮苷、黃芩苷的含量［J］.藥物分析雜志，2009，29(9):1493-1495.

［5］中國藥典［S］.一部.2010:229.