南敏倫,赫玉芳,趙雪嬌,初洪波,趙全成

(吉林天藥現(xiàn)代中藥科技有限公司,吉林長(zhǎng)春130012)

尾葉香茶菜(Rabdosia excisa)系唇形科香茶菜屬植物,又名龜葉草、狗日草、野蘇子等,全草入藥,性味苦涼,具有清熱解毒、健胃活血之功效,主治胃炎、腹脹、經(jīng)閉、癌癥初期、蛇咬傷等。在朝鮮多被用來(lái)治療傷風(fēng)感冒和咽喉腫痛。尾葉香茶菜的植物資源分布很廣,主要分布在東北[1]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)該屬的化學(xué)成分研究較多,吉林大學(xué)桂明玉等[2]從尾葉香茶菜中分離得到 4個(gè)貝殼杉型二萜類(lèi)新化合物exeisanin H、I、J、K及8個(gè)貝殼杉型二萜類(lèi)已知化合物。二萜類(lèi)化合物為香茶菜屬植物典型特征性成分,具有抗腫瘤、抗菌消炎、抗氧化及保護(hù)心血管等作用[3]。筆者在參考以前研究的基礎(chǔ)上對(duì)尾葉香茶菜總二萜類(lèi)成分的抗腫瘤活性進(jìn)行了研究[4]。本實(shí)驗(yàn)以體外、體內(nèi)方法,觀察尾葉香茶菜總二萜類(lèi)成分對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞、小鼠S移植性實(shí)體瘤的作用,以對(duì)其抗腫瘤機(jī)理進(jìn)行探討,為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 細(xì)胞 MCF-7(人乳腺癌細(xì)胞),NCI-H446(人小細(xì)胞肺癌),MGC-803(人胃癌細(xì)胞),Swillc(人結(jié)腸癌細(xì)胞),CEN-2(人鼻咽癌細(xì)胞),SGC-7901(人胃癌細(xì)胞),K562(人紅白血病細(xì)胞),A375-S2(人黑色素瘤細(xì)胞),Hela(人宮頸癌細(xì)胞),BEL-7204(人肝癌細(xì)胞)、HL-60(人白血病細(xì)胞),均購(gòu)自吉林省腫瘤醫(yī)院。

1.2 動(dòng)物 S180等4種腫瘤腹水傳代小鼠,均購(gòu)自吉林省腫瘤研究所。昆明種小鼠,體重18～22 g,購(gòu)自高新區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.3 試藥 尾葉香茶菜總二萜由吉林天藥現(xiàn)代科技有限公司中藥化學(xué)室提供;四甲基偶氮唑鹽(MTT)、青霉素G鉀鹽、硫酸鏈霉素、HEPES和DMSO為Sigma公司產(chǎn)品;胰酶為Difco產(chǎn)品;新生牛血清(FBS)為北京元亨圣馬生物技術(shù)研究所產(chǎn)品;RPMI-1640培養(yǎng)基為Hyclone產(chǎn)品;注射用環(huán)磷酰胺,規(guī)格為200 mg/支,批號(hào)為20080102,上海華聯(lián)制藥有限公司產(chǎn)品。

1.4 儀器 CK2TRC-3熒光倒置顯微鏡,OLYMPUS-日本產(chǎn)品;D-63450-CO2培養(yǎng)箱,Hera-德國(guó)產(chǎn)品; FCANF129004酶標(biāo)儀為T(mén)ECAN-澳大利亞產(chǎn)品;電子天平,型號(hào)為酶特勒-托利多AB204-N。

2 方法

2.1 體外抗腫瘤活性的檢測(cè)[5-6]將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞消化,離心,記數(shù),以1×105個(gè)/mL密度接種于96孔培養(yǎng)板中,每孔100 μ L,培養(yǎng)24 h后,加入濃度梯度藥物,同時(shí)設(shè)溶劑對(duì)照和空白對(duì)照,培養(yǎng)44 h后,每孔加入20 μ L MTT(5 mg/mL),再培養(yǎng)4 h,棄上清,每孔加入150 μ L二甲基亞砜,振蕩10min,應(yīng)用酶標(biāo)儀于492 nm處測(cè)OD值。

2.2 體內(nèi)抗腫瘤活性的檢測(cè)[7-9]實(shí)驗(yàn)用小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(ig蒸餾水 200 mL/kg)、環(huán)磷酰胺(ig 20 mg/kg)、尾葉香茶菜總二萜(ig 2,1,0.5 g/kg),選取移植腫瘤7 d,腫瘤生長(zhǎng)良好、腹部隆起明顯的小鼠,腹部皮膚消毒,用一次性無(wú)毒采血器經(jīng)腹壁刺入腹腔,抽取腹水,放入無(wú)菌燒杯中以生理鹽水稀釋成1∶3的癌細(xì)胞混懸液,于每只小鼠右腋下接種0.2 mL,各組動(dòng)物于接種腫瘤次日開(kāi)始給藥,每日1次,連續(xù)給藥10 d。給藥結(jié)束后,將動(dòng)物稱(chēng)重后處死,剝離腫塊稱(chēng)重,比較各組腫瘤生長(zhǎng)情況(各組動(dòng)物初始數(shù)目均為10只,表中所列動(dòng)物數(shù)均為去除死亡動(dòng)物后剩余的數(shù)目)。

3 結(jié)果

3.1 尾葉香茶菜總二萜對(duì)體外11種腫瘤細(xì)胞的抑制作用 尾葉香茶菜總二萜對(duì)11種腫瘤細(xì)胞均具有較強(qiáng)的抑制生長(zhǎng)作用并具有明顯的量效關(guān)系,其中對(duì)BEL-7204、MCF-7、CEN-2、HL-60作用最為顯著。尾葉香茶菜總二萜在濃度達(dá)16 μ g/mL時(shí)對(duì)BEL-7204等6個(gè)細(xì)胞的抑制率達(dá)85%以上。見(jiàn)表1。

表1 MTT法測(cè)定11種腫瘤細(xì)胞的抑制率 %

3.2 尾葉香茶菜總二萜對(duì)小鼠S180、HepA、U14和EAC腫瘤細(xì)胞的影響 見(jiàn)表2～表5。

表2 尾葉香茶菜總二萜對(duì)小鼠S180瘤重的影響

表3 尾葉香茶菜總二萜對(duì)小鼠HepA瘤重的影響

表4 尾葉香茶菜總二萜對(duì)小鼠U14瘤重的影響

表5 尾葉香茶菜總二萜對(duì)小鼠EAC瘤重的影響

4 討論

大量藥理及臨床研究表明,尾葉香茶菜的提取物具有有效的抗腫瘤作用,特別是總二萜類(lèi)成分,能提高機(jī)體的免疫功能,用于癌癥的輔助治療中,具有毒副作用小、安全性高、抑瘤效果好等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,尾葉香茶菜總二萜類(lèi)成分能抑制小鼠S180、HepA、U14和EAC實(shí)體瘤的生長(zhǎng),具有確切的體內(nèi)抗腫瘤作用。有關(guān)二萜類(lèi)化合物的抗腫瘤機(jī)制主要可以從以下方面推測(cè)。首先,二萜類(lèi)化合物可以誘導(dǎo)細(xì)胞的ROS生成增強(qiáng),同時(shí)影響細(xì)胞內(nèi)GSH-Px和CAT的表達(dá),而影響細(xì)胞的增殖。另外,二萜類(lèi)化合物也可能通過(guò)對(duì)細(xì)胞內(nèi)拓樸異構(gòu)酶、微管蛋白活性、癌基因及抑癌基因和對(duì)多藥耐藥的調(diào)節(jié)等影響腫瘤細(xì)胞的增殖、分化,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

綜上,本研究證明尾葉香茶菜來(lái)源的二萜類(lèi)化合物具有抗腫瘤活性,并篩選出了有效的抗腫瘤成分,但尾葉香茶菜來(lái)源的二萜類(lèi)化合物抗腫瘤機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究[10]。

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