2-甲氧雌二醇對(duì)食管癌細(xì)胞系的數(shù)目、形態(tài)、細(xì)胞周期以及誘導(dǎo)凋亡方面的作用

2-甲氧雌二醇（2－ME）是體內(nèi)雌二醇的正常代謝產(chǎn)物之一，大量研究表明2－ME在各種腫瘤和非腫瘤細(xì)胞中能夠抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡，是一種細(xì)胞分裂拮抗劑和微管蛋白毒素。因此，這種內(nèi)源性的雌二醇代謝物有可能是一種潛在的抗癌藥物。由于2－ME的作用機(jī)制是多方面的，并且隨細(xì)胞種類的不同而不同，因此本研究的目的是通過(guò)檢測(cè)2－ME對(duì)細(xì)胞數(shù)目、形態(tài)、細(xì)胞周期以及凋亡誘導(dǎo)等方面的影響來(lái)探討它對(duì)食管癌細(xì)胞系（WHCO3）的作用機(jī)制。

WHCO3 細(xì)胞與不同濃度的 2-ME（10-6、10-7、10-8、10-9mol/L）作用72 h后，細(xì)胞數(shù)目表示為占對(duì)照組的百分?jǐn)?shù)。結(jié)果為在10-6mol/L時(shí)，2-ME使細(xì)胞數(shù)目顯著降低至對(duì)照組的60%，而其他濃度組的細(xì)胞數(shù)目與對(duì)照組比較差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本實(shí)驗(yàn)采用PI和HO染色法來(lái)檢測(cè)2-ME（10-6mol/L）處理后的凋亡細(xì)胞。結(jié)果顯示大部分細(xì)胞被染成淡藍(lán)色，變圓，并且顯示出細(xì)胞皺縮發(fā)泡以及凋亡小體等特征。HE染色也出現(xiàn)了以上結(jié)果。透射電子顯微鏡在亞細(xì)胞水平上也出現(xiàn)了染色質(zhì)皺縮、不規(guī)則核膜及線粒體向核方向聚集等現(xiàn)象。為確定經(jīng)10-6mol/L的2-ME處理24 h后的WHCO3細(xì)胞其細(xì)胞周期進(jìn)程的變化情況，實(shí)驗(yàn)采用流動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)法來(lái)定量的分析DNA。結(jié)果顯示在G2/M相的細(xì)胞數(shù)目明顯增多，阻止了細(xì)胞周期的進(jìn)程。

由于之前的研究表明2-ME在其他細(xì)胞系是通過(guò)破壞微管和將細(xì)胞周期止于中期而致使細(xì)胞死亡的，因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)微管蛋白進(jìn)行免疫熒光染色來(lái)探討2-ME在WHCO3細(xì)胞中對(duì)紡錘體形成的影響。結(jié)果表明經(jīng)2-ME處理后的細(xì)胞變圓，處于細(xì)胞中期細(xì)胞累積并且紡錘體的形成被破壞。為了檢驗(yàn)經(jīng)2-ME處理后，是否觸發(fā)了外源性凋亡通路，本實(shí)驗(yàn)選DR5作為標(biāo)志物，進(jìn)行免疫熒光染色檢測(cè)后，DR5的表達(dá)上調(diào)，說(shuō)明2-ME誘導(dǎo)的凋亡機(jī)制的確是通過(guò)外源性凋亡通路。

已有的研究表明2-ME在誘導(dǎo)凋亡中起到了非常重要的作用，特別是在一些活躍增殖的癌細(xì)胞中。本實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論：2-ME對(duì)于WHCO3食管癌細(xì)胞系具有抗增殖活性。